RATA-RATA: RASIONAL, PENYEDIAAN, PENGGUNAAN DAN BATASAN - BIOLOGI - 2026

The OF atau glukosa penapaian sederhana ialah agar separa pepejal yang direka khas untuk kajian oksidatif dan metabolisme penapaian karbohidrat dalam golongan yang penting mikroorganisma selain daripada Enterobacteriaceae, dipanggil bukan enteric Gram negatif riba.

Ia dicipta oleh Hugh dan Leifson; penyelidik ini menyedari bahawa kaedah konvensional untuk mengkaji pengeluaran asid dari karbohidrat tidak sesuai untuk kumpulan bakteria ini.

A. Dasar komersial medium. B. Tiub dengan biji sederhana. Sumber: Foto A dan B yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil.

Ini kerana batang Gram negatif bukan enterik umumnya menghasilkan jumlah asid yang rendah, tidak seperti Enterobacteriaceae.

Dalam pengertian ini, medium OF mempunyai ciri khas yang dapat mengesan sejumlah kecil asid yang terbentuk, baik melalui jalan oksidatif dan fermentasi. Perbezaan ini berkaitan dengan jumlah pepton, karbohidrat dan agar.

Medium ini mengandungi lebih sedikit pepton dan kepekatan karbohidrat yang lebih tinggi, sehingga mengurangkan produk yang mengalkali medium sebagai hasil metabolisme protein dan meningkatkan pengeluaran asid kerana penggunaan karbohidrat.

Sebaliknya, penurunan jumlah agar lebih senang menyebarkan asid yang dihasilkan di seluruh medium, selain memungkinkan kita memerhatikan pergerakan.

Medium OF terdiri daripada peptone, sodium chloride, bromothymol blue, dipotassium fosfat, agar, dan karbohidrat. Karbohidrat yang paling biasa adalah glukosa tetapi yang lain boleh digunakan mengikut mana yang ingin dikaji, seperti laktosa, maltosa, xilosa, antara lain.

Asas

Seperti mana-mana medium kultur, medium OF mesti mengandungi bahan-bahan nutrien yang menjamin pertumbuhan bakteria; bahan ini adalah peptone.

Sebaliknya, karbohidrat membekalkan tenaga dan pada masa yang sama berfungsi untuk mengkaji tingkah laku mikroorganisma terhadapnya, iaitu, membolehkan bakteria diklasifikasikan sebagai organisma oksidatif, fermentasi atau bukan sakarolitik.

Medium OF mengandungi nisbah peptone / karbohidrat 1: 5 berbanding media konvensional 2: 1. Ini memastikan bahawa jumlah amina alkali yang terbentuk daripada penurunan peptone tidak meneutralkan pembentukan asid lemah.

Sebaliknya, media mengandungi natrium klorida dan dipotassium fosfat. Sebatian ini secara osmotik menstabilkan medium dan mengatur pH masing-masing. Biru bromotimol adalah penunjuk pH, yang mengubah warna medium dari hijau menjadi kuning dengan penghasilan asid.

Sebilangan mikroorganisma boleh menggunakan karbohidrat melalui kaedah oksidatif atau penapaian, sementara yang lain tidak mengambil jalan sama ada.

Ini bergantung pada ciri-ciri setiap mikroorganisma. Sebagai contoh, beberapa mikroorganisma aerobik yang ketat dapat mengoksidakan karbohidrat tertentu, dan anaerob fakultatif dapat mengoksidasi dan fermentasi bergantung pada persekitaran di sekitarnya, sementara yang lain tidak mengoksidasi atau memfermentasi karbohidrat (asacarolytic).

Akhirnya, terdapat pengubahsuaian medium OF yang disyorkan oleh CDC yang mengandungi pangkalan OF khas dengan fenol merah sebagai petunjuk.

Proses pengoksidaan

Proses pengoksidaan glukosa tidak memerlukan fosforilasi glukosa, begitu juga dengan proses penapaian. Dalam kes ini, kumpulan aldehid dioksidakan menjadi kumpulan karboksil, menghasilkan asid glukonat. Ini seterusnya dioksidakan menjadi 2-ketogluconic.

Yang terakhir sama ada terkumpul atau dipecah menjadi dua molekul asid piruvik. Sistem ini memerlukan kehadiran oksigen atau sebatian anorganik sebagai akseptor elektron akhir.

Penghasilan asid melalui laluan ini lebih lemah daripada yang dihasilkan oleh kaedah penapaian.

Proses penapaian

Agar fermentasi glukosa berlaku melalui mana-mana laluan yang ada, pertama kali mesti difosforilasi, menjadi glukosa-6-fosfat.

Fermentasi glukosa dapat mengambil beberapa laluan, yang utama adalah laluan Embden-Meyerhof-Parnas, tetapi mereka juga dapat mengambil rute Entner-Doudoroff, atau rute monofosfat hexose Warburg-Dickens, juga dikenal sebagai penurunan pentosa.

Laluan yang dipilih akan bergantung pada sistem enzimatik yang dimiliki oleh mikroorganisma.

Melalui Embden-Meyerhof- Parnas

Dalam fermentasi glukosa melalui laluan Embden-Meyerhof-Parnas, ia dipecah menjadi dua molekul triose, untuk kemudiannya terdegradasi menjadi pelbagai sebatian karbon, hingga terbentuknya gliseraldehid-3-fosfat. Dari situ bahan perantaraan berasal, iaitu asid piruvik.

Dari situ akan terbentuk pelbagai jenis asid campuran yang boleh berbeza-beza dari satu spesies ke spesies yang lain.

Sistem ini berlaku semasa ketiadaan oksigen dan memerlukan sebatian organik sebagai akseptor elektron akhir.

Laluan Entner-Doudoroff

Dalam fermentasi glukosa melalui jalur Entner-Doudoroff, glukosa 6-fosfat menjadi glukono-ᵼ-lakton-6-fosfat dan dari situ ia dioksidakan menjadi 6-fosfoglukonat dan 2-keto-3-deoksi-6- phosphogluconate, untuk akhirnya membentuk asid piruvik. Laluan ini memerlukan oksigen untuk glikolisis berlaku.

Jalur degradasi Pentoses atau laluan monophosfat Warburg-Dickens Hexoxa

Laluan ini adalah gabungan antara 2 di atas. Ia bermula serupa dengan jalur Entner-Doudoroff, tetapi kemudian gliseraldehid-3-fosfat terbentuk sebagai pendahulu asid piruvik, seperti yang berlaku di jalur Embden-Meyerhof-Parnas.

Penyediaan

Untuk menimbang:

2 g peptone

5 g natrium klorida

10 g D-glukosa (atau karbohidrat yang akan disediakan)

0.03 g biru bromotimol

3 gr agar-agar

0.30 g dipotassium fosfat

1 liter air suling.

Campurkan semua sebatian kecuali karbohidrat dan larutkan dalam 1 liter air suling. Panaskan dan goncangkan hingga larut sepenuhnya.

Pada penyejukan hingga 50 ° C, 100 ml glukosa 10% (ditapis) ditambahkan.

Sebarkan 5 ml medium OF secara aseptik ke dalam tabung uji kapas dan autoklaf pada suhu 121 ° C, tekanan 15 paun selama 15 minit.

Biarkan padat pada kedudukan menegak.

PH medium mestilah 7.1 Warna media yang disediakan berwarna hijau.

Simpan di dalam peti sejuk.

Permohonan

Medium OF adalah media khas untuk menentukan tingkah laku metabolik mikroorganisma terhadap karbohidrat. Terutama bagi mereka yang membentuk sedikit, lemah atau tidak ada asid.

Disemai

Untuk setiap mikroorganisma, 2 tiub OF diperlukan, kedua-duanya mesti disuntik dengan mikroorganisma yang akan dikaji. Koloni diambil dengan pegangan lurus dan tusukan dibuat di bahagian tengah tiub tanpa mencapai bahagian bawah; Beberapa tusukan boleh dilakukan, asalkan tidak ada minat untuk memerhatikan pergerakan.

Lapisan petrolatum cair steril atau parafin lebur steril (kira-kira 1 hingga 2 ml) ditambahkan ke salah satu tiub dan diberi label dengan huruf "F". Tiub yang lain dibiarkan asli dan dilabel "O". Kedua-dua tiub diinkubasi pada suhu 35 ° C dan diperhatikan setiap hari hingga 3 hingga 4 hari.

Tafsiran

Metabolisme dan pengeluaran gas

Jadual: Klasifikasi mikroorganisma mengikut kelakuannya dalam tiub terbuka (oksidatif) dan tertutup (fermentatif)

Sumber: Dibuat oleh pengarang MSc. Marielsa gil

Gas diperhatikan dengan pembentukan gelembung atau perpindahan agar.

Harus diingat bahawa organisma yang hanya mengoksidakan glukosa tetapi tidak fermentasinya, tidak akan dapat fermentasi karbohidrat lain, bagaimanapun, ia hanya akan mengoksidakannya. Oleh itu, dalam keadaan ini tiub tertutup untuk kajian karbohidrat lain akan dihilangkan.

Keupayaan

Selain itu, pergerakan dapat dilihat pada medium OF.

Motilitas positif : pertumbuhan yang tidak terhad pada kawasan inokulasi. Terdapat pertumbuhan ke arah sisi tiub.

Motilitas negatif : pertumbuhan hanya pada inokulum awal.

QA

Strain berikut dapat digunakan sebagai kawalan kualiti: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa dan Moraxella sp. Hasil yang diharapkan adalah:

1. coli: Fermenter glukosa (kedua-dua tiub kuning dan berkilau).
2. aeruginosa: Pengoksida glukosa (tiub kuning terbuka dan meterai hijau atau biru).
3. Moraxella sp: Bukan sakarolitik (tiub terbuka hijau atau biru, tiub tertutup hijau).

Batasan

-Beberapa mikroorganisma tidak dapat tumbuh dalam medium OF. Dalam kes ini, ujian diulang tetapi 2% serum atau 0.1% ragi ditambahkan ke medium.

- Reaksi oksidasi sering hanya dilihat dekat dengan permukaan dan selebihnya medium boleh kekal hijau, dengan cara yang sama ia dianggap positif.

Rujukan

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
4. Makmal Francisco Soria Melguizo. 2009. OF Glucose Medium. Terdapat di: http://f-soria.es
5. Makmal Conda Pronadisa. Medium glukosa. Terdapat di: condalab.com
6. Makmal BD. 2007. OF Basal Medium. Terdapat di: bd.com