MEDIO MIO: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The MIO sederhana adalah ujian biokimia digunakan untuk membantu dalam mengenal pasti spesies bakteria yang dipunyai oleh keluarga Enterobacteriaceae itu. Ia cukup berkhasiat dan terdiri dari glukosa, ekstrak ragi, peptone, triptein, L-ornithine hidroklorida, bromokresol ungu, dan agar.

Makna akronimnya (MIO) menerangkan setiap parameter yang dapat diperhatikan dalam media ini; pergerakan, indole dan ornithine. Motilitas adalah kemampuan mikroorganisma untuk bergerak kerana adanya flagella. Agar sifat ini dapat diperhatikan, konsistensi medium mestilah separuh padat, jadi penyediaannya mengandungi lebih sedikit agar.

Garis besar tafsiran hasil dalam medium MIO. Sumber: Disediakan oleh pengarang MSc. Marielsa gil

Penghasilan indol menunjukkan adanya enzim triptofanase yang bertindak pada asam amino triptofan, yang memerlukan penggunaan reagen yang mendedahkan agar penghasilan indol dapat dilihat.

Akhirnya, ornithine menentukan apakah bakteria dapat menguraikan asid amino, iaitu jika ia mempunyai enzim orinithine decarboxylase.

Asas

Peptone, ekstrak ragi dan triptein

Unsur-unsur ini menyumbang kepada daya pemakanan medium ini. Mereka berfungsi sebagai sumber nutrien dan asid amino penting untuk pengembangan bakteria.

Di samping itu, triptein adalah sumber triptofan untuk menunjukkan kehadiran enzim triptofanase, yang merosakkan triptofan dengan deaminasi reduktif, melepaskan indol, asid piruvik, amonia dan tenaga.

Indole tidak berwarna, oleh itu kehadirannya dinyatakan dengan menambahkan lima tetes reagen Ehrlich atau Kovacs, keduanya dengan p-dimethylaminobenzaldehyde.

Kumpulan aldehid sebatian ini bertindak balas dengan indol, menghasilkan produk merah fuchsia berbentuk cincin di permukaan agar.

Sebarang jejak warna harus dianggap sebagai ujian positif. Buktinya harus segera dibaca, kerana lama-kelamaan warnanya merosot.

Selanjutnya, ujian ini harus dinyatakan setelah motilitas dan keputusan dekarboksilasi ornithine diperhatikan.

Tafsiran

Ujian positif: pembentukan cincin merah fuchsia ketika menambahkan titisan reagen Kovacs.

Ujian negatif: tidak ada pembentukan cincin.

Keupayaan

Keupayaan bakteria bergerak akan terbukti jika media berawan diperhatikan atau jika terdapat garis pertumbuhan tebal yang berkembang di sekitar inokulasi awal.

Uji pergerakan negatif akan dibuktikan dengan memerhatikan garis pertumbuhan yang tipis, dan semua yang ada di sekitarnya akan tanpa pertumbuhan.

Adalah penting bahawa pergerakan dibaca sebelum indol dinyatakan, kerana penambahan reagen mengaburkan seluruh medium.

Pada bakteria bergerak tetapi lambat tumbuh sukar untuk menunjukkan motilitasnya dengan medium ini. Dalam kes ini, disarankan untuk menggunakan ujian atau kaedah lain, seperti pergerakan sederhana atau kaedah penundaan.

Glukosa

Glukosa adalah karbohidrat yang boleh ditapai yang, selain memberikan tenaga, mengasidkan persekitaran, keadaan yang diperlukan untuk dekarboksilasi asid amino ornithine berlaku.

Fermentasi glukosa mesti selalu berlaku, bermula dari prinsip bahawa semua bakteria yang tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae fermentasi glukosa.

L-Ornithine

Sekiranya bakteria menghasilkan enzim ornithine decarboxylase, ini boleh bertindak setelah media diasidkan oleh fermentasi glukosa.

Enzim ornithine decarboxylase bertindak pada kumpulan karboksil asid amino menghasilkan amina yang disebut putresine yang mengalkali semula medium.

Ujian ini harus dibaca setelah 24 jam inkubasi, kerana jika anda cuba membaca sebelum anda dapat salah menafsirkan ujian dengan negatif palsu.

Perlu diingat bahawa reaksi pertama yang berlaku adalah fermentasi glukosa, sehingga medium berubah menjadi kuning pada fasa awal (10 hingga 12 jam pertama). Sekiranya dekarboksilasi ornithine berlaku kemudian, medium akan berubah menjadi ungu.

Penting untuk menafsirkan ujian dekarboksilasi ornithine sebelum mengungkapkan indole, kerana penambahan reagen Kovacs mengubah warna medium.

Tafsiran

Ujian negatif: medium dengan warna kuning atau dengan latar belakang kuning.

Ujian positif: sederhana ungu.

Petunjuk PH

Dalam kes ini, ungu bromokresol digunakan; orang yang bertanggungjawab untuk menyatakan apabila terdapat perubahan pH dalam medium. Setelah pengasidan, penunjuk berubah menjadi kuning, dan setelah alkaliisasi, ia berubah menjadi ungu.

Teknik pembenihan dan pengembangan

Untuk menyemai medium MIO, gelung lurus atau jarum digunakan dan dengan itu sebahagian koloni yang akan dikaji dikumpulkan.

Tusukan yang mendalam dibuat di tengah MIO dalam garis lurus. Tidak disarankan melakukan tusukan berganda, kerana dapat memberikan gambaran pergerakan yang salah jika tusukan tidak dilakukan di tempat yang sama.

Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis. Lihat hasilnya dalam urutan ini: motilitas, dekarboksilasi ornithine dan akhirnya mengungkapkan indole.

Dianjurkan untuk membuang 2 ml medium secara aseptik, memindahkannya ke tiub steril dan melakukan ujian indole di sana, sehingga jika negatif, selebihnya tiub asli dapat diinkubasi selama 24 jam lagi, untuk mengungkapkan lagi indol.

Perkembangan indole dilakukan seperti berikut: 3 hingga 5 tetes reagen Kovacs ditambahkan ke media MIO dan diaduk dengan kuat. Ia diperhatikan sama ada cincin merah-fuchsia muncul atau tidak.

Penyediaan

Medium MIO

Timbang 31 g medium MIO dan larutkan dalam satu liter air suling.

Panaskan sehingga campuran mendidih selama satu minit, goncang dengan kerap sehingga agar larut sepenuhnya. Sebarkan 4 ml medium ke dalam tabung uji 13/100 dengan penutup kapas.

Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan berdiri tegak di rak, sedemikian rupa sehingga blok separa pepejal terbentuk.

Simpan di dalam peti sejuk 2-8 ° C. Biarkan suam sebelum menyemai ketegangan bakteria.

Warna medium yang dikeringkan berwarna kuning air dan warna medium yang disiapkan berwarna ungu muda.

PH akhir medium yang disediakan ialah 6.5 ± 0.2

Medium bertukar menjadi kuning pada pH berasid dan berwarna ungu pada pH alkali.

Reagen Kovacs (Pembangun Uji Indole)

Reagen ini disediakan seperti berikut:

150 ml amil, isoamil atau butil alkohol (salah satu daripada tiga) diukur. Di dalamnya 10 g p-dimethylaminobenzaldehyde dilarutkan. Selepas itu 50 ml asid hidroklorik pekat ditambahkan perlahan-lahan.

Reagen yang disediakan tidak berwarna atau kuning muda. Ia mesti disimpan dalam botol ambar dan disimpan di dalam peti sejuk. Warna coklat gelap menunjukkan kemerosotannya.

Reagen Kovacs juga boleh diganti dengan reagen Ehrlich. Yang terakhir, lebih peka, lebih disukai untuk mengungkapkan indole dalam bakteria yang menghasilkannya dalam jumlah minit, seperti pada beberapa batang negatif Gram yang tidak fermentasi dan anaerob tertentu.

Gunakan

Medium ini adalah ujian yang melengkapkan sebilangan besar ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae.

Data dekarboksilasi ornithine berfungsi untuk membezakan Shigella sonnei, yang menguji positif, dari Shigella boydii, Shigella flexneri, dan S. dysenterieae, yang menguji negatif.

Ia juga membezakan gen Klebsiella, yang menguji negatif, dari genus Enterobacter, di mana kebanyakan spesiesnya positif.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Setiap kali kumpulan media MIO disediakan, ujian kawalan dapat dilakukan. Untuk ini, strain yang diketahui atau diperakui digunakan untuk memerhatikan tingkah laku medium.

Strain yang boleh digunakan ialah Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes dan Proteus mirabilis.

Hasil yang diharapkan adalah E. coli dan M. morganii. Dan M: +, I: + dan O: +.

Klebsiella pneumoniae semuanya negatif (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis dan Enterobacter aerogenes memberikan M: + I: - dan O: +.

Rujukan

1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Makmal Britannia. MIO Medio 2015. Terdapat di: britanialab.com
5. Makmal BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Terdapat di: bd.com
6. Makmal Valtek. Medium MIO Motility, Indole, Ornithine. 2010. Terdapat di: andinamedica.com