BHI AGAR: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The BHI agar atau Brain Heart Infusion agar medium budaya pepejal yang berkhasiat. Dalam bahasa Sepanyol kita menyebutnya sebagai agar infusi jantung otak. Ini adalah media kultur yang tidak selektif, yang bermaksud bahawa semua jenis bakteria Gram positif dan Gram negatif dapat berkembang, serta beberapa jamur dan jamur filamen.

Ia terdiri dari infusi otak dan jantung anak lembu, hidrolisis peptik pada tisu haiwan, hidrolisis pankreas kasein, natrium klorida, glukosa, disodium fosfat dan agar.

Plat BHI. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil.

Perlu diingatkan bahawa agar BHI adalah salah satu media kultur yang paling kerap digunakan di makmal bakteriologi. Ia boleh digunakan tanpa makanan tambahan sebagai budaya utama, subkultur koloni yang diperoleh pada media selektif lain atau untuk penyelenggaraan ketegangan di makmal.

Sebaliknya, ia adalah media yang ideal untuk dijadikan dasar dalam penyediaan media yang diperkaya, seperti agar darah dan agar coklat. Kedua-duanya sangat sesuai untuk mengasingkan mikroorganisma yang menuntut dari sudut pemakanan. Namun, harus diingat bahawa kerana mengandung glukosa, tidak sesuai untuk mengamati pola hemolisis.

Begitu juga, agar BHI dapat digunakan untuk penyediaan media khas untuk pengasingan mikroorganisma patogen yang sukar tumbuh di media umum, antaranya: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae dan Histoplasma capsulatum.

Dengan aditif antibiotik, agar BHI menjadi media selektif untuk pengasingan kulat.

Asas

Ini adalah media budaya berkhasiat untuk mengasingkan mikroorganisma yang cukup menuntut, dan pengayaannya dapat ditingkatkan dengan penambahan darah dan makanan tambahan lain.

Ini adalah media kultur yang tidak selektif, oleh itu ia membenarkan pertumbuhan bakteria Gram positif dan Gram negatif, serta beberapa kulat. Walau bagaimanapun, ia boleh dibuat selektif dengan penambahan antibiotik.

Medium mengandungi infusi otak dan jantung anak lembu, hidrolisat peptik tisu haiwan dan hidrolisis pankreas kasein; Semua sebatian ini bertindak sebagai sumber vitamin, asid amino, nitrogen, dan karbon.

Glukosa adalah karbohidrat yang memberikan tenaga kepada mikroorganisma setelah mereka menapainya. Sementara itu, natrium klorida dan disodium fosfat mengekalkan keseimbangan osmotik dan memberikan pH yang hampir dengan neutral. Akhirnya, agar memberikan konsistensi pepejal sederhana.

Penyediaan

Timbang 52 gram medium dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Bawa campuran ke sumber panas hingga mendidih, kacau kerap semasa proses pembubaran.

Plat atau baji agar BHI boleh disediakan tanpa bahan tambahan.

Baji

Untuk penyediaan baji, sediakan penyediaan sehingga separuh dari setiap tiub diisi, tutup dan sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit, semasa keluar, berbaring di atas pangkal sehingga mereka mengeras. Kemudian simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

BHI baji untuk bakterioteca. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil.

Pinggan

Campuran terlarut ditutup pada suhu 121 ° C selama 15 minit, setelah dibiarkan, ia dibiarkan sejuk hingga 50 ° C dan 20 ml medium disajikan dalam piring Petri yang steril. Mereka dibiarkan padat, terbalik dan disimpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Biarkan pinggan masuk ke suhu bilik sebelum menyemaikan.

PH medium mesti kekal pada 7.4 ± 0.2.

Medium mentah berwarna krem ​​dan medium yang disediakan berwarna kuning muda.

Penyediaan agar darah

Setelah mensterilkan medium, sejukkan pada suhu sekitar 45 hingga 50 ° C, kemudian tambahkan darah (50 ml), campurkan dengan lembut untuk homogenkan, dan sajikan 20 ml secara aseptik di setiap piring Petri. Sekiranya gelembung terbentuk di atas pinggan, api yang lebih ringan harus disalurkan dengan cepat ke atas gelembung untuk menghilangkannya.

Begitu juga, media khas boleh disediakan dengan menambahkan bahan tambahan yang sesuai apabila campuran mencapai suhu 45 hingga 50 ° C.

Medium kekal merah ceri.

Permohonan

Gunakan tanpa makanan tambahan

Agar BHI tanpa bahan tambahan berguna sebagai kultur utama dan untuk menyemai barisan mikroorganisma yang menuntut rendah atau sederhana untuk pengenalan mereka seterusnya.

Oleh kerana ia adalah media berwarna terang, sangat sesuai untuk memerhatikan pigmen dan, kerana ia tidak mengandungi bahan yang mengganggu, beberapa ujian biokimia, seperti oksidase dan katalase, dapat dilakukan di atasnya, atau ujian biokimia lain dapat dipasang dari koloni dari ini agar.

Begitu juga, BHI agar baji digunakan secara meluas untuk pemeliharaan regangan untuk waktu tertentu di makmal (bacterioteca).

Plat atau baji yang ditanam di permukaan dengan regangan bakteria diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam. Sementara itu, pada jamur suhu dan masa inkubasi akan bergantung pada jenis jamur yang sedang dicari.

Sebagai asas agar penyediaan media lain

Dengan asas ini, media yang diperkaya dan selektif dapat disediakan.

Diperkaya

Fungsi utamanya adalah sebagai asas penyediaan agar darah untuk penggunaan rutin di makmal mikrobiologi. Terutama, asas BHI kondusif untuk pengasingan Streptococcus sp. Namun, ia mempunyai kekurangan kerana tidak sesuai untuk memerhatikan corak hemolisis kerana mengandungi glukosa.

Ia juga digunakan dalam penyediaan agar darah arnab atau kuda untuk pengasingan Haemophilus sp. Untuk hasil terbaik, suplemen pengayaan (IsoVitaleX) boleh ditambah.

Sekiranya sampel berasal dari saluran pernafasan, bacitracin dapat ditambahkan ke agar untuk menghambat flora yang menyertainya dan meningkatkan kemungkinan pemulihan Haemophilus sp.

Sebagai alternatif, agar darah (domba atau manusia) dengan cystine Tellurite boleh disediakan untuk mengasingkan Corynebacterium diphtheriae. Begitu juga, berguna untuk menyediakan agar darah arnab, dengan penambahan sistin dan glukosa untuk pengasingan Francisella tularensis.

Pembenihan plat agar darah dilakukan dengan keletihan dan mereka diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24-48 jam dalam mikroerofilik (5-10% CO ₂ ).

Selektif

Medium ini dengan penambahan antibiotik dapat menggantikan agar Sabouraud untuk pengasingan kulat.

Kombinasi agar BHI dengan kloramfenikol - gentamicin atau penisilin -, streptomisin dan darah kuda sangat sesuai untuk pengasingan Histoplasma capsulatum.

Bergantung pada mikroorganisma yang akan diasingkan, disyorkan inkubasi pada suhu 35-37 ° C atau pada suhu bilik dalam aerobiosis. Kadang kala inkubasi diperlukan dalam kedua-dua julat suhu, dengan menggunakan 2 plat untuk ini.

Sebilangan kulat seperti Trichophyton mentagrophytes mesti diinkubasi pada suhu bilik sehingga 7 hari.

QA

Dari setiap kumpulan yang disiapkan, disarankan untuk menanam 1 piring atau baji pada suhu 37 ° C selama 24 jam dan mengesahkan bahawa tidak ada pertumbuhan; Ia sangat penting ketika menyiapkan agar darah, kerana ia adalah medium yang mudah tercemar.

Sebaliknya, kualiti medium dapat dinilai dengan menyuntik ketegangan standard yang diketahui atau diperakui dan memerhatikan perkembangannya.

Dalam pengertian ini, untuk menilai agar BHI tanpa bahan tambahan, strain Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 atau Candida albicans ATCC 10231 dapat digunakan. Mereka diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam. Dalam semua kes, pertumbuhan yang diharapkan adalah memuaskan.

Strain Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, atau Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 dapat disemai untuk menilai plat agar darah.

Strain bakteria diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroerofiliti selama 24 jam, sementara jamur diinkubasi pada suhu bilik di ruang lembap hingga 7 hari. Pertumbuhan yang memuaskan dijangkakan dalam semua kes.

Rujukan

1. Makmal Britannia. Agar Infusi Jantung Otak. 2015. Terdapat di: britanialab.com.
2. Makmal BD. Agar Infusi Jantung Otak (BHI). 2013. Terdapat di: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Makmal Neogen. Agar Infusi Jantung Otak. Terdapat di: drinksafety.neogen.com
5. Gil M. agar darah: asas, penggunaan dan penyediaan. 2018. Boleh didapati di: lifeder.com.
6. Penyumbang Wikipedia. Infusi jantung otak. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 19 September 2018, 03:58 UTC. Terdapat di: wikipedia.org. Diakses pada 2 Mac 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.