AGAR ESCULIN EMPEDU: RASIONAL, PENYEDIAAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The hempedu esculin agar adalah terpilih dan budaya pepejal medium berbeza. Ia digunakan sebagai ujian diagnostik untuk menentukan kemampuan mikroorganisma tertentu untuk tumbuh dalam media yang mengandungi hempedu dan juga untuk memecah glukosida esculin menjadi esculetin dan glukosa.

Ujian diagnostik ini digunakan untuk membezakan spesies genus Streptococcus yang tergolong dalam kumpulan D (positif empedu hempedu), dari kumpulan Streptococcus lain yang bertindak balas negatif terhadap ujian ini.

Plat agar esculin hempedu, disemai dengan strain Enterococcus (positif ujian). Sumber: Tidak ada pengarang yang boleh dibaca mesin. Philippinjl menganggap (berdasarkan tuntutan hak cipta).

Harus diingat bahawa sebilangan Streptococcus dari kumpulan viridans dapat menghidrolisis esculin, tetapi tidak mampu tumbuh di hadapan hempedu pada kepekatan 40%, oleh itu, dalam media ini reaksi bagi kumpulan ini adalah negatif.

Sebaliknya, media esculin hempedu juga berguna untuk diagnosis spesies Listeria monocytogenes atau Aerococcus sp, kerana mikroorganisma ini positif terhadap hempedu.

Esculin hempedu terdiri daripada peptone, ekstrak daging, hempedu lembu, esculin, sitrat besi, agar, dan air suling. Beberapa rumah komersial termasuk natrium azida dalam komposisi medium.

Medium boleh disediakan di makmal jika anda mempunyai semua sebatian secara berasingan atau ia boleh disediakan dari medium dehidrasi komersial.

Asas

Media esculin hempedu mengandungi peptone dan ekstrak daging, kedua-dua sebatian tersebut menyediakan nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisma.

Ia juga mengandungi esculin; Sebatian ini adalah glikosida yang terbentuk oleh penyatuan monosakarida sederhana (glukosa) dengan sebatian yang dipanggil 6,7-dihydroxycoumarin atau esculetin (aglucone), dihubungkan oleh ikatan asetal atau glukosidik.

Ujian ini berdasarkan pada menunjukkan sama ada bakteria mampu menghidrolisis esculin. Sekiranya ini berlaku, esculin berpecah menjadi esculetin dan glukosa. Esculetina bertindak balas dengan besi yang terdapat dalam medium, membentuk sebatian coklat gelap, hampir hitam.

Ini bermaksud bahawa ferrik sitrat bertindak sebagai pembangun reaksi. Ciri ini menjadikan Bile Esculin Agar sebagai medium pembezaan.

Sebaliknya, hempedu adalah penghambat yang menghalang pertumbuhan beberapa mikroorganisma, oleh itu, bakteria, sebelum membelah esculin, mesti dapat tumbuh di hadapan hempedu. Oleh itu, media ini dianggap selektif.

Bakteria yang dapat berkembang di persekitaran ini terutama adalah bakteria yang tinggal di persekitaran usus.

Dalam pengertian ini, beberapa syarikat komersil menambahkan natrium azida ke medium untuk lebih menghambat pertumbuhan bacilli enterik Gram negatif, meningkatkan selektiviti medium untuk pertumbuhan Streptococcus.

Akhirnya, agar memberikan konsistensi pepejal ke medium dan air adalah pelarut sebatian.

Penyediaan

Penyediaan agar esculin hempedu buatan sendiri

Untuk menimbang:

5 g peptone

3 g ekstrak daging

40 g hempedu daging lembu

1 g esculin

0.5 g sitrat besi

15 g agar

1000 ml air suling

Sekiranya menambahkan natrium azida, ditimbang 0.25 g / liter dan ditambahkan ke dalam campuran.

Larutkan komponen dalam liter air suling, panaskan sehingga sebatian larut sepenuhnya. Sebarkan 5 ml ke dalam tabung uji penutup skru 16 x 125 mm. Autoklaf pada suhu 121 ° C, tekanan 15 paun selama 15 minit.

Keluarkan dari autoklaf dan condongkan tiub pada penyokong, agar agar mengeras dalam paruh seruling lebar.

Simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Bawa ke suhu bilik sebelum disemai.

Plat agar esculin hempedu juga boleh disediakan; dalam kes ini, keseluruhan campuran ditutup secara automatik dalam termos dan kemudian diedarkan dalam piring Petri yang steril. Biarkan ia pekat dan simpan di dalam peti sejuk.

PH medium mestilah 6.6 ± 0.2.

Penyediaan agar esculin hempedu dari medium komersial

Timbang jumlah yang ditentukan oleh sisipan. Ini boleh berbeza dari satu rumah perniagaan ke rumah yang lain. Selepas itu, teruskan sama seperti prosedur yang dijelaskan di atas.

PH medium hendaklah 6.6 ± 0.2. Warna medium dehidrasi berwarna kuning muda dan medium yang disediakan berwarna kuning gelap.

Medium esculin hempedu komersial. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil.

Permohonan

Medium esculin hempedu digunakan terutamanya untuk membezakan Streptococcus Kumpulan D (positif hempedu hempedu), daripada kumpulan Streptococcus selebihnya (negatif esculin hempedu).

Menggabungkan ujian pertumbuhan kaldu hipersalted dengan ujian esculin hempedu dapat mengenal pasti kumpulan khas Kumpulan D Streptococcus yang disebut Enterococcus.

Kumpulan khas Streptococcus ini tergolong dalam kumpulan D genus tersebut dan mereka mampu menghidrolisis esculin di hadapan hempedu seperti anggota kumpulan D yang lain, tetapi mereka juga mampu berkembang dalam medium hipersalted (BHI dengan klorida 6.5% sodium), harta yang membuat perbezaan.

Oleh itu, Streptococci yang menghidrolisis hempedu esculin tetapi tidak tumbuh dalam kaldu hipersalted disebut sebagai non-enterococci Group D Streptococci.

Disemai

Inokulasi medium sebaiknya dari kuah 24 jam Todd-Hewitt tulen.

Tambahkan 2 tetes ke permukaan medium dengan pipet Pasteur dan sebarkan di medium dengan gelung platinum.

Inkubasi pada suhu 35 ° C selama 48 jam, sementara waktu inkubasi dipenuhi, ia dapat dipantau untuk melihat apakah ada reaksi positif. Sekiranya pada akhirnya reaksi tetap negatif, ia dapat diinkubasi hingga 72 jam.

Tafsiran

Tindak balas positif : kemunculan warna coklat gelap, hampir hitam pada paruh seruling (dalam kes ujian tiub) atau menghitamkan agar di sekitar jajahan (dalam kes ujian plat).

Tindak balas negatif : tidak ada penghitaman medium atau terdapat penampilan hitam di kurang dari separuh tiub setelah 72 jam inkubasi. Sebaliknya, pertumbuhan bakteria dalam medium tanpa penampilan warna hitam harus dianggap sebagai ujian negatif.

QA

Untuk menilai kualiti medium, strain Enterococcus faecalis ATCC 29212 mesti tersedia sebagai kawalan positif dan strain Streptococcus yang tidak termasuk dalam kumpulan D sebagai kawalan negatif.

Batasan

-Media yang tidak mengandungi natrium azida membenarkan pertumbuhan basil negatif Gram enterik. Sebilangan dari mereka boleh menghitamkan bahagian tengah.

- Beberapa rumah komersial menambah kepekatan hempedu yang rendah (10%) dan atas sebab ini beberapa Streptococcus yang bukan tergolong dalam kumpulan D dapat berkembang dalam medium dan menghidrolisis esculin, yang dapat menimbulkan kesilapan dalam penafsiran.

Rujukan

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
4. Makmal Britannia. Esculin hempedu dengan agarida. 2015. Terdapat di: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 22 Ogos 2017, 17:30 UTC. 22 Apr 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorium Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Terdapat di: bd.com
7. Makmal Neogen. Agar-agar esculin hempedu. Terdapat di: drinksafety.neogen.com