The agar cetrimide atau cetrimide ialah medium budaya pepejal terpilih direka untuk pengasingan Pseudomonas aeruginosa. Ini didasarkan pada menunjukkan produksi pigmen khas dari spesies ini dan dibuat dari modifikasi agar agar, yang dibuat oleh King, Ward dan Raney.
Formula asalnya mengandungi garam magnesium klorida, kalium sulfat, pencernaan gelatin pankreas, dan agar-agar. Pengubahsuaian formula terdiri daripada penambahan cetrimide (cetyl trimethyl ammonium bromide) dan gliserol.
Agar Cetrimide disemai dengan Pseudomonas aeruginosa Sumber: BiotechMichael, dari Wikimedia Commons
Agar Cetrimide berguna untuk kajian mikrobiologi sampel di mana kehadiran Pseudomonas aeruginosa disyaki. Harus diingat bahawa bakteria ini sangat penting, kerana walaupun merupakan bagian dari mikrobiota persekitaran normal, ia sering berperilaku sebagai patogen oportunistik.
Atas sebab ini, salah satu masalah yang paling biasa disebabkan oleh kuman ini adalah jangkitan nosokomial, iaitu, yang berlaku di dalam persekitaran hospital, menyerang pesakit yang mengalami sistem imun yang tertekan.
Sebaliknya, kerana pertalian mikroorganisma ini dengan kelembapan, sasaran pencemaran yang paling rentan adalah: peralatan pernafasan dibantu, ubat-ubatan, nebulizer, sumber air, penghawa dingin, disinfektan, larutan sabun, larutan suntikan, luka terbuka , kateter, saluran kencing, antara lain.
Dalam pengertian ini, agar cetrimide berguna untuk menjalankan kawalan dan kultur mikrobiologi terhadap unsur-unsur yang disebutkan sebelumnya.
Asas
Aget Cetrimide berdasarkan kemampuan medium untuk mendorong pertumbuhan P. aeruginosa, merangsang pengeluaran pigmennya dan seterusnya menghalang pertumbuhan mikroorganisma lain.
Sifat-sifat ini disebabkan oleh fungsi setiap komponennya. Gelatin peptone yang ada berfungsi sebagai sumber nitrogen, vitamin dan mineral. Gliserol atau gliserin berfungsi sebagai sumber karbon.
Sebaliknya, cetrimide (cetyl trimethyl ammonium bromide) adalah bahan yang menghalang pertumbuhan bakteria selain P. aeruginosa, termasuk spesies lain yang tergolong dalam genus yang sama.
Inhibition berlaku kerana cetramide bertindak sebagai pencuci kationik, berjaya mengestabilkan membran plasma kebanyakan bakteria, kecuali P. aeruginosa dan beberapa yang lain yang berjaya bertahan.
Sebaliknya, ia mengandungi magnesium klorida dan kalium sulfat. Sebatian ini merangsang ekspresi fenotipik yang berkaitan dengan kemampuan Pseudomonas aeruginosa untuk menghasilkan pelbagai pigmen, termasuk: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin, dan fluorescein. Akhirnya, ia mengandungi agar-agar, yang memberikan konsistensi padat.
Tafsiran
Tafsiran pertumbuhan yang diperoleh dalam agar ini dilakukan seperti berikut:
Pemerhatian koloni bulat dan licin dengan pinggir biasa, dengan penghasilan pigmen biru-kehijauan, hijau, coklat atau kemerahan, serta pelepasan bau buah (aminoacetophenone), adalah hasil andaian kehadiran bakteria ini dalam sampel tersebut.
Sebaliknya, pemerhatian pigmen kuning kehijauan terang pada koloni menunjukkan P. aeruginosa apabila plat terkena cahaya ultraviolet.
Fluoresensi koloni P. aeruginosa pada agar cetrimide di bawah sinar ultraviolet.
Perlu diperhatikan bahawa setiap warna yang diperhatikan disebabkan oleh pengeluaran pigmen tertentu. Pigmen biru-hijau sesuai dengan pengeluaran pyocyanin, hijau hingga pyoverdin, kemerahan hingga pyorubin, coklat hingga pyomelanine, dan pendarfluor kuning-hijau terang di bawah cahaya UV ke fluorescein.
Penyediaan
Timbang 43 g medium dehidrasi dan larutkan dalam air suling. Masukkan 10 ml gliserol. Bawa campuran ke sumber haba. Biarkan mendidih selama beberapa minit sehingga larut sepenuhnya.
Autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Diamkan dan hidangkan dalam piring Petri yang steril apabila suhu sekitar 50 ° C.
Biarkan padat, terbalik, susun dalam plak dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Plat agar Cetrimide harus dikeluarkan dari peti sejuk sebelum pembenihan dan dibiarkan sampai pada suhu bilik.
PH akhir medium mestilah 7.2 ± 0.2.
Warna medium dehidrasi berwarna kuning air dan penyediaannya berwarna putih legap.
Permohonan
Semua jenis sampel di mana kehadiran Pseudomonas aeruginosa disyaki dapat disemai pada agar cetrimide. Oleh itu, ia berguna dalam semua bidang mikrobiologi (persekitaran, perindustrian, klinikal, air dan makanan).
Adalah sangat penting untuk menganalisis persekitaran hospital dan dengan demikian dapat menerapkan langkah-langkah pembetulan, kerana mikroorganisma ini menjangkau pesakit melalui peralatan, ubat-ubatan, penyelesaian dan bekalan yang tercemar yang digunakan oleh pesakit.
Dengan cara ini, mikroorganisma dapat menjangkiti saluran pernafasan bawah, saluran kencing dan luka pesakit imunosupresi.
Pengiraan koloni P. aeruginosa juga dapat dilakukan dalam ujian had mikrob.
Disemai
Agar Cetrimide boleh digunakan sebagai budaya utama. Plat diinokulasi pada salah satu tepinya dan dari situ disebarkan dengan keletihan ke bahagian lain pinggan. Sampel cecair boleh disemai permukaan dengan spatula drigalski.
Plat diinkubasi secara aerobik pada suhu 37 ° C selama 24 jam inkubasi.
Batasan
-Peratusan kecil strain Pseudomonas aeruginosas tidak menghasilkan pyocyanin, jadi negatif palsu dapat ditafsirkan.
-Beberapa spesies Pseudomonas yang mempunyai kepentingan klinikal dihambat dalam medium ini.
- Walaupun memerhatikan ciri-ciri yang dijelaskan untuk Pseudomonas aeruginosa, mereka mesti disahkan dengan ujian pengenalan tambahan. Ujian yang tidak boleh dilewatkan adalah ujian oksidase, ia mesti memberi positif.
-Beberapa Enterobacteriaceae dapat tumbuh dalam medium ini dan mengembangkan pigmen kuning, tetapi berbeza dengan Pseudomonas aeruginosa kerana apabila plat tersebut dikenakan cahaya ultraviolet tidak ada pendarfluor.
- Serratia marcescens berjaya mengembangkan dan menghasilkan pigmen merah jambu.
-Jika pelat yang disemai dengan agar-agar cetrimide terkena untuk sementara waktu pada suhu bilik, strain P. aeruginosa dapat kehilangan pendarfluor yang diperhatikan di bawah sinar ultraviolet, namun sifatnya dapat dipulihkan jika mereka diinkubasi lagi pada suhu 37 ° C.
QA
Untuk menganalisis prestasi baik cetrimide agar, strain kawalan dapat digunakan, seperti: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Pertumbuhan yang baik untuk P. aeruginosa, dengan pigmen biru-hijau dan fluorescein positif.
- S. maltophilia dan S. aureus akan dihambat sebahagiannya.
- Escherichia coli diharapkan dapat dihambat sepenuhnya.
Rujukan
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotipik dan ciri serologi pengasingan klinikal Pseudomonas aeruginosa. Pemantau Vacci. 2004; 13 (3): 1-9.
- Makmal Conda Pronadisa. Asas agar Cetrimide. 2014. Terdapat di: condalab.com
- Makmal Britannia. Agar Cetrimide. 2015. Terdapat di: britanialab.com
- Makmal BD. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Terdapat di: bd.com
- Makmal Francisco Soria Melguizo, CA Cetrimide agar. 2009. Terdapat di: http://f-soria.es