AGAR COKLAT: ASAS, PENGGUNAAN DAN PENYEDIAAN - BIOLOGI - 2026

The coklat agar ialah medium budaya yang kukuh, diperkaya, bukan - terpilih dan bukan - berbeza. Ia digunakan terutamanya untuk pengasingan mikroorganisma yang menuntut dari sudut pemakanan, walaupun mana-mana jenis bakteria dapat tumbuh di dalamnya.

Atas sebab ini, kegunaannya meningkat terutama dalam pembenihan sampel yang biasanya steril, seperti CSF dan cairan sendi. Walaupun ia juga termasuk dalam cara yang dipilih untuk menyemai sampel polimikrob, tetapi dalam kes ini penambahan antibiotik yang menghambat flora bersamaan diperlukan.

Agar coklat dengan pertumbuhan bakteria

Medium ini mempunyai ciri warna coklat yang sangat mirip dengan coklat, oleh itu namanya. Penyediaannya sangat mirip dengan agar darah, hanya dalam hal ini darah mesti dipanaskan agar sel darah merah rusak.

Penyediaannya, seperti agar darah, sangat halus, kerana mudah tercemar. Atas sebab ini, banyak makmal lebih suka memperoleh medium ini yang sudah disediakan oleh syarikat komersial yang menjamin kualitinya.

Asas

Medium ini terdiri daripada asas agar kaya nutrien dan darah yang dipanaskan. Hemolisis sel darah merah memberikan faktor X (hemin) dan faktor V (NAD), yang diperlukan untuk pertumbuhan beberapa mikroorganisma, seperti genus Haemophilus. Ia juga sangat berguna untuk pengasingan Neisserias sp.

Seperti agar darah, media yang berbeza dapat digunakan sebagai agar asas bergantung pada keperluannya. Antara media yang digunakan adalah infusi jantung otak dan agar-agar soya, walaupun yang paling disarankan adalah agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC dan agar Thayer Martin.

Beberapa varian agar coklat termasuk suplemen diperkaya yang tersedia secara komersial yang disebut Isovitalex atau Polivitex.

Makanan tambahan ini mengandungi vitamin B ₁₂ , L-glutamin, adenin, guanin hidroklorida, asid p-aminobenzoik, nikotinamida adenin dinukleotida (NAD), tiamina pirofosfat, ferrik nitrat, tiamin hidroklorida, sistein hidroklorida, L-sistin, dan glukosa.

Penting untuk diperhatikan bahawa agar coklat lebih diperkaya daripada agar darah, tetapi tidak membenarkan pemerhatian terhadap pola hemolisis.

Permohonan

Sumber: pixnio.com. Pengarang:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Agar coklat disediakan dengan agar Columbia

Medium ini mengandungi pencernaan pankreas kasein dan jantung, pencernaan peptik daging, natrium klorida, agar, ekstrak ragi dan tepung jagung. Ia juga kaya dengan vitamin, mineral dan asid amino penting.

Pangkalan darah yang dipanaskan ini sangat sesuai untuk pengasingan bakteria genus Neisseria. Sebaliknya, jika tambahan untuk Brucella ditambahkan ke media, mikroorganisma yang disebutkan dapat diasingkan. Hasilnya diperbaiki dengan menggunakan darah kuda.

Agar coklat disediakan dengan agar asas GC (untuk gonococci)

Medium ini mengandungi peptone, tepung jagung, buffer monobasik dan dibasik, natrium klorida, dan agar.

Sebilangan besar persembahan agar coklat yang disediakan secara komersial dilengkapi dengan asas ini dan tidak mengandungi darah yang dipanaskan, melainkan campuran sintetik hemin dan suplemen kimia faktor pertumbuhan, vitamin, mineral, asid amino, faktor V, dan glukosa.

Agar coklat disediakan dengan agar Müeller Hinton

Ia digunakan untuk menguji kerentanan antimikroba mikroorganisma cepat, seperti Streptococcus pneumoniae menggunakan darah domba yang dipanaskan 5%.

Ia juga digunakan untuk pengasingan utama Neisserias dan Haemophilus, tetapi dalam pengasingan Haemophilus, penggunaan darah kuda lebih disukai, kerana merupakan sumber faktor X dan V. yang kaya.

Sebaliknya, jika sampel yang akan disemai berasal dari kawasan yang tidak steril, penambahan antibiotik dianjurkan untuk menghalang flora normal kawasan tersebut.

Contoh untuk sampel pernafasan di mana kehadiran bakteria genus Haemophilus disyaki, bacitracin digunakan untuk menghalang pertumbuhan Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus dan saprophytic Neisserias.

Dalam kes sampel chancre genital, di mana Haemophilus ducreyi disyaki, agar coklat yang disiapkan seperti berikut telah berjaya digunakan: Müeller - agar Hinton dengan 5% darah kuda coklat, 1% pengayaan Isovitalex dan 3 µg / ml vancomycin.

Agar coklat disediakan dengan agar-agar Thayer Martin

Medium ini khas untuk pengasingan Neisseria gonorrhoeae. Ia mesti mengandungi antibiotik untuk menghalang flora yang menyertainya. Darah anak domba digunakan.

Penyediaan

Anda harus melihat petunjuk untuk penyediaan agar asas yang akan digunakan. Mereka dijumpai di bahagian belakang bekas medium dehidrasi. Mereka secara amnya menerangkan seberapa besar berat badan anda untuk menyediakan satu liter media budaya.

Jumlah tepat yang diperlukan boleh disediakan di makmal, boleh lebih dari satu liter.

Pengiraan

Peraturan tiga digunakan untuk mengira berapa berat untuk menyiapkan isipadu yang diinginkan. Contoh:

Sekiranya untuk 1 liter perlu berat 40 gr dan makmal memerlukan 800 ml, dikatakan:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Rumusannya adalah seperti berikut:

X = 32 gr (kuantiti akan ditimbang selama 800 ml).

Timbang dan larut

Kuantiti yang diperlukan ditimbang dan dimasukkan ke dalam termos bersama air.

Panaskan di atas api sederhana dan gaul perlahan-lahan dengan gerakan putar sehingga media dehidrasi larut sepenuhnya, membiarkannya mendidih selama 1 minit.

Sterilkan

Kelalang diletakkan di dalam autoklaf untuk mensterilkan medium pada suhu 121 ° C selama 20 minit.

Agregat darah

Semasa meninggalkan autoklaf, ia dibiarkan diam sehingga suhu medium kira-kira antara 56 hingga 70 ° C untuk meletakkan darah dan campurkan sehingga medium berubah menjadi coklat.

Sekiranya anda menambah makanan tambahan, inilah masanya untuk melakukannya. Selepas itu campurkan dan hidangkan 20 ml ke setiap hidangan Petri yang steril.

Keseluruhan prosedur harus dilakukan di tudung aliran lamina atau di sekitar pembakar Bunsen.

Biarkan sehingga ia pekat dan simpan terbalik di dalam peti sejuk.

Cara lain untuk menyediakan agar coklat tanpa menggunakan darah

Medium asas disediakan seperti yang dijelaskan di atas, hemoglobin dehidrasi yang diperolehi secara komersial dilarutkan dan disterilkan dalam autoklaf.

Kedua-dua larutan dibiarkan sejuk hingga 50 ° C, digabungkan dan makanan tambahan ditambahkan. Campurkan dalam keadaan aseptik dan kemudian hidangkan dalam piring Petri yang steril.

QA

Penting agar darah diletakkan pada suhu yang ditunjukkan, kerana darah yang sesuai untuk mencairkan sel darah merah dan pada masa yang sama mengekalkan faktor V, yang sensitif terhadap panas.

Tiada gelembung di permukaan agar. Dari setiap kumpulan 100 pinggan, satu atau dua pinggan harus diinkubasi di dalam ketuhar pada suhu 37 ° C selama 24 jam untuk mengesahkan kemandulannya.

Untuk hasil terbaik, agar coklat harus digunakan sejurus selepas penyediaan.

Strain bakteria kawalan harus disimpan di makmal untuk menilai keberkesanan medium segar untuk pertumbuhan mikroorganisma cepat penting yang penting.

Rujukan

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinikal praktikal. University of Cadiz, edisi ke-2. Perkhidmatan Penerbitan UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. (Edisi ke-5.) Argentina, Editor Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Kelayakan menggunakan medium kultur asas GC-Biocen Agar di Makmal Mikrobiologi. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Terdapat di: scielo.sld.
5. Penyumbang Wikipedia. Agar coklat. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 17 Disember 2018, 19:54 UTC. Terdapat di: en.wikipedia.org.