The agar Simmons sitrat ia adalah satu medium pepejal digunakan sebagai biokimia mikroorganisma ujian pengenalan, terutamanya gram - riba negatif. Medium asal dicipta oleh Koser pada tahun 1923.
Medium Citrate Koser terdiri daripada kaldu yang mengandungi sodium fosfat, ammonium fosfat, monopotassium fosfat, magnesium sulfat, dan natrium sitrat.
A. Medium komersial Simmons Citrate Agar Dehidrat B. Agar Simmons Citrate Sedia. Sumber: A. Foto diambil oleh MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, dari Wikimedia Commons
Seperti yang dapat dilihat, satu-satunya sumber karbon dalam medium adalah sitrat, dan nitrogen adalah ammonium fosfat, menghilangkan protein dan karbohidrat sebagai sumber unsur-unsur ini, mereka biasanya terdapat di media lain.
Oleh itu, bakteria yang diinokulasi dalam medium ini hanya dapat membiak jika ia mampu mengambil karbon dari sitrat. Ujian itu positif jika terdapat kekeruhan di media, namun ia mempunyai kelemahan bahawa kekeruhan tidak spesifik dapat terjadi.
Masalah ini diselesaikan oleh Simmons dengan menambahkan bromothymol blue dan agar pada formula asal Koser. Walaupun prinsipnya sama, ia ditafsirkan secara berbeza.
Asas
Sebilangan bakteria memiliki kemampuan untuk bertahan hidup tanpa adanya fermentasi atau pengeluaran asam laktat, perlu mendapatkan tenaga melalui penggunaan substrat lain. Dalam ujian ini satu-satunya sumber karbon yang ditawarkan adalah sitrat.
Bakteria yang dapat bertahan dalam keadaan seperti ini dengan cepat memetabolismekan sitrat sebagai alternatif untuk laluan tradisional, menggunakan kitaran asid tricarboxylic atau kitaran fermentasi sitrat.
Katabolisme sitrat oleh bakteria terdiri daripada mekanisme enzimatik tanpa campur tangan koenzim A. Enzim ini dikenali dengan nama sitrikase (sitrat oxaloacetate lyase) atau sitrat desmolase. Tindak balas memerlukan kehadiran kation divalen, yang dalam hal ini dibekalkan oleh magnesium.
Tindak balas menghasilkan oksaloasetat dan piruvat, yang kemudian menimbulkan asid organik di tengah pH alkali yang terbentuk oleh penggunaan sumber nitrogen. Asid organik ini digunakan sebagai sumber karbon yang menghasilkan karbonat dan bikarbonat, seterusnya mengalkalkan persekitaran.
Mod menyemai
Medium sitrat Simmons harus diinokulasi sedikit ke dalam fishtail menggunakan gelung atau jarum lurus, dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35-37 ° C. Selepas masa, hasilnya diperhatikan.
Pembenihan dilakukan hanya pada permukaan agar. Jangan tusukan.
Tafsiran
Sekiranya medium tetap berwarna asli (hijau) dan tidak ada pertumbuhan yang kelihatan, maka ujiannya adalah negatif, tetapi jika medium berubah menjadi biru, ini menunjukkan adanya produk alkali, yang dikesan oleh penunjuk pH. Dalam kes ini ujiannya positif.
Sitrat (+) dan (-). Sumber: MSc. Marielsa gil
Ini berlaku kerana jika bakteria menggunakan karbon sitrat itu juga mampu mengambil nitrogen dari ammonium fosfat yang dengannya melepaskan ammonia, mengalkali medium.
Sebaliknya, jika pertumbuhan bakteria diperhatikan dalam medium, tetapi tidak ada perubahan warna, ujian juga harus dianggap positif, kerana jika ada pertumbuhan, itu bermaksud bahawa bakteria dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon, walaupun saat ini tidak ada perubahan pada pH (kadang-kadang mungkin memerlukan masa).
Sekiranya terdapat keraguan dalam penafsiran warna akhir, ia dapat dibandingkan dengan tiub sitrat yang tidak diinokulasi.
Penyediaan
Timbang 24.2 g medium dehidrasi untuk satu liter air. Gaul dan biarkan berehat selama lebih kurang 5 minit. Selesaikan larutan medium dengan memanaskan selama 1 atau dua minit, kerap bergoncang.
Tuangkan 4 ml ke dalam tabung uji dan autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Semasa meninggalkan autoklaf, condong dengan bantuan penyokong sedemikian rupa sehingga agar pepejal memekat dalam bentuk paruh seruling dengan blok kecil atau bawah dan lebih serong.
PH akhir medium sitrat ialah 6.9 (warna hijau). Medium ini sangat sensitif terhadap perubahan pH.
Pada pH 6 ke bawah, medium bertukar menjadi kuning. Warna ini tidak diperhatikan dalam ujian bakteria.
Dan pada pH 7.6 atau lebih tinggi, media bertukar menjadi biru Prusia dalam.
Gunakan
Simmons Citrate Agar digunakan untuk pengenalpastian mikroorganisma tertentu, terutama bacilli yang tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae dan basil penapaian bukan glukosa yang lain.
Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
Pemikiran terakhir
Medium sitrat Simmons adalah ujian yang sangat halus, kerana positif palsu dapat diperoleh jika kesalahan tertentu dilakukan.
Penjagaan yang mesti diambil adalah seperti berikut:
Inokulum
Inokulum bakteria yang sangat tebal atau tidak boleh dibuat, kerana boleh menyebabkan warna kuning tembaga berkembang di tempat menyemai, tanpa menjejaskan sisa media, tetapi boleh meyakini bahawa terdapat pertumbuhan. Ia tidak bermaksud positif ujian.
Juga, inokulum tebal dapat menghasilkan positif positif, kerana sebatian organik yang terbentuk di dalam dinding sel bakteria yang mati dapat melepaskan karbon dan nitrogen yang cukup untuk mengubah penunjuk pH.
Oleh itu, yang ideal adalah menyemai dengan menggunakan jarum dan bukannya pemegang platinum, untuk mengelakkan pengambilan bahan berlebihan.
Disemai
Sebaliknya, ketika ujian biokimia untuk mengenal pasti mikroorganisma yang dimaksud sedang ditanam, adalah mustahak bahawa ujian sitrat adalah yang pertama diinokulasi, untuk mengelakkan pengambilan protein atau karbohidrat dari medium lain.
Dalam keadaan ini, kemungkinan positif positif, kerana salah satu bahan yang diperkenalkan secara tidak sengaja akan dimetabolisme dan akan menyebabkan perubahan pada pH.
Cara lain untuk mengelakkan penyerapan bahan adalah dengan membakar gelung dengan baik dan mengambil inokulum baru antara satu ujian dengan ujian yang lain.
Perhatian juga harus diambil ketika menyentuh koloni untuk melakukan inokulum, kerana harus dihindari untuk menyeret sebahagian agar dari kultur dari mana bakteria berasal, kerana yang dijelaskan di atas.
Dalam pengertian ini, Matsen, Sherris dan Branson mengesyorkan mencairkan inokulum dalam larutan fisiologi sebelum menginokulasi ujian sitrat untuk mengelakkan pemindahan sumber karbon lain.
Keamatan warna
Perlu dipertimbangkan bahawa intensitas warna yang dihasilkan ketika ujian positif mungkin berbeza-beza menurut rumah komersial.
Di samping itu, terdapat mikroorganisma yang menguji positif pada 24 jam, tetapi ada strain lain yang memerlukan 48 jam atau lebih untuk menghasilkan perubahan dalam pH.
Rujukan
- Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Makmal BD. Slant Agar BBL Simmons Citrate. 2015. Terdapat di: bd.com
- Makmal Britannia. Simmons Citrate Agar. 2015. Terdapat di: britanialab.com
- Makmal Diagnostik Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016. Terdapat di: andinamedica.com.