CLED AGAR: RASIONAL, PENGGUNAAN, DAN PENYEDIAAN - BIOLOGI - 2026

The agar CLED (cystine-Lactose-Elektrolit-kekurangan) adalah pengkamiran medium budaya yang kukuh, yang digunakan untuk diagnosis jangkitan saluran kencing. Komposisi media kultur dirancang untuk pertumbuhan patogen kencing yang baik dan sangat sesuai untuk pengukuran unit pembentuk koloni (CFU).

Medium budaya CLED tidak selektif, kerana mikroorganisma Gram negatif dan Gram positif dapat tumbuh di dalamnya. Tetapi ini tidak menjadi masalah, kerana kebanyakan UTI disebabkan oleh hanya satu jenis mikroorganisma.

Agar CLED

Sekiranya terdapat jangkitan polimikrob, 2 atau 3 bakteria yang berbeza dapat diperoleh, tetapi sangat jarang berlaku dan pada kebanyakan masa ia adalah sampel yang tercemar.

Antara bakteria Gram negatif yang boleh tumbuh dalam medium ini ialah bacilli yang tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae dan bacilli enterik lain, uropatogen yang paling sering diasingkan dalam sampel air kencing adalah seperti berikut: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, antara lain.

Begitu juga, antara bakteria Gram positif yang boleh tumbuh dalam medium ini adalah Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp dan bahkan ragi, seperti kompleks Candida albicans, boleh tumbuh

Walau bagaimanapun, kerana komposisi kimia medium, ia tidak membenarkan pertumbuhan beberapa patogen genitouriner yang menuntut, seperti Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, antara lain.

Rasional Agar CLED

Medium kultur CLED mempunyai ekstrak daging, hidrolisat pankreas kasein dan hidrolisat gelatin sebagai sumber tenaga. Mereka memberikan nutrien untuk pengembangan bakteria yang tidak diperlukan.

Ia juga mengandung sistin, asam amino yang memungkinkan pertumbuhan koliform, yang dapat dibezakan dengan ukurannya yang kecil.

Begitu juga, ia mengandungi laktosa sebagai karbohidrat yang boleh ditapai, oleh sebab ini medium ini berbeza; dapat membezakan bakteria penapaian daripada penapaian bukan laktosa.

Bakteria fermentasi menyebabkan pH medium berubah dengan penghasilan asid, mengembangkan koloni kuning, sementara bakteria yang tidak fermentasi tidak menghasilkan perubahan pada media, oleh itu mereka mengambil warna agar asli, hijau.

Reaksi fermentasi terungkap berkat adanya penunjuk pH, yang dalam media ini berwarna biru bromotimol.

Sebaliknya, kepekatan medium elektrolit yang rendah menghalang pertumbuhan invasif khas genus Proteus, yang disebut kesan penumpukan. Ini menghasilkan kelebihan berbanding media lain, kerana ia membolehkan penghitungan CFU, termasuk jika gen Proteus ada.

Walau bagaimanapun, kepekatan elektrolit yang rendah menghalang pertumbuhan beberapa spesies genus Shigella, ini menjadi kelemahan berbanding media lain.

Rasional untuk CLED agar (Bevis)

Terdapat varian atau modifikasi media ini yang dibuat oleh Bevis, yang memasukkan asid fuchsin (petunjuk Andrade) ke dalam komposisi asalnya. Ia berfungsi bersamaan dengan bromothymol blue untuk membezakan fermentasi daripada bakteria yang tidak fermentasi.

Perbezaan antara media konvensional dan modifikasi adalah warna yang diambil oleh koloni. Dalam kes bakteria penapaian laktosa, koloni berubah menjadi oren kemerahan dengan lingkaran merah jambu atau merah, sementara koloni bukan fermentasi berwarna kelabu kebiruan.

Permohonan

Agar CLED digunakan secara eksklusif untuk penyemaian sampel air kencing. Penggunaan medium ini sangat kerap berlaku di makmal Eropah, sementara di Amerika kurang digunakan.

Pengumpulan sampel mesti memenuhi parameter tertentu untuk mendapatkan hasil yang dapat dipercayai, termasuk:

• Tidak mengambil antibiotik sebelum mengambil sampel.
• Sebaiknya minum air kencing terlebih dahulu pada waktu pagi, kerana lebih pekat, apabila tidak mungkin mengambil sampel dengan kaedah invasif.
• Basuh alat kelamin dengan baik sebelum mengambil sampel.
• Buang aliran kencing pertama dan kemudian letakkan bekas.
• Kumpulkan 25 hingga 30 ml air kencing dalam bekas steril yang dilabel dengan baik.
• Segera bawa ke makmal yang dikelilingi ais.
• Ia mesti diproses dalam masa 2 jam selepas dikeluarkan atau didinginkan pada suhu 4 ° C selama maksimum 24 jam.

Pembibitan sampel air kencing

Sampel air kencing harus dicairkan 1:50.

Untuk pencairan, letakkan 0.5 ml air kencing pesakit dan cairkan dengan 24.5 ml larutan fisiologi steril.

Kira 0.1 ml air kencing yang dicairkan dan permukaan disebarkan dengan spatula drigalski pada medium CLED. Ini adalah kaedah penyemaian terbaik untuk mengira tanah jajahan. Atas sebab ini digunakan dalam sampel air kencing, kerana hasilnya harus dinyatakan dalam CFU / ml.

Untuk menghitung koloni yang diperoleh, lakukan seperti berikut: hitung koloni di atas pinggan dan kalikan dengan 10 dan kemudian dengan 50. Ini memberi anda jumlah air kencing CFU / ml.

Tafsiran

Kira di atas 100,000 CFU / ml -– Menunjukkan jangkitan kencing

Kira di bawah 1000 CFU / ml-– Tiada jangkitan

Mengira antara 1000-10,000 CFU / ml -– Keraguan, kemungkinan pencemaran, pengambilan sampel berulang.

ID

Koloni yang ditanam pada agar CLED harus mempunyai Gram dan bergantung pada ciri morfotintorial mikroorganisma, subkultur tertentu dilakukan.

Sebagai contoh, jika ia adalah bacillus Gram negatif, ia akan disemai pada agar MacConkey, di mana penapaian atau tidak laktosa diperkuat. Sebagai tambahan, agar nutrien dilekatkan untuk melakukan ujian oksidase.

Sekiranya Gram menunjukkan cocci positif Gram, ia dapat dikultur pada agar-agar manitol masin dan agar-agar nutrien. Pada yang terakhir, ujian katalase dijalankan. Akhirnya, jika ragi diperhatikan, ia akan disemai pada agar Sabouraud.

Banyak makmal mengelakkan penggunaan media CLED dan lebih suka menggunakan agar darah, MacConkey dan agar-agar nutrien daripada sampel air kencing.

Penyediaan

Dalam termos dengan satu liter air suling larutkan 36.2 g serbuk agar CLED. Setelah 5 minit berdiri, panaskan agar yang ditangguhkan semula, campurkan terus hingga mendidih selama 1 minit.

Kemudian sterilkan pada suhu 121 ° C selama 15 minit di autoklaf. Pada akhir masa, ia dikeluarkan dari autoklaf dan dibiarkan sejuk hingga suhu 45 ° C. Selepas itu, 15-20 ml disajikan dalam setiap hidangan Petri yang steril.

Prosedur penyediaan plat mesti dilakukan di dalam penutup aliran laminar atau di hadapan pembakar Bunsen untuk mengelakkan pencemaran.

Plat yang dihidangkan dibiarkan mengeras, disusun di rak terbalik dan disimpan di dalam peti sejuk (2-8 ° C) sehingga digunakan.

PH akhir medium yang disediakan hendaklah 7.3 ± 0.2.

Rujukan

1. Cadangan untuk diagnosis mikrobiologi jangkitan kencing. anak kecil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Terdapat di: scielo.org.
2. Panchi J. Pengenalpastian agen mikroba yang menyebabkan jangkitan saluran kencing pada pesakit dalam yang menjalani kateterisasi pundi kencing. 2016. Kerja sarjana untuk memenuhi syarat untuk memperoleh Ijazah Sarjana Muda di Makmal Klinikal. Universiti Teknikal Ambato. Ecuador.
3. Makmal Britannia. Medium CLED. Terdapat di: britanialab.com.
4. Makmal Renylab. Arahan penggunaan, CLED Agar. 2013 Terdapat di: es.renylab.ind.br.
5. Makmal Kultivasi. Manual Asas Mikrobiologi. Terdapat di: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Pilihan agar CLED dalam rutin kultur air kencing. Penilaian prospektif dan perbandingan. Diagnosis Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinikal praktikal. University of Cadiz, edisi ke-2. Perkhidmatan Penerbitan UCA.