MANIK AGAR STANDARD: RASIONAL, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The kiraan agar standard ialah, medium budaya bukan terpilih pepejal, direka untuk kuantifikasi aerobik beban hadir mikrob dalam sampel air minuman, air sisa, minuman tenusu, antara makanan lain. Medium ini juga dikenali sebagai agar PCA, kerana akronimnya dalam English Plate Count Agar. Ia dicipta pada tahun 1953 oleh Buchbinder, Baris, dan Goldstein.

Medium agar bilangan standard terdiri daripada ekstrak ragi, triptein, glukosa, agar, dan air suling. Rumusan ini mengandungi unsur pemakanan asas yang memungkinkan pengembangan beban mikrob aerobik sekarang, tidak menuntut.

Pencairan perpuluhan untuk mengira CFU dalam jumlah agar standard. Sumber: Quentin Geissmann

Oleh kerana media tidak mengandungi perencat, bakteria dapat tumbuh tanpa sekatan, menjadikannya sesuai untuk penghitungan koloni umum. Walau bagaimanapun, teknik pengkuantian plat tidak akan mengesan semua bakteria yang ada, tetapi hanya bakteria yang mampu tumbuh di bawah keadaan persekitaran yang menjadi sasaran agar bilangan biji yang dibiakkan.

Dalam pengertian ini, teknik kuantifikasi plat umumnya bertujuan untuk menentukan jumlah bakteria jenis mesofilik aerobik, iaitu, bakteria yang tumbuh pada suhu antara 25 hingga 40 ° C, dengan suhu pertumbuhan optimum 37 ° C. .

Kumpulan bakteria ini sangat penting, kerana sebilangan besar bakteria patogen untuk manusia terdapat di sana.

Harus diingat bahawa kadang-kadang mungkin menarik untuk mengukur jumlah bakteria psikofilik yang terdapat dalam makanan. Bakteria ini adalah bakteria yang tumbuh pada suhu rendah (<20 ° C) dan bertanggungjawab menyebabkan makanan terurai lebih cepat, walaupun disejukkan.

Begitu juga, bakteria termofilik, yang berkembang dalam jarak antara 50 ° C hingga 80 ° C atau lebih, boleh menjadi penting dalam jenis makanan tertentu seperti makanan dalam tin.

Pengukuran mikrob dinyatakan dalam unit pembentuk koloni (CFU) per gram atau mililiter sampel.

Asas

Medium kiraan standard direka untuk memungkinkan pertumbuhan bakteria aerobik yang tidak cepat kerana ekstrak ragi, triptein, dan glukosa memberikan nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroba yang baik.

Sebaliknya, media mempunyai warna terang dan penampilan yang telus, sebab itulah sangat sesuai untuk visualisasi koloni yang dikembangkan dengan kaedah penyemaian mendalam (menuangkan pinggan).

Pengiraan koloni dengan kaedah penyemaian permukaan spatula Drigalski juga mungkin.

Apabila beban mikroba tinggi, pencairan perpuluhan sampel kajian mesti dibuat untuk dapat mengira CFU.

Perlu diingatkan bahawa media ini disyorkan oleh Persatuan Kesihatan Awam Amerika (APHA) untuk pengiraan mesofil aerobik.

Penyediaan

Timbang 23.5 g medium dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Untuk larut sepenuhnya, campuran harus dipanaskan dengan kerap dikacau hingga mendidih. Langkah seterusnya bergantung pada teknik penyemaian yang akan digunakan.

Untuk teknik tuangkan pinggan

Sebarkan dengan memasukkan 12 hingga 15 ml ke dalam tabung uji. Selepas itu, sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Biarkan mengeras secara menegak dalam bentuk blok. Simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Cairkan palam semasa anda akan menggunakannya. Setelah cair, simpan di dalam air mandi pada suhu 44-47 ° C semasa sampel disediakan.

Untuk menyemai permukaan

Sterilkan medium dalam autoklaf pada suhu 121 ° C dan kemudian sebarkan 20 ml dalam piring Petri yang steril. Biarkan pekat, terbalik dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Plat suhu sebelum digunakan. PH medium hendaklah 7.0 ± 0.2.

Gunakan

Standard Count Agar digunakan dalam teknik penghitungan mesofilik aerobik semasa analisis mikrobiologi air dan makanan. Jumlah mesofil aerobik diperlukan, kerana ia menentukan kualiti kebersihan sampel yang dikaji.

Penerapan teknik ini (menggunakan media ini) memungkinkan visualisasi makroskopik koloni terpencil untuk pengukurannya.

Teknik tuangkan pinggan (penyemaian mendalam)

-Proses

Teknik ini terdiri daripada yang berikut:

1) Homogenkan sampel untuk mengagihkan semula bakteria yang ada.

2) Suspensi awal dibuat dalam botol atau beg steril, dengan menghitung nisbah 10 gr atau 10 ml sampel dalam 90 ml pelarut (10 ^-1 ).

3) Dari penggantungan awal, pencairan perpuluhan yang bersangkutan dibuat bergantung pada jenis sampel. Cth: (10 ^-2 , 10 ^-3 , 10 ^-4 ). Pengenceran dibuat dengan air peptone atau buffer fosfat.

Untuk melakukan ini, ambil 1 ml suspensi awal dan letakkan dalam 9 ml pelarut, teruskan pencairan jika perlu, sekarang ambil 1 ml pencairan 10 ^-2 dan seterusnya.

4) Ambil 1 ml setiap pencairan dan masukkan ke dalam piring Petri yang steril kosong.

5) Tambahkan ke setiap pinggan 12 hingga 15 ml agar kiraan standard yang sebelumnya dicairkan dan diendapkan pada suhu 44 - 47 ° C.

6) Putar pinggan perlahan-lahan untuk mengedarkan sampel di sepanjang agar agar sekata dan biarkan padat.

7) Balikkan pinggan dan inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam.

8) Pada akhir masa, plat diperiksa dan koloni dikira dalam pencairan yang memungkinkannya. Plat yang mempunyai antara 30 hingga 300 CFU dipilih untuk pengiraan.

Pengiraan boleh dilakukan secara manual atau anda boleh menggunakan peralatan kaunter koloni.

Nilai yang dibenarkan per ml sampel mungkin berbeza dari satu negara ke negara lain bergantung pada peraturan yang diaturnya.

-Pengiraan UFC

Pengiraan umum dilakukan dengan menggunakan formula berikut:

Formula untuk pengiraan umum pengukuran CFU. Sumber: Pentadbiran Nasional Ubat-ubatan, Makanan dan Teknologi Perubatan (ANMAT). Analisis mikrobiologi makanan, metodologi analitik rasmi, mikroorganisma penunjuk. Jilid 2014 2014. Terdapat di: anmat.gov.ar

Nyatakan hasilnya dalam 1 atau 2 digit, darabkan dengan asas 10 yang sesuai. Contoh: jika hasilnya adalah 16,545, ia dibundarkan berdasarkan digit ketiga menjadi 17,000 dan akan dinyatakan seperti berikut: 1.7 x 10 ⁴ . Sekarang, jika hasilnya adalah 16,436, bulatkan menjadi 16,000 dan nyatakan 1.6 x 10 ⁴ .

Teknik penyemaian permukaan

-Proses

-Inkular dengan 0.1 ml sampel langsung jika cair, suspensi awal 10 ^-1 atau pencairan berturut-turut 10 ^-2 , 10 ^-3 dll, di tengah-tengah plat agar kiraan standard.

-Taburkan sampel secara merata dengan spatula Drigalski atau batang kaca berbentuk L. Biarkan berehat selama 10 minit.

-Abalikkan pinggan dan inkubasi secara aerobik pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam.

-Lanjutkan untuk menghitung jajahan, pilih plat yang berada dalam jarak antara 20 - 250 CFU.

-Pengiraan UFC

Untuk pengiraan, faktor pencairan digunakan, yang merupakan kebalikannya. Nombor tersebut dibundarkan menjadi 2 digit penting (pembundaran mengikut digit ketiga) dan dinyatakan dalam kekuatan asas 10. Contohnya, jika 224 CFU dikira dalam sampel tanpa pencairan (10 ^-1 ), 22 x 10 ¹ CFU dilaporkan , tetapi jika angka itu 225, 23 x 10 ¹ CFU dilaporkan.

Sekarang, jika 199 CFU dikira dalam pencairan 10 ^-3 , 20 x 10 ⁴ CFU akan dilaporkan, tetapi jika 153 CFU dikira dalam pencairan yang sama, 15 x 10 ⁴ CFU akan dilaporkan.

QA

Medium kultur kiraan standard dapat dinilai menggunakan strain yang diperakui, seperti: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022

Sekiranya medium kultur dalam keadaan optimum, pertumbuhan yang memuaskan diharapkan dalam semua kasus, kecuali L. fermentum, yang dapat menghasilkan hasil yang tetap.

Untuk menilai kemandulan medium kultur, satu atau dua plat setiap kumpulan yang disediakan (tanpa inokulasi) harus diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam. Selepas masa ini, tidak ada pertumbuhan atau perubahan warna yang harus diperhatikan di media.

Batasan

-Jangan mencairkan agar lebih dari satu kali.

-Media yang disediakan boleh bertahan hingga 3 bulan asalkan disimpan di dalam peti sejuk dan dilindungi dari cahaya.

-Media ini tidak sesuai untuk menuntut mikroorganisma anaerobik atau.

Rujukan

1. Pentadbiran Negara Perubatan, Teknologi Makanan dan Perubatan (ANMAT). Analisis mikrobiologi makanan, metodologi analitik rasmi, mikroorganisma penunjuk. Jilid 2014 2014. Terdapat di: anmat.gov.ar
2. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Plate Count Agar. 2009. Terdapat di: http://f-soria.es
3. Makmal Conda Pronadisa. Standard Method Agar (PCA) mengikut APHA dan ISO 4833. Terdapat di: condalab.com
4. Makmal Britannia. Kiraan plat Agar. 2015. Terdapat di: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik Analisis Mikrobiologi Makanan. Edisi ke-2. Fakulti Kimia, UNAM. Mexico. Terdapat di: depa.fquim.unam