CZAPEK AGAR: RASIONAL, PENYEDIAAN, PENGGUNAAN DAN BATASAN - BIOLOGI - 2026

The Czapek (CZA) adalah medium pepejal terpilih direka khusus untuk berkembang bakteria saprophytic dan kulat. Ia dicipta oleh ahli botani Friedrich Johann Franz Czapek, asal Poland, dan ahli kimia Amerika Arthur Wayland Dox; untuk alasan ini, agar ini juga dikenali sebagai medium Czapek-Dox.

Medium asalnya cair, tetapi agar kemudian ditambahkan untuk menjadikannya medium padat. Medium Czapek terdiri dari natrium nitrat, bipotassium fosfat, magnesium sulfat, kalium klorida, besi sulfat, sukrosa, agar, dan air suling.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Sumber: A. Medmyco / B. Foto: Dr David Midgley. Wikipedia.com

PH agar-agar Czapek adalah 7.3, tetapi ada varian yang ditambahkan 10% asam laktat, pH yang tetap pada 3,5. Medium asid ini digunakan untuk penanaman mikroorganisma asidofilik.

Sebaliknya, beberapa rumah komersial mengubah komposisi agar Czapek dengan menukar magnesium sulfat dan bipotassium fosfat oleh gliserofosfat; pengubahsuaian ini menghalang pemendapan magnesium fosfat yang diperhatikan dengan formula konvensional daripada terbentuk. Begitu juga, ada varian lain yang ditambahkan ekstrak ragi.

Akhirnya, agar Czapek disyorkan oleh American Health Health Association APHA untuk kajian Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp dan Penicillium sp. Spesies ini dicirikan oleh mikroorganisma persekitaran dan patogen oportunis.

Asas

Medium ini mengandungi sukrosa; Karbohidrat ini berfungsi sebagai sumber karbon, sementara natrium nitrat adalah sumber nitrogen, tetapi tidak seperti media lain nitrogen yang disediakan tidak organik.

Atas sebab ini, medium Czapek dianggap selektif, kerana hanya mikroorganisma yang mampu menggunakan sebatian anorganik sebagai sumber nitrogen tunggal yang dapat tumbuh.

Sebagai bahan pengatur osmolariti medium adalah bipotassium fosfat. Sebaliknya, magnesium sulfat, kalium klorida dan feros sulfat menyediakan mineral penting untuk pertumbuhan mikroorganisma saprofit (hidup bebas). Formula ini membentuk endapan magnesium fosfat.

Akhirnya, agar-agar adalah sebatian yang memberikan konsistensi pepejal ke medium dan air adalah pelarut untuk semua komponen.

Dengan formula agar Czapek yang diubah, tidak ada pembentukan endapan dan ia meningkatkan prestasi pertumbuhan beberapa kulat.

Keasidan Asid Czapek Agar yang melampau menjadikannya medium yang lebih selektif, hanya memungkinkan pertumbuhan mikroorganisma asidofilik yang mampu menggunakan nitrogen bukan organik. Sementara itu, agar-agar ragi Czapek meningkatkan prestasi cendawan tertentu.

Penyediaan

Czapek-Dox Sederhana

Timbang 49 g medium kultur dehidrasi dan larutkan dalam air suling. Sapukan api hingga mendidih. Goncangkan campuran dengan kerap sehingga larut sepenuhnya.

-Czapek Agar Wedges

Sebarkan campuran yang dilarutkan ke dalam tiub dan autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Semasa mengeluarkan dari autoklaf, homogenkan sebelum meletakkan tiub dan biarkan mengeras.

-Pinggan agarzapek

Autoklafkan campuran yang dilarutkan pada suhu 121 ° C selama 15 minit dan biarkan sehingga sejuk hingga 50 ° C, homogenkan dan tuangkan 20 ml ke dalam piring Petri yang steril. Biarkan pekat, terbalik dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

PH harus kekal pada 7.3 ± 0.2. Warna medium dehidrasi berwarna putih dan medium yang disiapkan berwarna kuning muda, sedikit mendung kerana adanya endapan flokulasi.

Medium Czapek pada pH berasid

Sediakan seperti yang telah dijelaskan, tetapi tambahkan 10 ml asid laktik steril 10% untuk setiap liter medium yang disediakan. Medium Czapek yang diubah suai harus pada pH 3.5 ± 0.2.

Medium Czapek yang diubah suai

Timbang 45.4 g medium dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Selebihnya penyediaan adalah sama seperti yang dinyatakan di atas. Warna medium dehidrasi berwarna putih dan medium yang disediakan berwarna keputihan. PH akhir medium ialah 6.8 ± 0.2.

Medium czapek-yis

Juga dipanggil Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Ia mengandungi unsur agar-agar Czapek klasik dan ekstrak ragi.

Gunakan

Medium Czapek digunakan untuk mencari mikroorganisma saprofit dalam sampel tanah, sayur-sayuran, biji-bijian, udara, serangga, antara lain.

Agar Czapek pada pH berasid digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisma asidofilik, sementara agar Czapek yang diubahsuai sangat berguna untuk pembentukan klamidospora pada spesies kompleks Candida albicans.

Akhirnya, agar-agar ragi Czapek sangat berguna untuk pengasingan Aspergillus dan Penicillium.

Disemai

-Carap agar

Untuk mencari Actinomycetes di dalam tanah, lakukan seperti berikut: sampel diperlakukan dengan air fenol selama 30 min dan kemudian 1 mL suspensi ditaburkan pada agar Czapek. Inkubasi pada suhu 28 ° C selama 5 hingga 7 hari.

Untuk sampel sayur-sayuran, bijirin dan serangga, mereka diletakkan terus di atas agar. Anda juga boleh membuat pencairan dan biji 0.1 ml pada permukaan agar.

-Garam Czapek yang diubahsuai

Untuk penyemaian, gelung lurus atau jarum digunakan, diresapi dengan penyapu dan agar diinokulasi membuat tusukan sehingga menyentuh pangkal piring. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 28 ° C dan periksa di bawah mikroskop di atas dan di bawah plat untuk melihat apakah klamidospora telah terbentuk.

Suhu dan masa pengeraman

Suhu dan masa inkubasi berbeza-beza bergantung pada jenis mikroorganisma yang akan diasingkan. Plat biasanya diinkubasi selama satu hingga dua minggu dalam suhu antara 20 hingga 25 ° C.

Walau bagaimanapun, terdapat syarat khusus untuk beberapa strain. Sebagai contoh, kebanyakan spesies genus Aspergillus tumbuh secara optimum pada suhu 30 ° C; namun A. fumigatus tumbuh pada suhu 50 ° C.

Mengenai masa inkubasi satu atau dua minggu adalah normal, bagaimanapun, Candida albicans dapat berkembang dalam 24 hingga 48 jam pada suhu 25 ° C.

Ciri-ciri sebilangan koloni pada medium ini

-Penicillium atrovenetum

Ia berkembang dalam 12 hari pengeraman pada suhu 27 ° C. Jajahan mereka kecil (25 mm).

Koloni mempunyai penampilan yang halus, dengan sempadan putih yang ditentukan dan rona biru-hijau di tengahnya yang berubah menjadi kelabu seiring bertambahnya usia. Bahagian belakang koloni berwarna jingga, menjadikan bahagian tengahnya sama warna kerana penghasilan pigmen.

-Aspergillus niger

Ia berkembang dengan miselium putih hingga kuning dan spora hitam.

-Candida albicans

Koloni kuning muda berkrim berkembang. Dalam agar Czapek yang diubahsuai membentuk klamidospora.

-Aspergillus parasiticus

Miselium hijau gelap berkembang dalam 7 hari pada suhu 25 ° C.

QA

Untuk menilai kualiti medium kultur, strain kawalan yang diperakui dapat ditanam, seperti: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger mengembangkan miselium putih hingga kuning dan spora hitam dalam kira-kira 5 hari, sementara Candida albicans akan mengalami pertumbuhan yang memuaskan dalam 24 jam inkubasi pada 25 ° C; koloni berwarna krim.

Batasan

Beberapa kajian menunjukkan bahawa untuk pemulihan Actinomycetes, agar dengan hasil terbaik adalah agarxtxtrose kentang, dengan agar Czapek di tempat kedua, tetapi untuk pemulihan Aspergillus dan Penicillium, agar Czapek adalah salah satu yang memberikan kadar pemulihan tertinggi.

Rujukan

1. Dávila M, et al. Actinomycetes antagonis terhadap kulat fitopatogenik yang mempunyai kepentingan pertanian. Pendeta Mex. Sains. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Terdapat di: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Pengasingan strain Aspergillus niger, menghasilkan ochratoxin A, dalam kopi hijau yang tersimpan (Coffea arabica). Pendeta Mex. Mik. 2010; 32: 63-68. Terdapat di.scielo.org.
3. Penyumbang Wikipedia. Medium Czapek. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 13 Januari 2019, 20:30 UTC. Terdapat di: en.wikipedia.org
4. Makmal Conda Pronadisa. Agar Czapek-Dox yang diubah suai. Terdapat di: condalab.com
5. Microkit Media Budaya. Agar Czapek-Dox. Diosponible dalam: Medioscultivo.com