The agar Hektoen atau Hektoen perut agar medium pepejal adalah terpilih dan budaya yang berbeza. Ia dibuat di Institut Hektoen oleh King dan Metzger untuk pengasingan bakteria enteropatogenik dari gen Shigella dan Salmonella.
Medium terdiri daripada peptone proteosa, ekstrak ragi, garam hempedu, laktosa, sukrosa, salisin, natrium tiosulfat, natrium klorida, sitrat besi, amonium sitrat, biru bromotimol, fuchsin asid dan agar. Rumusan ini memungkinkan untuk membezakan genera Shigella dan Salmonella dari bakteria lain yang mampu tumbuh dalam medium ini.
A. agar Hektoen dara B. agar Hektoen biji. Sumber: Flickr.com/ Pengunggah asal adalah Philippinjl di Wikipedia Perancis.
Walaupun ada media lain dengan fungsi yang sama dengan agar Hektoen, ia mempunyai kelebihan yang lebih besar dibandingkan dengan media lain, terutama ketika anda ingin memulihkan spesies Shigella.
Spesies kedua-dua jantina menyebabkan masalah gastrointestinal yang teruk pada manusia kerana pengambilan makanan yang tercemar; oleh itu penyebarannya adalah kotoran - oral. Itulah sebabnya penggunaan agar Hektoen ditunjukkan terutamanya dalam analisis mikrobiologi sampel najis dan makanan.
Asas
Hektoen Agar mengandungi peptone dan ekstrak ragi sebagai sumber nutrien, menyediakan unsur penting untuk pengembangan mikroba.
Namun, ia juga mempunyai garam hempedu yang bertindak dengan menghalang pertumbuhan beberapa bakteria, terutama Gram positif dan beberapa Gram negatif. Atas sebab inilah ia dianggap sebagai media selektif.
Sebaliknya, agar Hektoen adalah medium pembezaan. Harta ini diberikan oleh kehadiran karbohidrat yang dapat ditapai seperti laktosa, sukrosa dan salisin, bersama dengan sistem penunjuk pH, yang diwakili oleh bromothymol blue dan asid fuchsin.
Semua bakteria yang mampu tumbuh pada medium ini yang tidak tergolong dalam genus Salmonella dan Shigella akan mengembangkan koloni salmon atau oren kecuali genus Proteus. Ini disebabkan oleh penapaian satu atau lebih karbohidrat yang ada, yang mengasidkan medium, yang menjadikan penunjuk pH berubah.
Sebaliknya, genus Shigella dan Salmonella tidak mampu menetap salah satu karbohidrat yang ada, hanya menggunakan peptone sebagai sumber tenaga, yang mengalkali medium dan oleh itu koloni mereka berwarna biru-hijau.
Bakteria yang mampu membentuk hidrogen sulfida (gas tidak berwarna) juga dapat dibezakan dalam medium ini. Natrium tiosulfat bertindak sebagai sumber sulfur sementara sitrat besi adalah pengembangnya. Kedua-dua sebatian tersebut memungkinkan pembentukan endapan hitam sulfida besi yang menunjukkan tindak balas.
Endapan hitam di tengah-tengah koloni dengan lingkaran cahaya lutsinar di sekitarnya memberikan penampilan mata ikan. Ciri ini menunjukkan adanya genus Salmonella.
Akhirnya, natrium klorida mengekalkan keseimbangan osmotik dan agar memberikan konsistensi pepejal ke medium.
Penyediaan
Timbang 76 g medium dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Goncangkan campuran dengan kuat dan kemudian biarkan berehat selama 10 hingga 15 minit. Ia boleh dipanaskan dan direbus, memberikan pergerakan putar hingga larut totalnya. Medium ini tidak ditutup secara autoklaf.
Apabila medium mencapai suhu sekitar 45 ° C, isipadu 20 ml dituangkan terus ke dalam piring Petri yang steril.
Agar dibiarkan mengeras. Pada masa itu mereka sudah siap digunakan. Adalah disyorkan untuk menggunakannya dengan segera. Sekiranya ini tidak mungkin, mereka disimpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.
Pinggan harus dikeluarkan dari peti sejuk terlebih dahulu sebelum menyemai untuk membawanya ke suhu bilik.
PH medium hendaklah 7.5 ± 0.2. Warna medium dehidrasi berwarna ungu dan medium yang disiapkan berwarna hijau kecoklatan.
Gunakan
Penggunaan agar Hektoen disyorkan untuk mencari bakteria genus Shigella dan Salmonella dalam sampel najis dan makanan.
Kemungkinan mengasingkan bakteria ini meningkat jika sampel sebelumnya diperkaya dengan kaldu khas, seperti kaldu selenit, kaldu selenit sistin, kaldu tetrathionat, dll.
Inokulum mesti kuat dan penyemaian dilakukan dengan mencantum. Plat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam aerobiosis.
Inkubasi selama 48 jam disyorkan kerana ciri-ciri koloni lebih jelas untuk tafsiran dan pembezaannya pada masa ini.
QA
Untuk melakukan kawalan kualiti pada medium ini, strain bakteria yang diperakui digunakan, seperti: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 dan Shigella sonnei ATCC 25931.
Hasil yang diharapkan adalah seperti berikut: Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis harus mengembangkan koloni biru-hijau dengan atau tanpa pusat hitam. Manakala spesies Shigella akan tumbuh sebagai koloni hijau-hijau.
Strain Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923 juga dapat disertakan.
Dalam kes ini, ciri-ciri yang diperhatikan adalah seperti berikut: E. coli dan K. pneumoniae akan mengembangkan koloni salmon-oren dalam medium ini, dengan endapan warna yang sama di sekitarnya. Manakala, Proteus akan mengembangkan koloni hijau-hijau dengan atau tanpa pusat hitam.
Walaupun S. aureus dan E. faecalis mesti dihambat, E. faecalis kadang-kadang berjaya tumbuh sebagai koloni kuning yang sangat kecil.
Sebaliknya, kerana medium ini tidak ditutup secara autoklaf, adalah mustahak untuk menilai kemandulan medium tersebut. Oleh itu, dari setiap kumpulan yang disediakan, satu hingga dua plat yang tidak diinokulasi harus diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Jelas tidak ada pertumbuhan apa-apa jenis di atas pinggan.
Batasan
-Spesies Proteus dapat berkembang dalam medium ini dan ciri-ciri koloni mereka dapat dikelirukan dengan spesies Salmonella atau Shigella. Atas sebab ini, setiap koloni yang mencurigakan mesti disahkan dengan ujian biokimia.
-Ini perlu untuk menyertai penggunaan media ini dengan agar lain yang kurang selektif, kerana jika mikroorganisma yang dicari berada dalam kepekatan rendah, ia mungkin tidak berkembang dalam media ini.
-Jangan terlalu panas semasa penyediaan, kerana haba berlebihan mengubah komposisi medium.
-Biasanya, koloni penapaian laktosa Salmonella mungkin muncul yang mungkin tidak disedari.
Rujukan
- Penyumbang Wikipedia. Agar enterik Hektoen. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 13 Mac 2019, 23:38 UTC. Terdapat di: .wikipedia.org / Diakses pada 16 Mac 2019.
- Makmal BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Terdapat di: bd.com
- Makmal Britannia. Agar Enterik Hektoen. 2015. Terdapat di: britanialab.com
- Makmal Difco Francisco Soria Melguizo. Agar Hektoen. Terdapat di: f-soria.es
- Manual Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. Edisi ke-2. Terdapat di: bd.com/europe