LIA (BESI LISIN) AGAR: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The LIA agar (Lysine Iron) adalah ujian biokimia digunakan untuk mengenal pasti bakteria dalam keluarga Enterobacteriaceae itu. Medium ini dibuat oleh Edwards dan Fife, berdasarkan formula Falkow.

Pada asalnya ujian ini adalah kaldu yang mengandungi pepton, ekstrak ragi, glukosa, L-lisin, bromokresol ungu, dan air suling. Edwards dan Fife menambahkan agar-agar, ferrik ammonium sitrat, dan natrium tiosulfat.

Ujian positif dan negatif untuk dekarboksilasi lisin. Sumber: Gambar dan harta rajah pengarang MSc. Marielsa gil

Ujian pada dasarnya terdiri daripada menunjukkan kehadiran enzim lisin dekarboksilase, yang mampu bertindak balas dengan kumpulan karboksil asid amino L-lisin. Pembasmian asid amino juga boleh berlaku kerana adanya enzim laminin deaminase.

Selain itu, komposisi medium menunjukkan kemampuan beberapa genera bakteria untuk menghasilkan hidrogen sulfida. Akhirnya, kita juga dapat memerhatikan penghasilan gas di dalam atau tidak.

Asas

Ekstrak pepepton dan ragi

Seperti kebanyakan media kultur, Lysine Iron Agar mengandungi komponen yang menyediakan sumber nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Komponen ini diwakili oleh peptone dan ekstrak ragi.

Glukosa

Begitu juga, agar ini mengandungi glukosa sebagai karbohidrat yang boleh ditapai. Semua bakteria dalam keluarga Enterobacteriaceae diketahui fermentasi glukosa.

Langkah ini sangat penting, kerana ia akan bertanggungjawab untuk mengasidkan medium, suatu syarat penting bagi enzim lisin decarboxylase - jika ada - untuk bertindak pada substratnya.

Dalam beberapa genera bakteria, pengeluaran gas akibat fermentasi glukosa dapat diperhatikan.

Gas dibuktikan apabila ada perpindahan agar ke dalam tiub, meninggalkan ruang kosong di bahagian bawah tiub, atau oleh keretakan medium menjadi dua atau lebih bahagian.

L-lisin

Sebaik sahaja lisin di-decarboxylated, suatu diamine (cadaverine) dan karbon dioksida terbentuk.

Dekarboksilasi berlaku dengan adanya koenzim pyridoxal fosfat. Reaksi ini tidak dapat dipulihkan.

Petunjuk PH (bromokresol ungu)

Semua perubahan pH yang berlaku di media oleh pelbagai tindak balas dikesan oleh penunjuk pH ungu bromokresol.

Dalam pengertian ini, apabila terdapat pengasidan, medium berubah menjadi kuning, dan apabila terdapat pengalkalian, medium akan kembali ke warna ungu atau ungu yang asli.

Apabila deaminasi lisin berlaku kerana adanya enzim deaminase lisin, warna kemerahan terbentuk di permukaan, khas pada genus Proteus, Providencia, dan beberapa spesies Morganella.

Ini disebabkan oleh fakta bahawa semasa proses deaminasi asid alfa-keto-karbonik terbentuk, yang bertindak balas dengan amonium sitrat di hadapan oksigen, yang menyebabkan warna tersebut di atas.

Ferrik ammonium sitrat dan natrium tiosulfat

Sebaliknya, bakteria yang menghasilkan hidrogen sulfida akan dibuktikan dengan adanya natrium tiosulfat (sumber sulfur) dan ferum ammonium sitrat, yang merupakan pembangun H ₂ S.

Bakteria yang mempunyai enzim thiosulfate reductase mempunyai kemampuan untuk bertindak dengan mengurangkan natrium tiosulfat yang ada, membentuk sulfite dan hidrogen sulfida (H ₂ S).

Yang terakhir adalah gas yang tidak berwarna, tetapi apabila bertindak balas dengan garam besi ia membentuk sulfida logam besi, yang merupakan sebatian tidak larut (endapan hitam yang dapat dilihat).

Walau bagaimanapun, keupayaan untuk membentuk H ₂ S dengan medium ini tidak begitu dipercayai, kerana beberapa lysine decarboxylase bakteria negatif mampu menghasilkan H ₂ S tidak akan membentuk mendakan hitam, kerana keasidan yang boleh mengganggu sederhana. Oleh itu, disarankan untuk memeriksa dengan media lain yang mengandungi besi.

Tafsiran ujian

Dekarboksilasi lisin

Tiub harus dibaca setelah 24 jam inkubasi, jika tidak, terdapat risiko salah menafsirkan reaksi, melaporkan negatif palsu.

Perlu diingat bahawa reaksi pertama yang akan berlaku adalah fermentasi glukosa, oleh itu semua tiub selepas 10 hingga 12 jam akan menjadi kuning.

Sekiranya pada akhir masa inkubasi (24 jam) latar belakang kuning dengan permukaan ungu atau ungu diperhatikan, reaksi negatif. Warna ungu permukaan sesuai dengan alkalinisasi medium dengan penggunaan peptones.

Reaksi positif adalah reaksi di mana bahagian bawah dan permukaan tiub berwarna ungu sepenuhnya, iaitu kembali ke warna semula.

Oleh itu, yang menentukan positif ujian adalah asas atau latar belakang media. Sekiranya ragu-ragu mengenai warnanya, ia boleh dibandingkan dengan tiub LIA yang tidak diinokulasi.

Pembasmian lisin

Tiub yang menunjukkan deaminasi lisin akan mempunyai permukaan marun kemerahan dan latar belakang kuning (asid), atau keseluruhan tiub merah marun.

Tindak balas ini ditafsirkan sebagai negatif untuk dekarboksilasi lisin, tetapi positif untuk penyahbauan lisin.

Tindak balas ini ditakrifkan dan ditafsirkan pada bezel.

Pengeluaran hidrogen sulfida (H

Reaksi positif diperhatikan oleh kemunculan endapan hitam di seluruh atau sebahagian medium. Biasanya antara tepi serong dan pangkal.

Sekiranya endapan berlaku di seluruh tiub, ia tidak akan menunjukkan reaksi lain yang berlaku di tengah.

Rekod keputusan

Semasa menafsirkan ujian, hasilnya dicatat seperti berikut:

Pertama bevel dibaca, kemudian bahagian bawah atau blok, kemudian pengeluaran H ₂ S, dan akhirnya pengeluaran gas.

Contoh: K / A + (-). Ini bermaksud:

• K: Bezel alkali (warna ungu)
• A: Latar belakang asid (kuning), iaitu tindak balas dekarboksilasi negatif dan penyahmapan negatif.
• +: Pengeluaran hidrogen sulfida
• (-): Tanpa gas.

Penyediaan

Timbang 35 g medium lisin agar besi dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling.

Panaskan sehingga agar larut sepenuhnya, untuk melakukan ini, rebus selama satu minit, kacau selalu. Sebarkan 4 ml medium ke dalam tabung uji 13/100 dengan penutup kapas.

Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan berdiri pada sudut sehingga terdapat dasar yang dalam dan serong pendek.

Simpan di dalam peti sejuk 2-8 ° C. Biarkan suam sebelum menyemai ketegangan bakteria.

Warna medium yang dikeringkan berwarna kuning air dan medium yang disediakan berwarna ungu kemerahan.

PH akhir medium yang disediakan ialah 6.7 ± 0.2

Medium bertukar menjadi kuning pada pH 5.2 atau kurang, dan berwarna ungu pada pH 6.5 ke atas.

Permohonan

Ujian ini, bersama dengan ujian biokimia lain, digunakan untuk mengenal pasti bacilli dari keluarga Enterobacteriaceae.

Medium disematkan dengan gelung lurus atau jarum, satu atau dua tusukan dibuat ke bahagian bawah tiub, dan kemudian permukaan media dijaringkan secara zigzag.

Inkubasi selama 24 jam pada suhu 35-37 ° C dalam aerobiosis. Sekiranya perlu, dibiarkan untuk diinkubasi selama 24 jam lagi.

Ia sangat berguna untuk membezakan spesies Citrobacter negatif laktosa dari Salmonellas sp.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

Rujukan

1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Makmal Britannia. Agar besi lisin. 2015. Terdapat di: britanialab.com
5. Makmal BD. Slant Agar Besi Lysine BBL. 2007. Terdapat di: bd.com
6. Makmal Valtek. Medium LIA 2009. Terdapat di: andinamedica.com