AGAR MRS: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The MRS agar adalah pepejal budaya sederhana terpilih digunakan untuk pengasingan dan penghitungan bakteria asid laktik, terutamanya Lactobacillus genus. Agar ini diciptakan pada tahun 1960 oleh Man, Rogosa dan Sharpe, dengan nama yang sama, tetapi kerana kerumitannya, singkatan MRS sering digunakan.

Ia terdiri daripada peptone proteosa, ekstrak daging, ekstrak ragi, glukosa, sorbitan monoleat, dipotassium fosfat, natrium asetat, amonium sitrat, magnesium sulfat, mangan sulfat, dan agar.

Man Rogosa dan Sharpe Agar (MRS) diunggulkan dengan Lactobacillus sp. Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini oleh penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto yang diambil semasa penyelidikan bertajuk: Penilaian bakteria asid laktik dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan najis bayi. .

Komposisi ini memungkinkan pengembangan bakteria asid laktik yang betul dari sampel klinikal, seperti tinja, keputihan, sampel oral dan susu ibu, serta makanan tenusu dan daging.

Ia tidak digunakan secara rutin di makmal klinikal, kerana bakteria asid laktik jarang terlibat dalam proses penyakit. Walau bagaimanapun, dalam bidang mikrobiologi makanan, penggunaan agar MRS lebih kerap berlaku.

Sebaliknya, media ini digunakan oleh beberapa Pusat Penyelidikan yang objektifnya adalah kajian mengenai bakteria asid laktik.

Asas

Man, Rogosa dan Sharpe agar mempunyai komposisi yang agak kompleks. Dengan menguraikan fungsi setiap komponennya, asasnya dapat dijelaskan.

Proteosa peptone, ekstrak daging, ekstrak ragi dan glukosa adalah nutrien yang menyediakan sumber karbon, nitrogen, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Tambahan pula, glukosa adalah sumber tenaga sejagat yang digunakan di kebanyakan media kultur.

Sebaliknya, untuk memihak kepada pertumbuhan bakteria asid laktik, kehadiran kofaktor (kation) penting dalam metabolisme Lactobacillus dan bakteria yang berkaitan adalah perlu; Sebatian ini adalah garam natrium, magnesium, dan mangan.

Begitu juga, sorbitan monoleat atau polysorbate 80 adalah sumber asid lemak yang penting kerana ia diserap sebagai nutrien.

Selanjutnya, sorbitan monoleat dan amonium sitrat bertindak dengan menghalang perkembangan flora yang menyertainya, terutama bakteria Gram negatif, memberikan sifat selektif agar ini.

Akhirnya, agar-agar adalah yang memberikan konsistensi pepejal ke medium.

Terdapat varian lain dari agar Rogosa Sharpe Man; salah satunya dilengkapi dengan sistein (MRSc), sangat berguna untuk pengasingan bifidobakteria, antara mikroorganisma lain. Sebaliknya, terdapat medium MRS yang dilengkapi dengan neomycin, paromomycin, asid nalidixic dan lithium chloride, khas untuk pengiraan selektif bifidobakteria dalam produk tenusu.

Penyediaan

Timbang 68.25 gram medium dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Biarkan selama 5 minit. Untuk larut sepenuhnya, beralih ke sumber panas, kacau kerap, dan rebus selama 1 hingga 2 minit. Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.

Semasa meninggalkan autoklaf, biarkan selama beberapa minit dan sebarkan sambil masih panas dalam piring Petri yang steril.

Biarkan mengeras dan membalikkan pinggan, memesan di rak pinggan dan sejukkan sehingga digunakan. Biarkan pinggan panas hingga suhu bilik sebelum digunakan.

PH medium hendaklah 6.4 ± 0.2. Beberapa rumah komersial mengesyorkan pH antara 5.5 hingga 5.9.

Medium dehidrasi berwarna kuning air dan disiapkan berwarna kuning gelap.

Kedua-dua medium dehidrasi dan plat siap hendaklah disimpan pada suhu 2-8 ° C.

Permohonan

Plat agar MRS dapat ditanam di permukaan (keletihan atau Drigalski spatula). Ia juga dapat disemai secara mendalam. Plat hendaklah diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroerofilisis (4% O ₂ dan 5-10% CO ₂ ) selama 24 hingga 72 jam.

Kaedah menyemai dipilih mengikut tujuan yang dikejar (pengasingan atau pengiraan).

Ciri-ciri tanah jajahan

Koloni yang disangka Lactobacillus tumbuh berwarna keputihan dan mempunyai penampilan mukoid atau berkrim pada agar ini. Mereka kemudiannya mesti dikenali.

Pengasingan bakteria asid laktik

Untuk ini, penyemaian permukaan digunakan. Sampel yang hendak disemai memerlukan prosedur sebelumnya.

Sekiranya sampel susu ibu, disarankan untuk menyentrifer 1 ml sampel pada 14.000 rpm selama 10 minit, untuk menghilangkan lapisan lemak. 900 µl dibuang, dan selebihnya 100 µl sedimen ditangguhkan dan dituangkan ke permukaan agar MRS. Kemudian hendaklah diedarkan secara merata dengan spatula Drigalski.

Bagi sampel najis, satu (1) gram tinja ditimbang dan dihomogenkan dalam 9 mL 0,1% peptone steril, sesuai dengan pencairan 1/10. Kemudian pencairan bersiri dibuat, sehingga pencairan akhir 10-4 ^diperolehi .

Akhirnya, 100 μl dari 10 ^-2 , 10 ^-3 dan 10 ^-4 pencairan diambil dan setiap pencairan disemai pada agar MRS, menyebar secara merata dengan spatula Drigalski.

Kiraan bakteria asid laktik

Dalam kes ini, penaburan dilakukan secara mendalam.

Untuk sampel susu ibu, 1 mL diambil dan dimasukkan ke dalam tiub plastik kerucut steril. Agar MRS ditambahkan pada suhu kira-kira 40 ° C hingga isipadu akhir 25 mL, memperoleh campuran homogen. Selepas itu, dituangkan ke dalam piring Petri steril secara seragam dan dibiarkan sehingga polimerisasi.

Untuk sampel najis, pencairan dibuat, seperti yang dijelaskan sebelumnya. Ambil 1 mL setiap pencairan dan letakkan di dalam tiub plastik kerucut steril. Agar MRS cair ditambahkan pada isipadu 25 mL.

Campuran setiap pencairan dituangkan sama rata ke dalam piring Petri yang steril. Akhirnya, dibiarkan berehat sehingga pempolimeran.

Jumlah koloni pada Man Rogosa dan Sharpe (MRS) agar. Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini. Penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto yang diambil semasa Penyelidikan bertajuk: Penilaian bakteria asid laktik dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan tinja bayi.

Tahap penyelidikan

Setiap hari kajian mengenai bakteria asid laktik semakin menarik; Penyelidik terutamanya ingin belajar mengenai strain baru dan potensinya sebagai fermentasi starter untuk standardisasi dalam pembuatan produk tenusu, antara kegunaan lain.

Dalam pengertian ini, Alvarado et al. (2007) menggunakan agar MRS untuk menjalankan kajian di mana mereka mengasingkan, mengenal pasti dan mencirikan bakteria asid laktik yang terdapat dalam keju salai Andean Venezuela.

Dalam keju mereka mendapati adanya bakteria dari Lactococcus dan Lactobacillus genera, dan menyimpulkan bahawa campuran strain terpencil sesuai sebagai strain starter dalam pembuatan keju dari susu pasteur.

Sebaliknya, Sánchez et al. (2017) menggunakan agar MRS untuk menyiasat kehadiran bakteria asid laktik di saluran pencernaan anak babi, untuk menggunakannya sebagai probiotik asli yang meningkatkan produktiviti babi yang sihat.

Dengan medium ini mereka berjaya mengasingkan empat spesies: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae dan Pediococcus pentosaceus.

Begitu juga, Báez et al. (2019) menggunakan agar MRS untuk menilai bakteria asid laktik (LAB) dan bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan tinja bayi.

Mereka berjaya mengasingkan 11 BAL dan 3 Bifidobacteria sp dalam susu ibu, dan 8 BAL dan 2 Bifidobacteria sp. dalam tinja. Semua memenuhi parameter tertentu yang membuktikannya sebagai bakteria dengan aktiviti probiotik.

Penulis menyimpulkan bahawa susu ibu dan najis bayi yang diberi susu ibu secara eksklusif berfungsi sebagai sumber bakteria probiotik semula jadi.

QA

Untuk menilai kualiti agar MRS, kawal regangan seperti:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli dan Bacacillus cerei

Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan untuk 6 bakteria pertama, sementara E. coli dan Bacillus cereus mesti dihambat sepenuhnya.

Rujukan

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Pengasingan, Pengenalpastian dan Pencirian Bakteria Asid Laktik Keju Artisan Andean Asap Venezuela. Penggunaannya sebagai Permulaan Budaya. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Terdapat di: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Pengasingan Bakteria Asid Laktik dari Saluran Pencernaan Babi. Pendeta investiga. doktor haiwan. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Terdapat di: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Penilaian bakteria asid laktik dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam susu ibu dan tinja bayi di perbandaran Acevedo, Miranda 2017. Kerja sarjana untuk memenuhi syarat untuk memperoleh Ijazah Sarjana Muda dalam Bioanalisis. Universiti Carabobo, Venezuela.
4. Makmal Britannia. Agar MRS. 2015. Terdapat di: britanialab.com
5. Penyumbang Wikipedia. Agar MRS. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 10 Januari 2018, 19:44 UTC. Terdapat di: wikipedia.org Diakses pada 17 Februari 2019.
6. Roy D. Media untuk pengasingan dan penghitungan bifidobakteria dalam produk tenusu. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.