AGAR DEKSTROSA KENTANG: RASIONAL, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

Agar kentang dekstrosa adalah kultur nutrien sederhana dan padat. Spesies bakteria dan kulat boleh tumbuh di dalamnya, tetapi penggunaannya ditunjukkan terutamanya untuk pengasingan kulat dan ragi filamen. Ia juga dikenali sebagai media PDA untuk ekspresi Inggeris Potato Dextrose Agar.

Ia sangat berguna untuk pengasingan kulat fitopatogenik, iaitu yang mempengaruhi tanaman. Untuk menyemai sampel dari sayur-sayuran yang dijangkiti, cara lain seperti agar Sabouraud atau malta-agar dapat digunakan, namun, untuk penggunaan rutin, agar dekstrosa kentang lebih disukai kerana diperolehi sporulasi yang lebih besar.

Aspergillus niger dan Sinemas masing-masing pada agar-agar dekstrosa kentang. Sumber: Alextrevelian 006 di Wikipedia Bahasa Inggeris / Joselrojas

Ia juga digunakan untuk penghitungan koloni kulat dalam sampel kosmetik, produk farmaseutikal dan beberapa makanan tenusu. Begitu juga, ia sesuai untuk menyemai sampel keretakan kulit untuk mencari dermatofit, yang tumbuh dengan baik di medium ini, mengembangkan pigmen ciri mereka.

Medium dekstrosa kentang adalah medium yang sangat mudah dan senang disediakan di makmal. Ini mengandung, seperti namanya, infus kentang, dekstrosa dan agar-agar. Selain itu, bahan penghambat dapat ditambahkan untuk mencegah pertumbuhan bakteria dan meningkatkan selektiviti untuk spesies kulat.

Asas

Agar kentang dekstrosa adalah media kultur yang menyediakan unsur-unsur nutrien yang diperlukan untuk pengembangan kulat dan ragi.

Kombinasi penyerapan kentang dengan glukosa memberikan sumber tenaga yang sempurna untuk pertumbuhan kulat yang memuaskan. Sedangkan agar-lah yang memberikan ketekalan kepada medium.

Medium sahaja tidak menghalang pertumbuhan bakteria, oleh itu ia adalah media yang tidak selektif. Untuk menjadikannya selektif, ia memerlukan penambahan bahan penghambat seperti asam tartarik atau antibiotik.

Penyediaan

-Penyediaan agar-agar dekstrosa kentang buatan sendiri (bukan komersial)

Hidangan Petri

Ia disediakan seperti berikut:

Pertama-tama, kentang dibasuh dengan sangat baik, menghilangkan tanah yang dimilikinya. Mereka dipotong menjadi kepingan nipis dengan segalanya dan tempurung. 200 gram kentang ditimbang dan direbus dalam satu liter air suling selama setengah jam.

Pada akhir masa, tapis atau tapis semua penyediaannya melalui kain tipis.

Cecair yang diperoleh diisi dengan air suling hingga satu liter. 20 g agar-agar dan 20 g dekstrosa ditambahkan ke dalam infus, dicampur dengan baik dan ditutup secara autoklaf pada suhu 121 ° C, pada tekanan 15 paun selama 15 minit.

Biarkan sejuk hingga 50 ° C dan hidangkan dalam piring Petri yang steril. Pinggan yang disediakan disimpan di dalam peti sejuk.

Baji

Biji agar dextrose agar juga boleh disediakan.

Dalam kes ini, sebelum disterilkan dalam autoklaf, 12 hingga 15 ml medium diletakkan di dalam tiub, kemudian ia ditutup secara autoklaf dan ketika meninggalkannya terletak di atas sokongan khas sehingga padat. Simpan di dalam peti sejuk.

Medium tetap pada pH 5,6 ± 0,2, namun, beberapa makmal menambahkan 10% asam tartaric untuk menurunkan pH menjadi 3.1 ± 0.1 untuk menghalang pertumbuhan bakteria.

Dalam pengertian yang sama, makmal lain lebih suka menambahkan antibiotik untuk menjadikannya selektif untuk penanaman kulat dan mencegah pertumbuhan bakteria.

-Penyediaan agar-agar dekstrosa kentang secara komersial

Timbang 39 g medium dehidrasi yang tersedia secara komersial dan larutkan dalam satu liter air suling. Biarkan berehat selama 5 minit.

Campuran dipanaskan dengan kerap dikacau hingga larut sepenuhnya. Selepas itu, disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.

Pinggan atau baji boleh disediakan. Teruskan seperti yang dijelaskan di atas.

PH kekal pada 5.6 ± 0.2. Sekiranya pH 3.1 diinginkan, 14 ml asid tartarik 20% steril harus ditambahkan sebelum disajikan ke piring.

Medium mentah berwarna krem ​​dan medium yang disiapkan berwarna kuning muda dengan penampilan yang sedikit mendung atau legam.

Permohonan

Proses untuk menyemai sampel tanaman pada agar-agar dekstrosa kentang

-Untuk daun berwarna

Daunnya dipotong kecil.

Dalam gelas 50 cc dengan alkohol 50%, letakkan potongan daun (kepingan bernoda dan sihat), untuk membasmi kuman permukaan selama 20 hingga 30 saat. Buang alkohol dan tambahkan 20% natrium hipoklorit selama 40 hingga 50 saat jika daunnya nipis dan tambah masa hingga 80 saat jika kulit kayu dan balak.

Buang natrium hipoklorit dan ambil kepingan yang dibasmi kuman dengan forceps steril dan letakkan di permukaan medium (maksimum 10 keping). Tetapkan tarikh dan inkubasi pada suhu 20-30 ° C.

-Untuk buah-buahan dan ubi

Sekiranya buahnya berdaging, buka buah yang terkena kulat dan ambil potongan dengan pisau bedah steril dari kedua-dua bahagian yang berpenyakit dan sihat dan letakkan di permukaan agar.

Sekiranya buahnya sitrus, seperti lemon atau oren, ia mesti dibuka dan benihnya disemai.

Apabila permukaan buah terjejas dan spora diperhatikan, yang ideal adalah menggunakan kaedah parut pada pinggan; Ini terdiri daripada menyentuh spora dengan spatula berbentuk "L" yang disterilkan dan disejukkan, dan kemudian membuat penyemaian zigzag 2 hingga 3 kali pada agar.

-Untuk biji-bijian

Mereka dibasmi kuman seperti yang dijelaskan di daun dan kemudian diletakkan di atas agar.

-Untuk dahan dan batang

Kulit kayu itu dikikis dan kemudian bahagian-bahagian bahagian yang sihat dan berpenyakit diambil dan disemai terus pada agar.

Plat benih diinkubasi secara aerobik pada suhu 20-30 ° C selama 72 jam.

Proses menyemai sampel skala kulit, rambut atau kuku pada agar-agar dekstrosa kentang

Pensampelan harus dilakukan dengan menggunakan pisau bedah No. 11, baik untuk memotong rambut yang terkena, sisik kulit atau kuku untuk mencari dermatofit. Sebelum mengambil sampel, kawasan tersebut harus dibasmi kuman dengan alkohol 70%.

-Sampel kulit

Pada lesi bersisik, tepi lesi harus dikikis, kerana kulat lebih cenderung dijumpai di sana.

Pada luka eksudatif, sampel diambil dengan swab kering atau basah. Taburkan segera pada agar-agar dekstrosa kentang atau agar Sabouraud. Elakkan alat pengangkutan.

Kaedah persampelan lain adalah melalui teknik permaidani Mariat dan Adan Campos. Dalam kes ini, kawasan yang disapu digosok 5 kali dengan sehelai bulu steril untuk penanaman seterusnya.

Sampel boleh dimasukkan terus ke media kultur.

-Sampel rambut

Bergantung pada patologi, bahagian yang terkena boleh dipotong atau dicabut. Letakkan sampel dalam medium kultur.

-Sampel kuku

Bahagian tertentu dari kuku yang terkena boleh dikikis atau dipotong. Itu akan bergantung pada jenis kecederaan.

Potong sampel menjadi kepingan 1 mm sebelum disemai untuk meningkatkan kebarangkalian terkena jamur dengan media kultur.

Prosedur pengenalan

Koloni yang diperoleh di atas piring diasingkan dalam tabung yang mengandungi agar dekstrosa kentang untuk kemudian menjalankan kajian makroskopik koloni (penampilan, warna, konsistensi, tahap perkembangan.

Kajian mikroskopik (pemerhatian struktur dan formasinya) dapat dilakukan oleh mikrokultur atau pemerhatian langsung di bawah mikroskop antara slaid dan slaid.

Kiraan jajahan

Medium ini juga dapat digunakan untuk menentukan muatan jamur dan ragi yang terdapat pada sampel tumbuhan, makanan, kosmetik atau ubat. Untuk tujuan ini, agar agar dekstrosa kentang ditambah dengan antibiotik digunakan, seperti: (chloramphenicol, chlorotetracycline atau kedua-duanya).

Tuang 1 ml sampel - lebih baik dicairkan - ke dalam piring Petri yang steril dan kosong, kemudian cairkan sebiji agar-agar dekstrosa kentang dan biarkan sejuk hingga 45 ° C. Tuangkan ke piring Petri dan putar hingga homogen. Biarkan berehat sehingga pekat.

Inkubasi secara aerobik pada suhu 20-25 ° C (acuan) atau 30-32 ° C (ragi) selama 5 hingga 7 hari atau lebih, bergantung pada jenis kulat yang dicari dan jenis sampel. Dua plat boleh digunakan untuk menginkubasi dalam kedua-dua julat suhu.

Pengiraan koloni kulat dalam sampel makanan. Agar dekstrosa kentang ditambah dengan antibiotik. Sumber: Pxhere.com foto / 777267

Pemeliharaan ketegangan kulat

Potato Dextrose Agar boleh digunakan untuk mengekalkan ketegangan kulat yang sesuai selama beberapa tahun.

Untuk ini, kulat ditanam pada hamparan agar-agar dekstrosa kentang dan apabila kulat tumbuh, ia ditutup dengan minyak mineral. Minyak harus disterilkan dalam autoklaf selama 45 minit, dan mempunyai kelikatan sekitar 300 hingga 330 Saybolt. Minyak mestilah 1 hingga 2 cm di atas hujung serong.

QA

Dari setiap kumpulan yang disediakan, ambil 1 atau 2 pinggan dan inkubasi pada suhu 25 ° C selama 48 jam atau pada 20 ° C selama 96 jam. Kawalan kemandulan yang baik adalah kawalan di mana perkembangan koloni tidak diperhatikan.

Strain kawalan yang dikenali atau diperakui juga boleh digunakan seperti:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Pertumbuhan yang baik dijangka dalam semua kes.

Rujukan

1. Makmal Britannia. Kentang agar-agar glukosa. 2015. Terdapat di: britanialab.com
2. Makmal Neogen. Agar Kentang Dextrose. Terdapat di: drinksafety.neogen.com
3. Makmal Insumolab. Agar kentang dekstrosa. Terdapat di: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Mikologi Umum. 1994. Edisi ke-2, Central University of Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Penilaian Kualiti Mikrobiologi dalam Pembayang Mata, Jenis Serbuk Ringkas Makmal Pengeluaran Negara, menurut Kaedah Rujukan Pharmacopea Usp 2005. Tesis untuk memenuhi syarat untuk mendapat gelaran Ahli Kimia Farmasi. Universiti San Carlos dari Guatemala.
7. Cuétara M. Pemprosesan sampel permukaan. Jurnal Mikologi Iberoamerican. 2007; hlm. 1-12