SABOURAUD AGAR: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The agar Sabouraud , juga dikenali sebagai Sabouraud Dextrose agar, merupakan satu medium pepejal, terutamanya diperkaya untuk pengasingan dan pembangunan kulat seperti yis, acuan dan dermatophytes.

Oleh itu, medium ini tidak kekurangan makmal mikrobiologi untuk menyiasat kehadiran kulat patogen atau oportunistik, sama ada dari sampel klinikal atau bukan klinikal. Begitu juga, ia sangat sesuai untuk pertumbuhan bakteria filamen seperti Streptomyces dan Nocardias. Penggunaannya sangat luas, kerana dapat digunakan pada mikologi manusia, binatang, tumbuhan dan industri.

A. agar-agar Sabouraud tanpa biji. B. agar Sabouraud dibiji dengan ragi. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa gil

Medium ini diciptakan pada tahun 1896 oleh ahli dermatologi terkemuka Raimond Sabouraud, yang menjadi pakar terkenal di dunia dalam gangguan kulit kepala, terutamanya disebabkan oleh dermatofit.

Penciptaannya sangat penting sehingga ia telah digunakan sejak dulu hingga sekarang, walaupun dengan beberapa pengubahsuaian.

Walaupun khusus untuk kulat, bakteria dapat tumbuh dalam media ini, oleh itu, untuk sampel dengan flora campuran, penyertaan antibiotik dalam penyediaannya diperlukan untuk menghalang pertumbuhan flora bakteria yang mungkin ada.

Pemilihan antibiotik mesti dibuat dengan teliti dan mengambil kira jenis jamur yang akan dipulihkan, kerana ada yang dihambat dengan adanya bahan tertentu.

Asas

Sabouraud dextrose agar adalah media yang dalam formulasi asalnya lemah selektif, kerana pH berasidnya 5,6 ± 0,2, namun, bakteria masih dapat berkembang, terutama pada inkubasi yang berpanjangan.

Medium mengandungi peptone kasein dan pencernaan pankreas tisu haiwan, yang menyediakan sumber karbon dan nitrogen untuk pertumbuhan mikroorganisma.

Ini juga mengandungi kepekatan glukosa yang tinggi, yang bertindak sebagai sumber tenaga, mendorong pertumbuhan kulat terhadap bakteria. Semua ini dicampur dengan agar-agar, komponen yang memberikan konsistensi yang tepat.

Sebaliknya, Sabouraud dextrose agar boleh menjadi selektif sekiranya antibiotik ditambahkan.

Dengan antibiotik, ia sangat berguna pada sampel luka, bisul terbuka atau sampel yang disyaki terdapat pencemaran bakteria.

Kombinasi Sabouraud dextrose agar yang paling biasa digunakan dengan antibiotik

-Saburaud agar dengan kloramfenikol: sesuai untuk memulihkan ragi dan kulat filamen.

- agar Sabouraud dengan gentamicin dan chloramphenicol: hampir semua kulat dan ragi filamen tumbuh di media ini, dan ia menghalang sebilangan besar bakteria, termasuk Enterobacteriaceae, Pseudomonas dan Staphylococcus.

- agar Sabouraud dengan sikloheksimida: sangat berguna untuk sampel dari kulit atau saluran pernafasan, selama kecurigaan adalah kulat dimorfik.

Cycloheximide harus digunakan dengan berhati-hati; Walaupun digunakan untuk menghambat pertumbuhan kulat dan ragi non-patogenik atau persekitaran yang mungkin terdapat sebagai bahan cemar dalam sampel, ia juga menghalang pertumbuhan beberapa kulat seperti Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp dan jamur oportunistik lain.

- agar Sabouraud dengan kloramfenikol ditambah sikloheksimida: ia digunakan terutamanya untuk mengasingkan dermatofit dan kulat dimorfik. Ia mempunyai keburukan bahawa ia menghalang beberapa spesies kulat oportunistik seperti Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes atau C. neoformans.

- Sabouraud agar dengan kloramfenikol, streptomisin, penisilin G dan sikloheksimida: sangat sesuai untuk sampel yang sangat terkontaminasi dengan bakteria dan kulat saprofit, tetapi mempunyai kelemahan bahawa ia menghalang pertumbuhan Actinomyces dan Nocardias, selain kulat oportunis yang disebutkan di atas.

Penyediaan

Sekiranya anda mempunyai ramuan secara berasingan, ia boleh disediakan seperti berikut:

Agar Sabouraud dextrose

Untuk menimbang:

- 40 gr dekstrosa

- 10 g peptone

- 15 gr agar-agar

- Ukur 1000 ml air suling

Semua bahan dicampurkan, pH disesuaikan dengan 5.6. Pelarut dilarutkan dengan mendidih, 20 ml medium diedarkan dalam tiub berukuran 25 x 150 mm, tanpa pelek dan sebaiknya dengan penutup kapas.

Tiub dengan penutup kapas. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa gil

Ukuran tiub lain juga boleh digunakan, bergantung pada ketersediaan.

Mereka ditutup secara automatik selama 10 minit pada suasana tekanan (121 ° C). Masa autoklaf tidak boleh dilebihi. Semasa meninggalkan autoklaf, tiub condong dengan bantuan penyangga sehingga ia padat dalam paruh seruling.

Cara lain adalah dengan melarutkan bahan dengan memanaskan sehingga mendidih. Autoklaf selama 10 minit dalam botol yang sama dan kemudian edarkan 20 ml dalam piring Petri.

Sekiranya anda mempunyai media agar Sabouraud dextrose yang sudah mengandung semua bahan, teruskan untuk menimbang jumlah yang ditentukan oleh syarikat komersial untuk satu liter air. Langkah-langkah selebihnya sama seperti yang dijelaskan di atas.

Sabouraud dextrose agar (Pengubahsuaian Emmons)

Untuk menimbang:

- 20 gr dekstrosa

- 10 g peptone

- 17 gr agar-agar

- Ukur 1000 ml air suling

Semua bahan dicampurkan, pH diselaraskan hingga 6.9. Teruskan dengan cara yang sama seperti kes sebelumnya.

Terdapat rumah komersial yang menawarkan medium dengan semua ramuan. Dalam kes ini, timbang dan sediakan seperti yang dijelaskan pada sisipan.

Sabouraud dextrose agar (pengubahsuaian Emmons) dengan chloramphenicol

Penyelesaian Stok Chloramphenicol

- Timbang 500 mg asas kloramfenikol

- Ukur 100 ml etanol 95%

- Campurkan

Medium agar-agar Sabouraud dextrose (Emmons) disediakan seperti yang telah dijelaskan sebelumnya dan sebagai tambahan untuk setiap liter medium tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol sebelum melakukan autoklaf.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar dengan Cycloheximide

Penyelesaian Saham Cycloheximide

- Timbang 5 gr sikloheksimida

- Ukur 100 ml aseton

- Campurkan

Medium agar Sabouraud dextrose (Emmons) disediakan seperti yang telah dijelaskan dan tambahan untuk setiap liter medium tambahkan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum melakukan autoklaf.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) dengan kloramfenikol dan sikloheksimida

Medium agar Sabouraud dextrose (Emmons) disediakan seperti yang telah dijelaskan dan tambahan untuk setiap liter medium tambahkan 10 ml larutan stok kloramfenikol dan 10 ml larutan stok sikloheksimida sebelum autoklaf.

Antibiotik lain yang boleh ditambah

20,000 hingga 60,000 unit penisilin per liter medium.

30 mg streptomisin seliter medium.

Kedua-duanya mesti digabungkan setelah media ditutup secara autoklaf, sedikit disejukkan (50-55 ° C).

0.04 g neomycin seliter medium.

0.04 g gentamicin per liter medium.

Pertimbangan khas

Untuk keselamatan, lebih baik menaburkan agar-agar Sabouraud dextrose dalam tabung berbentuk baji (cenderung dalam paruh seruling) daripada pada piring Petri, untuk mengelakkan penyebaran dan penyedutan spora.

Penting agar tabung agar Sabouraud ditutup dengan kapas dan bukan dengan penutup skru, kerana keadaan semi-anaerobik terbukti dapat menghalang pembentukan spora pada beberapa strain, misalnya Coccidioides immitis. Juga, kebanyakan kulat bersifat aerobik.

Sekiranya menggunakan penutup skru, jangan tutup secara hermetik.

QA

Media yang disediakan mesti menjalani kawalan kualiti untuk mengesahkan fungsinya. Untuk ini, tekanan kawalan tertentu disemai.

Untuk agar Sabouraud dextrose dengan chloramphenicol, strain ATCC Candida albicans dapat digunakan, yang mesti mempunyai pertumbuhan yang sangat baik. Plat lain diinokulasi dengan strain Escherichia coli, yang mesti dihambat sepenuhnya.

Plat yang tidak diinokulasi juga diinkubasi di mana mikroorganisma tidak boleh tumbuh.

Untuk agar Sabouraud dextrose dengan chloramphenicol dan cycloheximide, strain Trichophyton mentagrophytes dapat digunakan, dan mereka harus berkembang dengan baik. Plat lain diinokulasi dengan regangan Aspergillus flavus, di mana pertumbuhannya mesti sedikit atau tidak ada. Selain itu, plat yang tidak diinokulasi diinkubasi untuk menunjukkan kemandulannya.

Untuk Sabouraud dextrose agar dengan sikloheksimida, strain Candida albicans, Trichophyton rubrum atau Microsporum canis digunakan, yang mesti menunjukkan pertumbuhan yang baik.

Begitu juga, strain Aspergillus flavus disertakan, menunjukkan pertumbuhan sedikit atau tidak ada. Akhirnya, inkubasi plat yang tidak diinokulasi untuk mengawal kemandulan.

Permohonan

Budaya utama

Agar klasik dextrose Sabouraud mengandungi 4 gram dekstrosa dan sangat baik sebagai medium pengasingan utama, kerana ia menunjukkan ciri morfologi setiap kulat.

Ia juga bagus untuk menunjukkan pengeluaran pigmen. Namun, ini bukan kaedah terbaik untuk memerhatikan sporulasi.

Ia juga tidak digalakkan untuk mengusahakan Blastomyces dermatitidis, yang dihambat oleh kepekatan glukosa yang tinggi.

Sebaliknya, untuk penanaman pertimbangan tertentu mesti diambil kira.

Sebilangan kulat tumbuh paling baik pada suhu bilik, seperti acuan, yang lain berjaya tumbuh pada suhu 37 ° C, seperti beberapa ragi, dan yang lain dapat tumbuh pada kedua suhu (kulat dimorfik).

Atas sebab ini, kadang-kadang perlu menggunakan beberapa plat agar Sabouraud untuk sampel yang sama, kerana pembenihan pendua sering dilakukan untuk menginkubasi satu pinggan pada suhu bilik dan yang lain pada suhu 37 ° C.

Contohnya, Sporothrix schenckii disemai dalam dua pinggan; satu diinkubasi pada suhu bilik untuk mendapatkan fasa cetakan dan yang lain diinkubasi pada suhu 37 ° C untuk mendapatkan fasa ragi, tetapi pada yang terakhir perlu menambahkan 5% darah ke medium.

Dalam kes lain, seperti sampel mycetoma, dua plat agar Sabouraud ditanam, satu dengan kloramfenikol dan satu lagi dengan sikloheksimida. Yang pertama akan memungkinkan pertumbuhan agen penyebab mycotoma asal kulat (Eumycetoma) dan agen penyebab kedua mycetoma asal bakteria, seperti actinomycetomas.

Sporulasi

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar mengandungi 2 gram dekstrosa dan tidak hanya digunakan untuk pengasingan, tetapi juga untuk sporulasi dan pemeliharaan kulat.

Dalam medium ini, strain Blastomyces dermatitidis dapat dipulihkan.

Pemuliharaan

Untuk mengekalkan budaya cendawan, ia boleh disimpan di dalam peti sejuk (2-8 ° C). Masa pemuliharaan boleh berbeza antara 2 hingga 8 minggu. Selepas masa ini mereka mesti dikultur untuk mengulangi prosesnya.

Sebilangan kulat paling baik pada suhu bilik, seperti Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum, dan Microsporum audounii.

Pemeliharaan regangan dapat diperpanjang untuk mengelakkan pleomorfisme jika dekstrosa dikeluarkan sepenuhnya dari agar dan jika jumlah agar dalam medium dikurangkan untuk mengelakkan kekeringan.

Mikrokultur

Untuk mengenal pasti beberapa kulat filamen, perlu melakukan mikrokultur menggunakan agar Sabouraud atau kaedah khas lain untuk memerhatikan struktur pembiakan seksual dan aseksual.

Dalam mikologi manusia

Ia digunakan terutamanya untuk diagnosis penyakit kulat, terutama yang mempengaruhi kulit dan lekatannya (rambut dan kuku).

Sampel boleh berupa rembesan, eksudat, kulit, rambut, kuku, dahak, CSF atau air kencing. Patogen yang sering diasingkan adalah dermatophytes, kulat yang menyebabkan mycoses subkutan dan sistemik.

Mikologi haiwan

Haiwan sering terkena jangkitan kulat, oleh itu agar Sabouraud berguna dalam mikologi haiwan seperti pada manusia.

Contohnya, dermatofit selalunya boleh mempengaruhi haiwan. Begitu juga dengan Microsporum canis var distortum, yang sering menjangkiti anjing, kucing, kuda, babi dan monyet. Begitu juga, Microsporum gypseum menjangkiti anjing, kucing dan ternakan.

Burung seperti ayam, ayam jantan, dan ayam dipengaruhi oleh Microsporum gallinae.

Kulat lain, seperti Zymonema farciminosum, juga merupakan penyebab penyakit pada haiwan, terutamanya pada kuda, keldai dan keldai, yang menyebabkan keradangan yang ketara pada saluran limfa.

Sporothrix schenkii dan Histoplasma capsulatum mempengaruhi haiwan dan manusia domestik.

Mikologi alam sekitar

Banyak kulat patogen atau oportunistik dapat berkonsentrasi pada waktu tertentu dalam lingkungan tertentu, terutama di bilik operasi dan Unit Rawatan Rapi (ICU) klinik dan hospital. Oleh itu, perlu dilakukan kawalan terhadapnya.

Ruang rentan lain adalah perpustakaan dan bangunan lama, yang boleh dipengaruhi oleh kepekatan kulat persekitaran.

Dalam kajian alam sekitar, agar Sabouraud dextrose digunakan untuk pengasingan kulat.

Mikologi industri

Agar Sabouraud dextrose tidak dapat hadir untuk kajian mencemari kulat dalam pengeluaran kosmetik, makanan, minuman, kulit, tekstil, antara lain.

Tumbuhan mikologi

Tumbuhan juga menderita penyakit yang disebabkan oleh kulat, yang mempengaruhi bahagian tanaman yang berbeza, yang bahkan dapat menamatkan penuaian, menyebabkan kerugian besar dalam pertanian.

Rujukan

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Diagnosis mikrobiologi mikosis dan kepekaan antijamur Saranan Persatuan Penyakit Berjangkit Sepanyol dan Mikrobiologi Klinikal. Terdapat di: coesant-seimc.org
2. Makmal ValteK. (2009). Sabouraud dextrose agar dengan sikloheksimida. Terdapat di: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Mikologi veterinar. Universiti Agraria Nasional. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Mikologi Umum. 1994. Edisi ke-2, Central University of Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.