AGAR DARAH: RASIONAL, PENGGUNAAN DAN PENYEDIAAN - BIOLOGI - 2025

The agar darah adalah medium budaya yang kukuh diperkaya pengkamiran tetapi tidak terpilih. Ia digunakan untuk pemulihan dan pertumbuhan pelbagai mikroorganisma dari sampel klinikal atau untuk subkultur.

Agar darah klasik harus dimasukkan untuk penyebaran kebanyakan sampel klinikal yang diterima di makmal; kecuali sampel najis di mana ia tidak berguna, kecuali disediakan dengan pengubahsuaian tertentu.

Plat agar darah

Medium kultur ini pada dasarnya terdiri daripada agar asas yang diperkaya dan 5% darah. Asas agar dapat berubah-ubah sesuai dengan kebutuhan, tetapi terutama terdiri dari pepton, asam amino, vitamin, ekstrak daging, natrium klorida, agar, antara lain.

Mengenai darah, biasanya diperlukan kontak dengan vivarium untuk mendapatkan darah dari binatang, seperti domba, arnab atau kuda. Walau bagaimanapun, ini tidak selalu mungkin dan kadangkala darah manusia digunakan.

Medium agar darah boleh disediakan di makmal atau boleh dibeli siap pakai dari syarikat yang berdedikasi. Penyediaan medium ini adalah salah satu yang paling halus, kecerobohan dalam penyediaannya akan menghasilkan kumpulan yang tercemar.

Itulah sebabnya semua langkah berjaga-jaga mesti diambil dan pada akhirnya kawalan kualiti mesti dilakukan dengan menginkub pada plat 37 ° C 1 untuk setiap 100 yang disediakan.

Asas

Staphylococcus aureus dikultur pada agar darah. Bacaan Nathan di Flickr Nathan R. di Twitter, melalui Wikimedia Commons Telah disebutkan bahawa agar darah mempunyai ciri menjadi media yang diperkaya, berbeza dan tidak selektif. Asas bagi setiap sifat ini dijelaskan di bawah.

Agar darah adalah medium yang diperkaya kerana mengandungi 5-10% darah pada asas agar sebagai bahan tambahan utamanya. Kedua-dua sebatian mengandungi banyak nutrien dan sifat ini membolehkan bakteria yang dapat ditanam tumbuh di dalamnya.

Pertumbuhan itu berlaku tanpa sekatan; atas sebab ini tidak selektif. Walau bagaimanapun, jika sebatian ditambahkan ke medium ini yang menghalang pertumbuhan beberapa mikroorganisma dan menyukai yang lain, ia menjadi selektif. Ini berlaku sekiranya beberapa jenis antibiotik atau antijamur ditambahkan.

Demikian juga, agar darah adalah medium pembezaan, kerana ia membolehkan kita membezakan 3 jenis bakteria: beta-hemolytic, alpha-hemolytic dan gamma-hemolytic.

Beta-hemolitik adalah mereka yang mempunyai kemampuan untuk sepenuhnya mencairkan atau memecah sel darah merah, membentuk lingkaran yang jelas di sekitar koloni, oleh itu mereka menghasilkan produce atau ß-hemolisis dan mikroorganisma disebut ß-hemolitik.

Contoh bakteria ß-hemolitik ialah Streptococcus pyogenes dan Streptococcus agalactiae.

Alpha-hemolytics adalah yang melakukan hemolisis separa, di mana hemoglobin dioksidakan menjadi metemoglobin, menghasilkan pewarnaan kehijauan di sekitar koloni. Fenomena ini dikenali sebagai α atau α-hemolisis dan bakteria dikelaskan sebagai α - hemolitik.

Contoh bakteria α-hemolitik ialah Streptococcus pneumoniae dan Streptococcus dari kumpulan viridans.

Akhirnya, terdapat bakteria gamma-hemolytic atau non-hemolytic. Ini tumbuh di agar tanpa menghasilkan perubahan di atasnya, kesan yang dikenali sebagai γ-hemolisis, dan mikroorganisma adalah γ-hemolitik.

Contoh bakteria γ-hemolitik: beberapa jenis kumpulan D Streptococcus (Streptococcus bovis dan Enterococcus faecalis).

Permohonan

Medium kultur agar darah adalah salah satu yang paling biasa digunakan di makmal mikrobiologi.

Antara mikroorganisma yang mampu tumbuh dalam media agar darah adalah: aerobik ketat, fakultatif, mikroerofilik, anaerobik, bakteria Gram positif atau Gram negatif, bakteria cepat tumbuh atau lambat.

Beberapa bakteria yang memerlukan nutrien atau cepat berpenyakit juga tumbuh, serta kulat dan ragi. Begitu juga, ia berguna untuk subkultur atau mengaktifkan semula strain yang metaboliknya sangat lemah.

Walau bagaimanapun, pilihan jenis darah dan agar asas akan berbeza-beza bergantung pada kemungkinan mikroorganisma yang disyaki pulih dan penggunaan plat yang akan digunakan (kultur atau antibiogram).

Pilihan jenis darah

Darah boleh berupa domba, arnab, kuda, atau manusia.

Yang paling disyorkan adalah darah anak domba, dengan beberapa pengecualian. Contohnya, untuk mengasingkan spesies Haemophilus, di mana darah yang disarankan adalah darah kuda atau arnab, kerana darah domba mempunyai enzim yang menghalang faktor V.

Yang paling tidak disyorkan adalah manusia, namun ia adalah yang paling banyak digunakan, mungkin kerana ia adalah yang paling mudah diperoleh.

Darah mesti defibrinasi, diperoleh tanpa jenis aditif dan dari haiwan yang sihat. Untuk penggunaan darah manusia, beberapa faktor mesti diambil kira:

Sekiranya darah itu berasal dari individu yang pernah mengalami jangkitan bakteria, mereka akan mempunyai antibodi spesifik. Dalam keadaan ini, pertumbuhan sebilangan bakteria cenderung terhambat.

Sekiranya ia diperoleh dari bank darah, ia mengandungi sitrat dan bakteria tertentu mungkin tidak tumbuh di hadapannya. Sebaliknya, jika darah berasal dari pesakit yang mengambil antibiotik, pertumbuhan bakteria rentan dapat dihambat.

Dan jika darah berasal dari pesakit diabetes, kelebihan glukosa mengganggu perkembangan pola hemolisis yang betul.

Pilihan jenis agar asas

Agar asas yang digunakan untuk penyediaan agar darah sangat luas. Antaranya ialah: agar nutrien, agar infus jantung otak, agar soya triptisase, agar Müeller Hinton, agar Thayer Martin, agar Columbia, agar Brucella, agar Campylobacter, dll.

Penggunaan agar darah mengikut medium asas yang digunakan untuk penyediaannya

Agar nutrien

Pangkalan ini paling jarang digunakan, kerana ia akan menumbuhkan bakteria yang tidak memerlukan, seperti enterik bacilli, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, antara lain. Tidak disyorkan untuk mengasingkan Streptococcus.

Agar Infusi Jantung Otak (BHI)

Ini adalah salah satu yang paling banyak digunakan sebagai asas agar darah, kerana mengandungi nutrien yang diperlukan untuk pertumbuhan kebanyakan bakteria, termasuk Streptococcus sp dan bakteria lain yang menuntut. Walaupun tidak sesuai untuk memerhatikan pola hemolisis.

Darah anak domba biasanya digunakan dengan asas ini.

Varian agar darah juga dapat disiapkan, di mana sebatian lain ditambahkan untuk mengasingkan mikroorganisma tertentu. Contohnya, Brain Heart Infusion Agar yang dilengkapi dengan darah arnab, sistin, dan glukosa dapat digunakan untuk mengasingkan Francisella tularensis.

Walaupun, dengan cystine Tellurite berguna untuk pengasingan Corynebacterium diphteriae. Darah manusia atau domba boleh digunakan.

Dengan beta-hemolisis pertama akan dilihat sebagai halo yang sempit, sementara dengan yang kedua halo akan jauh lebih luas.

Begitu juga, asas ini, bersama dengan bacitracin, pati jagung, darah kuda dan suplemen pengayaan lain (IsoVitaleX), digunakan untuk pengasingan gen Haemophilus sp dari sampel pernafasan.

Juga, jika gabungan antibiotik kloramfenikol - gentamisin atau penisilin - streptomisin dengan darah kuda ditambahkan, ia sangat sesuai untuk pengasingan kulat patogen yang menuntut, walaupun dengan hasil yang lebih tinggi daripada agar glukosa Sabouraud. Ia sangat berguna dalam pengasingan Histoplasma capsulatum.

Agar-agar soya

Pangkalan ini adalah yang paling disyorkan untuk memerhatikan corak hemolisis yang lebih baik dan untuk melakukan ujian diagnostik seperti optoquine taxa dan bacitracin. Ia adalah agar darah klasik yang digunakan secara rutin.

Dengan asas ini, anda juga boleh menyediakan agar darah khas untuk Corynebacterium diphteriae, dengan cystine Tellurite dan darah domba .

Begitu juga, kombinasi agar ini dengan darah domba, ditambah kanamycin-vancomycin sangat sesuai untuk pertumbuhan anaerob, terutamanya Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Pangkalan ini ditambah dengan darah digunakan untuk menjalankan antibiogram mikroorganisma cepat, seperti Streptococcus sp.

Ia juga berguna untuk pengasingan bakteria seperti Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Medium ini sesuai sebagai asas agar darah apabila genus Neisseria disyaki, terutama Neisseria meningitidis, kerana N. gonorrhoeae tidak tumbuh pada agar darah.

Ia juga digunakan untuk menguji kerentanan terhadap Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Pangkalan ini sangat baik untuk menyemai spesimen biopsi gastrik untuk Helicobacter pylori.

Medium disiapkan dengan menambahkan 7% darah domba yang terdefibrasi dengan antibiotik (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B dan cefsulodin) untuk menyekat pertumbuhan jenis bakteria lain yang mungkin ada.

Asas yang sama ini ditambah dengan darah manusia atau domba, asid nalidixik dan kolistin berguna untuk mengasingkan Gardnerella vaginalis. Ia juga sesuai untuk menilai kerentanan antimikroba terhadap antibiotik mikroorganisma yang sama.

Di samping itu, ia digunakan untuk penyediaan agar darah untuk penanaman anaerob, menambahkan aminoglikosida dan vankomisin.

Pangkalan ini memungkinkan untuk memerhatikan corak hemolisis yang betul.

Agar-agar Brucella

Medium ini digunakan sebagai asas agar darah bersama dengan penambahan vitamin K sangat sesuai untuk penanaman bakteria anaerob. Dalam kes ini, penggunaan darah anak domba adalah disyorkan.

Agar Campylobacter

Campylobacter agar ditambah dengan darah domba 5% dan 5 antibiotik (cephalothin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B dan vancomycin), adalah medium yang digunakan untuk mengasingkan Campylobacter jejuni dalam sampel tinja.

Penyediaan

Setiap rumah komersial membawa arahan untuk menyediakan satu liter medium kultur di bahagian belakang bekas. Pengiraan yang sesuai dapat dibuat untuk menyiapkan jumlah yang diinginkan, bergantung pada agar asas yang dipilih.

Timbang dan larut

Agar asas adalah dehidrasi (serbuk), oleh itu ia mesti dilarutkan dalam air suling disesuaikan dengan pH 7.3.

Kuantiti yang ditunjukkan oleh agar asas yang dipilih ditimbang dan dilarutkan dalam kuantiti air yang sesuai dalam termos, kemudian dipanaskan dengan api sederhana dan dicampurkan dengan gerakan putar sehingga semua serbuk larut.

Sterilkan

Setelah larut, sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 20 minit.

Agregat darah

Semasa meninggalkan autoklaf, termos dibiarkan sejuk sehingga suhu antara 40 hingga 50 ° C; Ia adalah suhu yang disokong oleh kulit manusia dan pada masa yang sama agar-agar belum padat.

Untuk melakukan ini, botol disentuh dengan tangan dan jika panas ditoleransi, ia adalah suhu yang sesuai untuk menambahkan jumlah darah defibrinasi yang sesuai (50 ml untuk setiap liter agar). Campurkan dengan lembut untuk homogenkan.

Saluran pengagregatan darah sangat penting, kerana jika dilakukan ketika medium sangat panas sel darah merah akan pecah dan media tidak akan digunakan untuk mengamati hemolisis.

Sekiranya ditambahkan terlalu sejuk, ia akan bergumpal dan permukaan medium tidak akan lancar untuk membolehkan pemarkahan yang tepat.

Tuangkan ke dalam piring Petri

Hidangkan dalam hidangan Petri yang steril sebaik sahaja menghomogenkan darah. Kira-kira 20 ml dituangkan ke dalam setiap piring Petri. Prosedur ini dilakukan di tudung aliran lamina atau berhampiran pembakar.

Semasa menghidangkan agar darah di dalam piring Petri, tidak ada gelembung udara di permukaan piring. Sekiranya ini berlaku, nyalaan pembakar Bunsen disalurkan dengan cepat di atas pinggan untuk menghilangkannya.

Plat dibiarkan padat dan disimpan di dalam peti sejuk (2-8 ° C) terbalik sehingga digunakan. Sebelum menggunakan plat agar darah, mereka mesti dikeringkan (dibiarkan mencapai suhu bilik) agar dapat disemai.

Pinggan yang disediakan bertahan lebih kurang 1 minggu.

Rujukan

1. Bayona M. Keadaan mikrobiologi untuk budaya Helicobacter pylori. Rev Kol Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinikal praktikal. University of Cadiz, edisi ke-2. Perkhidmatan Penerbitan UCA.
3. "Agar darah." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 10 Dis 2018, 14:55 UTC. 27 Dis 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA
5. Pusat Diagnostik Veterinar Makmal CEDIVET. Guatemala. Terdapat di: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. (Edisi ke-5.) Argentina, Editor Panamericana SA