The bismut sulfit agar ialah terpilih medium pepejal dan budaya berbeza, dirumus khas untuk pengasingan Salmonella enterica subspesies enterica serotype typhi, antara spesies lain Salmonella. Medium ini dikenali sebagai agar BSA untuk singkatannya dalam English Bismuth Sulfite Agar.
Formula asal untuk agar bismut sulfite dicipta pada tahun 1927 oleh Wilson dan Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); itu mengandung natrium sulfit, glukosa, larutan bismut, amonium sitrat, besi sulfat, dan agar-agar.
Pertumbuhan 48 jam inkubasi Salmonella sp pada agar bismut sulfite. Sumber: Pixnio.com Pengarang: Dr. WR Erving, USCDCP
Hari ini terdapat pengubahsuaian medium asal, yang terdiri daripada ekstrak daging, pepton daging dan kasein, penunjuk sulfat bismut, glukosa, disodium fosfat, besi sulfat, hijau terang dan agar-agar.
Terdapat banyak cara untuk pengasingan spesies Salmonella, tetapi ketika memulihkan serotipe Typhi, agar bismut sulfite mempunyai kelebihan yang sangat ketara daripada mereka, kerana pada umumnya pemulihan mikroorganisma ini sangat rendah atau tidak ada .
Walau bagaimanapun, perlu menggunakan lebih daripada satu jenis medium ketika berusaha mengasingkan enteropathogen, kerana agar bismut sulfite kurang berkesan untuk spesies Salmonella lain dan untuk genus Shigella, yang terhambat atau berkembang sangat buruk. dalam agar ini.
Harus diingat bahawa dari semua spesies Salmonella, serotipe Typhi adalah salah satu enteropatogen yang paling penting pada manusia, ini merupakan satu-satunya takungannya. Serovar ini menyebabkan demam kepialu, gastroenteritis, bakteremia, dan septikemia.
Atas sebab ini, adalah relevan untuk memasukkan agar ini ketika menganalisis sampel air, tinja atau makanan yang disyaki kehadirannya.
Asas
Seperti kebanyakan media kultur, Bismuth Sulfite Agar mengandungi nutrien untuk mendorong pertumbuhan bakteria, seperti peptone dan ekstrak daging. Begitu juga, glukosa berfungsi sebagai sumber tenaga dan karbon.
Namun, tidak semua bakteria akan tumbuh di media ini, kerana Bismuth Sulfite Agar adalah media selektif. Ia mengandungi sebatian yang menghalang pertumbuhan mikroorganisma Gram positif dan bakteria Gram negatif tertentu. Sebatian ini adalah: penunjuk bismut sulfite dan hijau terang.
Sebaliknya, disodium fosfat mengekalkan osmolariti dan pH medium.
Selain itu, agar bismut sulfite adalah medium pembezaan berkat kehadiran ferrous sulfate, yang menunjukkan pembentukan H 2 S. H 2 S yang dibentuk oleh bakteria bertindak balas dengan ferus sulfat dan membentuk endapan hitam larut yang dapat dilihat dengan jelas.
Akhirnya, agar-agar memberikan konsistensi pepejal ke medium.
Penyediaan
Timbang 52.3 g medium dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air. Panaskan campuran hingga mendidih selama 1 minit dengan kacau yang kerap, hingga larut sepenuhnya. Jangan terlalu panas. Medium ini tidak dapat di-autoklafkan, kerana panas yang melampau merosakkan media kultur.
Biarkan sejuk hingga 45 ° C dan goncang sebelum dihidangkan dalam piring Petri yang steril. Adalah disyorkan untuk membuat piring dengan ketebalan yang baik. Untuk melakukan ini, 25 ml mesti dituangkan ke dalam setiap pinggan. Biarkan pekat. Oleh kerana ia adalah media yang tidak disterilkan, wajar untuk penggunaannya segera disarankan.
Walau bagaimanapun, satu kajian yang dilakukan oleh D'aoust pada tahun 1977, menunjukkan bahawa terdapat pemulihan Salmonella typhimurium dan Salmonella enteritidis yang lebih baik sebagai agar bismut sulphite agar berumur pertengahan, tidak mempengaruhi prestasi serovara Typhi dan Paratyphi B.
D'aoust mengesyorkan penggunaan pinggan pada hari ke-4 penyejukan, walaupun ia memberi amaran bahawa ketika usia pertengahan, selektiviti menurun, dan strain Proteus vulgaris berkembang dengan lebih mudah.
Atas sebab ini, untuk sampel yang sangat tercemar, seperti najis, lebih baik menggunakan medium yang baru disiapkan. Jika tidak, gunakan pada hari ke-4 penyediaannya. Penulis lain mengesyorkan menggunakan pinggan sehari selepas penyediaannya, disimpan di dalam peti sejuk.
Plat sejuk mesti dikisar sebelum digunakan. PH medium hendaklah 7.5 ± 0.2. Medium mentah berwarna kuning air dan medium yang disediakan berwarna kelabu kehijauan.
Permohonan
Antara sampel yang boleh ditanam dalam medium ini adalah contoh najis, minuman atau air sisa dan makanan.
Untuk memperbaiki isolat, disarankan untuk melakukan rawatan pra-pengayaan dengan kaldu laktosa dan setelah pengayaan dengan kaldu tetrathionate atau kaldu selenit cystine, sebelum menanam pada agar bismut sulfite agar.
Plat diinkubasi pada suhu 35 ° C ± 0.2 selama 24 hingga 48 jam, dalam aerobiosis.
Ciri-ciri koloni pada agar bismut sulfite
Koloni Salmonella Typhi biasanya dilihat pada agar ini dalam masa 24 jam dengan pusat hitam dan dikelilingi oleh lingkaran hijau terang. Manakala, dalam 48 jam mereka berubah menjadi hitam sepenuhnya kerana terbentuknya hidrogen sulfida.
-Media ini menghalang kebanyakan spesies genus Shigella.
- S. Typhi dan S. arizonae dapat memberikan koloni yang sangat serupa.
-Koliform yang menghasilkan H 2 S seperti Proteus dan Citrobacter menghasilkan koloni yang serupa dengan Salmonella, jadi perlu melakukan ujian pengenalan biokimia.
-Perjuangan yang baik mesti dilakukan untuk mendapatkan koloni terpencil; Ini adalah satu-satunya cara untuk memerhatikan ciri khas koloni genus Salmonella.
QA
Untuk kawalan kemandulan, plat tanpa inokulasi diinkubasi pada suhu 37 ° C, diharapkan tidak akan ada pertumbuhan atau perubahan warna.
Untuk kawalan kualiti, ketegangan yang diketahui seperti:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli dan Shigella flexneri diharapkan dapat dihambat sebagian dengan mengembangkan koloni coklat kehijauan dan coklat masing-masing. Sedangkan, kedua salmonella mesti mempunyai perkembangan yang sangat baik dengan koloni hitam dengan kilauan logam, dan akhirnya Enterococcus faecalis mesti dihambat sepenuhnya.
Rujukan
- Wilson, W., & EM McV. Blair. Penggunaan Medium Besi Sulfit Bismut Sulfat untuk Pengasingan B. typhosus dan B. proteus. Jurnal Kebersihan, 1927; 26 (4), 374-391. Diperolehi dari .jstor.org
- D'aoust JY. Kesan keadaan penyimpanan prestasi agar bismut sulfite agar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Terdapat dalam: ncbi.nlm.nih.gov
- Makmal IVD. Agar bismut-sulfit menurut WILSON-BLAIR. 2009. Tersedia di: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Makmal Himedia. Agar Sulfit Bismut. 2017. Terdapat di: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G dan Ybarra M. Kualiti Bakteriologi Susu Kambing Murni Dihasilkan di Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54