The TCBS agar adalah satu cara untuk budaya pepejal sangat selektif dan berbeza, digunakan untuk pengasingan dan penanaman bakteria genus Vibrio, terutama Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus dan V. vulnificus sebagai patogen utama seperti ini.
Akronim TCBS bermaksud Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Agar ini juga dikenali sebagai media selektif untuk Vibrios. Formula asalnya dibuat oleh Nakanishi dan kemudian diubah suai oleh Kobayashi.
Medium TCBS komersial dan plat agar TCBS yang disemai dengan Vibrio cholerae. Sumber: foto 1: diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
Ia terdiri daripada ekstrak ragi, pepton daging, triptein, natrium sitrat, natrium tiosulfat, hempedu lembu, sukrosa, natrium klorida, ferrik sitrat, bromothymol blue, thymol blue dan agar.
Komposisi ini memungkinkan pengembangan spesies Vibrio yang mencukupi dari sampel air, makanan dan tinja; kecuali Vibrio hollisae, yang tidak tumbuh pada medium ini. Tambahan pula, medium TCBS mampu menghalang pertumbuhan bakteria lain, terutama coliform.
Oleh kerana masalah gastrousus dan usus yang serius yang disebabkan oleh beberapa spesies genus Vibrio, diagnosisnya sangat penting. Manusia dijangkiti terutamanya dengan memakan makanan mentah atau matang dari laut atau perairan yang tercemar, tetapi juga melalui jangkitan luka.
Oleh kerana itu, makmal klinikal mesti memasukkan agar TCBS dalam kajian kultur najis sampel najis cair, terutama dengan penampilan air beras. Terutama jika pesakit melaporkan telah bersentuhan dengan air laut atau telah memakan kerang atau ikan.
Asas
Ekstrak ragi, peptone daging, dan triptein adalah sumber pemakanan medium ini. Walau bagaimanapun, agar TCBS adalah media yang tidak ramah bagi kebanyakan bakteria.
Selektivitasnya yang tinggi diberikan dengan penambahan natrium sitrat dan empedu lembu; kedua-duanya adalah agen penghambat yang juga memberikan pH alkali ke medium, menyekat pertumbuhan flora yang menyertainya dan menyukai pertumbuhan V. cholerae, antara spesies lain. Harus diingat bahawa Vibrio cholerae sangat sensitif terhadap keasidan.
Sebahagiannya, natrium klorida secara osmotik mengimbangkan medium. Selanjutnya, kerana kepekatannya tinggi, ia juga bertindak sebagai agen penghambat, yang mendorong pertumbuhan bakteria halofilik.
Sukrosa adalah gula yang dapat ditapai yang, bersama dengan indikator pH bromothymol blue dan thymol blue, memberikan medium perbezaannya. Atas sebab ini, dengan medium ini adalah mungkin untuk membezakan strain fermentasi sukrosa daripada yang tidak fermentasi.
Koloni strain penapaian sukrosa berkembang warna kuning dan akan mengubah medium dari hijau menjadi kuning kerana penghasilan asid. Non-fermenter tumbuh lut dan mediumnya tetap menjadi warna asal (hijau).
Begitu juga, medium ini mengandungi natrium tiosulfat sebagai sumber sulfur dan ferrik sitrat sebagai agen pengembangan. Kedua-duanya menunjukkan bakteria yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna). H 2 S terbentuk dari tiosulfat dan seterusnya setelah bertindak balas dengan ferrik sitrat bentuk endapan hitam yang kelihatan.
Akhirnya, agar inilah yang memberikan konsistensi pepejal ke medium.
Penyediaan
Timbang 89 g medium dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Bantu pembubaran dengan pemanasan dan pengadukan yang kerap. Campuran boleh direbus hingga 2 minit.
Medium ini tidak ditutup secara autoklaf. Setelah larut, ia disajikan secara langsung di atas pinggan steril. Apabila padat, mereka disusun secara terbalik pada platelet dan disimpan di dalam peti sejuk (2-8 ° C) sehingga digunakan.
Medium selepas penyediaan mesti kekal pada pH 8.6 ± 0.2.
Warna medium dehidrasi berwarna kuning muda atau kuning kehijauan, dan warna medium berwarna hijau kehijauan atau kebiruan.
Penting untuk membiarkan pinggan menjadi panas sebelum menyemai sampel.
Gunakan
Spesimen yang paling biasa untuk pengasingan Vibrios adalah najis diare.
Sampel najis, jika tidak dapat segera disemai pada media selektif, harus dibawa ke media Cary Blair.
Untuk meningkatkan kepekaan kultur, najis dapat disalurkan melalui air peptone pada pH 8.4 sebagai media pengayaan selama maksimum 8 jam, dari situ subkultur ke media TCBS.
Perlu juga diperhatikan bahawa beberapa strain Vibrios dapat menyebabkan septikemia pada pasien imunosupresif, oleh itu mereka dapat diasingkan dari kultur darah. Begitu juga, sampel air dan makanan dari laut dapat dianalisis apabila terdapat wabak penyakit kolera.
Disemai
Inokulum sampel kajian mesti menonjol, penyemaian dilakukan dengan kaedah pemadatan dengan keletihan. Plat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.
Koloni anggapan Vibrio cholerae berukuran sederhana, licin, legap, dengan sempadan nipis dan berwarna kuning kerana fermentasi sukrosa.
Spesies V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii dan sebilangan V. vulnificus tumbuh dengan cara yang serupa. Spesies Vibrios yang penting secara klinikal lain seperti V. parahaemolyticus tidak memerah sukrosa, berkembang sebagai koloni hijau zaitun.
Plat agar TCBS disemai dengan Vibrio parahaemolyticus. Sumber: isis325 Flickr
Sebaliknya, perlu diingat bahawa beberapa strain Aeromonas dan Plesiomonas yang merupakan oksidase (+) dapat tumbuh di medium ini, mengembangkan koloni kuning yang dapat mengelirukan doktor. Sementara beberapa jenis Pseudomonas juga oksidase (+) tumbuh sebagai koloni hijau seperti V. parahaemolyticus.
Batasan
Ujian oksidase yang positif untuk gen Vibrio tidak boleh dilakukan dari koloni yang diperoleh dari agar TCBS, kerana hasil yang diperoleh akan menjadi negatif palsu. Sebatian di tengah sangat mengganggu ujian ini. Oleh itu, ia mesti dibuat dari subkultur pada agar darah.
QA
Untuk membuktikan bahawa medium dalam keadaan baik, disarankan untuk menaburkan strain kawalan yang diketahui atau diperakui, dan perhatikan apakah pertumbuhannya memenuhi ciri yang diharapkan.
Untuk ini, anda boleh menggunakan jenis:
-Vibrio cholerae -– pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning, sempadan lut).
-Vibrio parahaemolyticus --– pertumbuhan yang memuaskan (koloni dengan pusat hijau dan sempadan lut).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning dengan lingkaran dengan warna yang sama di sekitar jajahan).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - perencatan total atau sebahagian (koloni kuning kecil atau lut).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-– perencatan separa atau keseluruhan (koloni biru).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Terhambat sepenuhnya.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Penghambatan total atau sebahagian. (Sempadan lut pusat hijau koloni kecil).
Inkubasi medium yang tidak diinokulasi tidak boleh diubah.
Rujukan
- Makmal Difco Francisco Soria Melguizo. Agar TCBS. 2009. Terdapat di: f-soria.es
- Makmal BD. BD. TCBS Agar 2003. Terdapat di: bd.com
- Makmal Britannia. TCBS Medium. 2015. Terdapat di: britanialab.com
- Makmal Acumedia. Agar TCBS. 2016. Terdapat di: drinksafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.