TSI AGAR: RASIONAL, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The TSI agar atau tiga kali ganda agar besi gula adalah medium pepejal yang berfungsi sebagai satu ujian biokimia untuk membimbing pengenalan awal Gram negatif riba. Ini didasarkan pada menunjukkan fermentasi gula yang ada, dan pengeluaran hidrogen sulfida dan gas.

Komposisi dan dasarnya sangat mirip dengan ujian besi Kligler, dengan perbezaan bahawa yang terakhir hanya mengandungi glukosa dan laktosa. Sebaliknya, seperti namanya, agar-agar besi gula tiga mengandungi tiga karbohidrat yang boleh ditapai: glukosa, laktosa dan sukrosa.

Imej ujian TSI dengan mikroorganisma yang berbeza A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Sumber: Witmadrid, dari Wikimedia Commons

Sebagai tambahan, medium TSI mempunyai empat derivatif protein yang menjadikannya agar sangat berkhasiat: ekstrak ragi, ekstrak daging, peptone dan peptone proteosa. Ia juga mengandungi amonium sulfat besi, natrium tiosulfat, natrium klorida, fenol merah, dan agar.

Ketidakmampuan mikroorganisma untuk menetap glukosa yang terdapat dalam medium segera mengecualikannya daripada tergolong dalam Keluarga Enterobacteriaceae. Oleh itu, ujian ini sangat mustahak dalam menentukan jalan pengenalan yang harus diambil untuk menentukan genus dan spesies.

Setiap makmal memutuskan sama ada untuk bekerja dengan agar TSI atau dengan agar besi Kligler.

Asas

Setiap sebatian memenuhi fungsi dalam medium.

Natrium klorida dan agar

Natrium klorida diperlukan untuk mengekalkan keseimbangan osmotik medium. Manakala agar memberikan konsistensi pepejal.

Penunjuk PH (fenol merah)

PH medium yang disediakan seimbang pada 7.3 dan penunjuk pH (fenol merah) berubah menjadi kuning di bawah 6.8. Ini bermaksud bahawa sebilangan kecil asid yang dihasilkan oleh fermentasi gula akan mengubah medium dari merah-oren menjadi kuning.

Sekiranya tidak ada penapaian akan terjadi alkalinisasi medium melalui penggunaan peptone, berubah dari merah-oren menjadi merah kuat.

Derivatif protein (ekstrak ragi, ekstrak daging, peptone dan peptone proteosa)

Apabila bakteria memetabolisme protein yang terdapat dalam agar TSI, amina dihasilkan yang mengalkali medium (terutamanya pada tingkat serong), kerana reaksi memerlukan oksigen. Amina menjadikan bezel menjadi merah terang.

Tetapi ini akan bergantung pada kemampuan bakteria untuk fermentasi karbohidrat atau tidak.

Fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)

Kajian penapaian gula dapat memberikan beberapa gambar dan masing-masing ditafsirkan secara berbeza. Tafsiran ujian membahagikan mikroorganisma kepada 3 kategori: non-fermenter glukosa, non-fermenter laktosa, dan fermentasi laktosa / sukrosa.

Harus diingat bahawa jumlah glukosa dalam medium adalah terhad, sementara kepekatan laktosa dan sukrosa adalah 10 kali lebih tinggi.

Bakteria Keluarga Enterobacteriaceae dan mikroorganisma penapaian glukosa lain akan mula memfermentasi gula ini kerana ia adalah karbohidrat termudah untuk tenaga.

Sebaliknya, laktosa dan sukrosa adalah karbohidrat kompleks yang mesti dipecah dan diubah menjadi glukosa agar mereka memasuki kitaran Embden-Meyerhof.

-Mikroorganisma tidak fermentasi glukosa

Apabila mikroorganisma yang diinokulasi tidak dapat memfermentasi glukosa, lebih kurang ia dapat menapai karbohidrat lain. Oleh itu, tidak ada asid yang terbentuk di sini, tetapi terdapat pembentukan amina di bevel dengan penggunaan peptones.

Dalam kes ini bezel berubah menjadi merah yang lebih kuat dan bahagian bawah tiub mungkin tidak berubah atau mungkin juga alkali, menjadikan keseluruhan tiub berwarna merah.

Tafsiran: K / K bermaksud serong alkali / bawah alkali atau neutral

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tiub D.

Hasil ini menunjukkan bahawa mikroorganisma itu bukan milik Keluarga Enterobacteriaceae.

-Mikroorganisma tidak fermentasi laktosa / sukrosa

Sekiranya bakteria dapat memfermentasi glukosa tetapi bukan laktosa atau sukrosa, perkara berikut akan berlaku:

Bakteria akan mengambil semua glukosa yang ada setelah kira-kira 6 hingga 8 jam, dapat mengasidkan kedua bevel dan blok; iaitu agar-agar akan berubah menjadi kuning sepenuhnya. Tetapi apabila glukosa habis dan laktosa dan sukrosa tidak dapat digunakan, bakteria akan memulai metabolisme protein.

Tindak balas ini memerlukan oksigen, oleh itu degradasi peptone berlaku di permukaan (serong). Amina yang dihasilkan mengalkali bezel bertukar dari kuning ke merah. Tindak balas ini dibuktikan setelah 18 hingga 24 jam inkubasi.

Tafsiran: K / A bermaksud serong alkali dan wad asid.

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tiub B.

-Mikroorganisma penapaian laktosa / sukrosa

Mikroorganisma yang mampu memfermentasi laktosa dan sukrosa jelas dapat memfermentasi glukosa. Setelah jumlah minimum glukosa yang ada dalam medium habis, piruvat yang terbentuk mula dimetabolismekan untuk membentuk asid melalui kitaran Krebs aerobik, dan dalam jangka masa 8 hingga 12 jam, semua medium akan berwarna kuning.

Sekiranya bakteria mampu memecah laktosa atau sukrosa, asid akan terus dihasilkan, dan selepas 18 hingga 24 jam keseluruhan tiub - serong dan pasang - akan terus menjadi kuning.

Perlu diperhatikan bahawa penggunaan glukosa dilakukan dengan dua cara: satu secara aerobik pada lereng tiub, dan yang lain secara anaerobik di bahagian bawah tiub.

Tafsiran: A / A bermaksud asid bevel / asid bawah. Ia mungkin atau tidak mempunyai gas.

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tiub A.

Pengeluaran gas

Sebilangan mikroorganisma mampu menghasilkan gas semasa penapaian gula. Gas dibuktikan di dalam tiub dengan tekanan yang diberikan dalam agar. Tekanan menyebabkan pembentukan gelembung atau perpindahan agar. Kadang kala pembentukan gas boleh memecahkan medium.

Adalah mustahak bahawa pada saat menyemai medium TSI, tusukan dibuat dengan bersih melalui pusat agar sehingga sampai ke bahagian bawah. Sekiranya tusukan dialihkan ke arah dinding tiub, ia boleh menyebabkan positif palsu dalam pengeluaran gas, kerana ia akan keluar melalui saluran yang salah dibentuk.

Pengeluaran gas, serta tindak balas yang terjadi di dalam agar agar memerlukan oksigen, oleh itu disarankan agar tabung ditutup dengan penutup kapas, dan jika penutup Bakelite digunakan, alat ini tidak boleh benar-benar ketat.

Pengeluaran gas dilaporkan positif (+) atau negatif (-).

Corak pembentukan gas. Sumber: Skim yang dibuat oleh MSc. Marielsa Gil. Sumber gambar: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, melalui Wikimedia Commons

Natrium tiosulfat dan amonium sulfat besi

Bakteria mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna) mengambil sulfur dari natrium tiosulfat yang terdapat dalam medium. Sekali H ₂ S terbentuk, ia bertindak balas dengan ferus ammonium sulfat, menghasilkan sulfida besi (jelas kelihatan mendakan hitam).

Pengeluaran H ₂ S dilaporkan positif (+) atau negatif (-).

Pada gambar di awal artikel lihat gambar tiub C.

Penyediaan

Timbang 62.5 g media agar-agar gula besi triple (TSI) dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling.

Panaskan sehingga agar larut sepenuhnya. Rebus sebentar, kacau selalu. Sebarkan 4 ml medium ke dalam tabung uji 13/100 dengan penutup kapas.

Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan bersandar pada sudut. Berhati-hati bahawa kedua-dua alas dan bezel mempunyai jarak yang sama.

Simpan di dalam peti sejuk 2-8 ° C. Biarkan suam sebelum menyemai ketegangan bakteria.

Warna medium dehidrasi berwarna kuning muda dan medium yang disediakan berwarna merah-oren.

PH akhir medium yang disediakan ialah 7.3 ± 0.2.

Permohonan

Ujian TSI digunakan secara meluas di peringkat makmal mikrobiologi. Ujian ini sangat mustahak untuk memandu jenis ujian yang mesti dilaksanakan untuk mengenal pasti genus dan spesies. Pelaksanaan dan penafsirannya yang baik dapat menjimatkan bahan dan tenaga kerja.

Sekiranya hasilnya adalah TSI K / K dan ujian sitokrom oksidase positif, diketahui bahawa ujian harus digunakan untuk mengenal pasti batang negatif Gram yang tidak fermentasi, seperti Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, antara genera lain. Sekiranya oksidase negatif, ia berorientasi pada genera Acinetobacter, Stenotrophomonas, dll.

Sebaliknya, jika TSI A / A atau K / A diperoleh dan ujian sitokrom oksidase negatif, semakin banyak nitrat berkurang menjadi nitrit, kita akan yakin bahawa ia adalah mikroorganisma yang tergolong dalam Keluarga Enterobacteriaceae. Dalam kes ini, laluan pengenalan akan menumpukan pada ujian khusus untuk kumpulan bakteria ini.

Sebaliknya, jika gambar K / A atau A / A diperoleh dan ujian oksidase sitokrom positif, ujian tambahan yang akan disusun akan bertujuan untuk mengenal pasti strain fermentasi yang tidak tergolong dalam Keluarga Enterobacteriaceae, seperti: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio dan Pasteurella.

TSI dengan hidrogen sulfida, oksidase negatif, akan memandu pengenalpastian genera Keluarga Enterobacteriaceae berikut: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella atau Salmonella.

A TSI dengan sedikit atau hidrogen sulfida sederhana dalam Serong alkali dengan latar belakang alkali dan oxidase yang positif akan membimbing penggunaan ujian untuk mengenal pasti bukan penapaian H ₂ S- menghasilkan Gram-negatif rod, seperti putrefaciens Shewanella.

Akhirnya, TSI dapat digunakan untuk penyelidikan pengeluaran hidrogen sulfida dalam bacilli positif Gram, terutama ketika Erysipelothrix rhusiopathiae disyaki.

Disemai

Medium TSI mesti diinokulasi dengan koloni tulen, diasingkan dalam budaya primer atau selektif. Sekiranya koloni diambil dari media selektif yang disemai dengan sampel dengan flora campuran, penjagaan harus diambil hanya dari permukaan, kerana strain yang dapat dihambat di media tersebut mungkin ada di bahagian bawah koloni.

Oleh itu, gelung tidak boleh disejukkan pada media selektif dan kemudian koloni diambil dan diinokulasi dengan medium TSI.

Menyemai akan dilakukan dengan gelung atau jarum lurus. Tusukan akan dibuat, menjaga agar ia berada di tengah-tengah tengah hingga sampai ke dasar, dan kemudian penaburan selesai dengan menyuntikkan permukaan dalam bentuk zigzag. Jangan buat dua tusukan.

Inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 18-24 jam. Tafsirkan pada masa ini, tidak sebelum atau selepasnya.

Batasan

Ujian TSI harus dibaca dalam 18 hingga 24 jam pengeraman. Pembacaan sebelum waktu ini boleh memberi positif positif untuk penapaian A / A. Sedangkan, pembacaan setelah waktu ini dapat menimbulkan gambaran negatif palsu dari non-fermenter, kerana penggunaan peptone yang mengalkali medium.

Rujukan

1. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. "TSI agar." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 10 Jul 2018, 08:09 UTC. 10 Feb 2019, 03:33 Terdapat di: es.wikipedia.org
5. Makmal Britannia. TSI Agar (Agar besi gula tiga kali ganda). 2015. Terdapat di: britanialab.com
6. Makmal BD. Agar besi gula tiga kali ganda (TSI Agar). 2003. Terdapat di: bd.com