THAR MARTIN AGAR: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The agar Thayer Martin ia adalah satu medium terpilih sangat berkhasiat dan kukuh untuk pengasingan meningitidis Neisseria dan Neisseria gonorrhoeae; kedua-duanya dikenali sebagai Neisserias penting atau patogenik.

Salah satu ciri khas Thayer Martin Agar yang paling penting adalah kandungan makanan tambahan yang tinggi. Sifat ini penting, kerana Neisserias adalah mikroorganisma yang sangat menuntut dari sudut pemakanan dan oleh itu tidak tumbuh di media umum.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin medium perniagaan. Gambar Sumber 1: Diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil, gambar 2. Bakteria Pixinio.com berwarna, dimodifikasi, Thayer, Martin, agar.

Sebaliknya, kerana mikroorganisma ini biasanya terdapat di kawasan yang tidak steril, penambahan inhibitor diperlukan untuk mencegah pertumbuhan flora yang menyertainya, tanpa mempengaruhi perkembangan genus Neisseria.

Agar ini terdiri daripada agar-agar asas GC, hemoglobin, suplemen pemakanan tambahan dan sekumpulan bahan penghambat (antibiotik dan antikulat). Rumah komersial menjual setiap makanan tambahan secara berasingan.

Sampel yang akan disemai dalam medium ini akan bergantung pada mikroorganisma yang sedang dicari. Untuk Neisseria gonorrhoeae spesimen yang ideal adalah rembesan vagina dan uretra. Manakala bagi Neisseria meningitidis sampel yang paling banyak digunakan adalah eksudat CSF, pharyngeal dan nasopharyngeal.

Asas

Neisserias adalah mikroorganisma yang dikelaskan sebagai menjengkelkan dan oleh itu pengasingannya sukar. Oleh itu, Thayer Martín adalah medium yang kompleks dan setiap komponennya memenuhi fungsi yang dijelaskan di bawah:

Agar asas GC

GC agar mengandungi proteosa peptone, pati jagung, natrium klorida, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, dan agar-agar. Komponennya menyediakan nutrien asas untuk pengembangan mikroba, meneutralkan asid lemak toksik, membantu mengekalkan keseimbangan osmotik, menentukan pH dan memberikan konsistensi padat kepada medium.

Hemoglobin

Hemoglobin memberikan faktor V dan X (nikotinamide adenine dinucleotide NAD dan hemin masing-masing). Atas sebab ini, spesies Haemophilus juga tumbuh di medium ini. Hemoglobin boleh didapati secara komersial dalam bentuk dehidrasi atau darah sapi defibrinasi segar dapat ditambahkan ke medium.

Makanan tambahan

Sebaliknya, suplemen pengayaan juga harus ditambahkan ke medium Thayer-Martin, kerana nutrien yang terkandung dalam agar asas tidak mencukupi untuk keperluan gen Neisseria.

Suplemen pengayaan yang paling biasa digunakan adalah isovitalex. Ia mengandungi glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanine, ferric nitrate, p-amino benzoic acid, vitamin B12, tiamin, dan glukosa. Semua sebatian ini diperlukan untuk perkembangan Neisserias patogen yang betul.

Perencat

Oleh kerana ia adalah media yang sangat berkhasiat, perencat harus digunakan yang menghalang pertumbuhan mikroorganisma dari flora kawasan yang biasa dan dengan itu memihak kepada pengasingan gen Neisseria.

Kompleks perencat terdiri daripada vancomycin, colistin, dan nystatin. Vancomycin menghalang pertumbuhan bakteria Gram positif, colistin menghalang pertumbuhan bakteria Gram negatif seperti Pseudomonas dan beberapa Neisserias saprophytic, dan nystatin bertindak pada ragi seperti Candida albicans.

Walau bagaimanapun, Thayer Martin Agar kemudiannya diubah suai; perubahan terdiri daripada penambahan trimethoprim, peningkatan jumlah agar dan penambahan glukosa tambahan. Perubahan ini meningkatkan pemulihan spesies Neisseria gonorrhoeae dengan ketara.

Harus diingat bahawa trimethoprim menghalang pertumbuhan genus Proteus dan pembentukannya yang seterusnya. Dalam pengertian ini, antibiotik inilah yang memberikan watak selektif kepada medium Thayer Martin.

Penyediaan

Agar Thayer Martin asli

-GC agar

Timbang 8.2 g medium GC dehidrasi dan gantung dalam 100 ml. Campurkan dan rebus selama 1 minit dengan kacau yang kerap sehingga larut sepenuhnya. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.

- 2% hemoglobin

Susun 2 g hemoglobin dehidrasi dalam 2 atau 3 ml air suling panas sehingga campuran seragam terbentuk. Tambahkan sedikit demi sedikit air untuk mengisi isipadu 100 ml. Suspensi mesti homogen sebelum disterilkan.

Sterilkan dalam autoklaf selama 15 minit.

- Makanan tambahan

Susun semula botol komersial dengan pelarut yang disediakan oleh syarikat komersial yang sama. Gaul sebati. Jumlah pengencer yang akan digunakan akan dinyatakan dalam arahan kit.

Suplemen perencatan VCN (vancomycin, colistin, nystatin)

Susun semula botol dengan pelarut yang disediakan oleh syarikat komersial. Gaul sebati. Jumlah pengencer yang akan digunakan akan dinyatakan dalam arahan kit.

-Sedia

Untuk setiap 100 ml agar GC teruskan seperti berikut:

Apabila agar GC meninggalkan autoklaf, biarkan sejuk hingga suhu kira-kira 50 ° C dan tambahkan 2 ml larutan hemoglobin yang disediakan, 2 ml suplemen pengayaan (isobitalex atau britalex), dan 2 ml suplemen perencatan. Campurkan dan hidangkan dalam hidangan Petri yang steril.

Biarkan pekat dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

Warna medium yang disediakan adalah merah ceri. PH akhir medium ialah 7.2 ± 0.2

Agar Thayer Martin yang diubah suai

Timbang 8.2 g medium GC dehidrasi dan gantung dalam 100 ml. Masukkan 1 g agar-agar dan tambahkan 0.3 g glukosa. Campurkan dan rebus selama 1 minit dengan kacau yang kerap sehingga larut sepenuhnya. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.

Sediakan suplemen hemoglobin dan pengayaan seperti yang telah dijelaskan sebelumnya.

Suplemen penekan yang digunakan adalah VCNT (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-Sedia

Teruskan seperti yang dijelaskan untuk agar Thayer Martin yang asli.

Gunakan

Thayer Martin Agar harus dibiarkan panas sebelum spesimen dililit. Sampel yang biasa digunakan adalah sapuan faring, sapuan hidung, keputihan, uretra, dan / atau pelepasan rektum, dan CSF.

Gunakan sampel segar dan buat inokulum kuat pada agar. Sampel tersebut disemprotkan secara langsung oleh pelepasan bahan dan kemudian keletihan melekat ke permukaan.

Plat diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam dalam balang microaerophilic (5% CO ₂ ). Pada akhir masa inkubasi, plat diperiksa untuk koloni kecil, kelabu dan kadang-kadang kelihatan mukoid.

Lakukan ujian biokimia Gram dan pengesahan pada koloni yang mencurigakan.

QA

Strain mikrob berikut boleh digunakan untuk kawalan kualiti Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 dan Neisseria meningitidis ATCC 13090; perkembangan yang memuaskan diharapkan pada kedua-dua strain.

Strain berikut juga harus disertakan: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 dan Candida albicans ATCC 10231. Dalam kesemuanya, perencatan total atau separa dijangka dalam media ini.

Batasan

-Mesti kita ingat bahawa bakteria yang tahan terhadap perencat yang digunakan boleh tumbuh dalam medium.

-Ada strain Neisseria gonorrhoeae yang boleh peka terhadap kepekatan vancomycin yang digunakan. Atas sebab ini, disyorkan untuk menggunakan agar coklat yang dilengkapi dengan isovitalex, tetapi tanpa perencat.

-Ada strain ragi tahan nystatin yang dapat tumbuh di medium ini dan mengganggu pengasingan Neisserias patogen, terutama gonokokus.

Rujukan

1. Makmal Diagnostik Valtek. Thayer-Martin Agar. 2016. Terdapat di: com
2. Makmal Britannia. Thayer Martin Medium Diubahsuai. 2010. Terdapat di: britanialab.com
3. Penyumbang Wikipedia. Agar Thayer-Martin. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 26 Oktober 2017, 16:33 UTC. Terdapat di: wikipedia.org 4. Diakses pada 28 Februari 2019.
4. Makmal Britannia. GC agar. 2010. Terdapat di: britanialab.com.
5. Makmal BBL ™ Medium Pengayaan untuk Mikroorganisma Cepat. 1999. Terdapat di: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.