AGAR HIJAU TERANG: RASIONAL, PENYEDIAAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The agar hijau cemerlang ialah medium budaya yang kukuh dengan tinggi tahap pemilihan. Ia digunakan secara eksklusif untuk pengasingan strain genus Salmonella, namun terdapat beberapa pengecualian, seperti spesies typhi dan paratyphi yang tidak tumbuh pada medium ini.

Pencarian genus Salmonella sering dilakukan dalam sampel najis, air atau makanan. Dalam pengertian ini, medium ini sangat berguna. Agar ini diciptakan pada tahun 1925 oleh Kristensen, Lester dan Jurgens, kemudian diubah suai oleh Kauffmann.

Agar hijau terang. Koloni fermentasi dan bukan penapaian masing-masing. Sumber: Pameran MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Lesen Creative Commons.

Ini terdiri dari pluripeptones dari pencernaan peptik dari tisu haiwan dan pencernaan pankreas kasein, juga mengandung ekstrak ragi, natrium klorida, laktosa, sukrosa, fenol merah, hijau terang dan agar-agar.

Ia dicirikan oleh persekitaran yang agak tidak ramah bagi kebanyakan bakteria, yang mendorong pertumbuhan Salmonella, namun beberapa koliform dapat bertahan di dalamnya, berkembang dengan lemah.

Penting untuk diperhatikan bahawa genus Shigella tidak tumbuh di media ini, begitu juga Salmonella typhimurium atau Salmonella paratyphi. Oleh itu, jika anda ingin mengasingkan mikroorganisma ini, media lain harus digunakan, seperti agar XLD, antara lain.

Asas

Agar hijau terang

Setiap komponen yang membentuk medium memenuhi fungsi tertentu yang menentukan ciri dan sifat agar.

Pluripepton dan ekstrak ragi adalah sumber nutrien dari mana mikroorganisma mengambil nitrogen dan mineral yang diperlukan untuk pengembangannya. Laktosa dan sukrosa adalah sumber tenaga bagi mikroorganisma yang mampu memfermentasinya.

Hijau terang adalah bahan penghambat yang menghalang pertumbuhan bakteria Gram positif dan sebilangan besar mikroorganisma Gram negatif.

Natrium klorida memberikan kestabilan osmotik kepada medium. Sementara fenol merah adalah penunjuk pH, ia berubah warna ketika mengesan pengeluaran asid dari fermentasi karbohidrat.

Koloni laktosa dan sukrosa yang tidak diperam tumbuh di medium ini dengan warna putih merah jambu atau telus, dengan latar belakang merah. Contohnya, bakteria genus Salmonella.

Sementara bakteria fermentasi laktosa atau sukrosa yang mampu tumbuh pada medium ini mengembangkan koloni kuning-hijau atau kuning-hijau pada latar belakang berwarna kuning kehijauan. Contohnya, Escherichia coli dan Klebsiella pneumoniae.

Varian agar hijau terang (BGA)

Terdapat varian lain agar hijau terang; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar dan Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Agar Glukosa Hijau Cerah Novobiocin

Mengandungi Trypticase Soy Agar, Ferric Ammonium Citrate, Sodium Thiosulfate Pentahydrate, Phenol Red, Glukosa, Green Bright, Novobiocin, dan Air suling.

Ia digunakan untuk pengasingan koloni Salmonella dari sampel najis.

Dalam kes ini, hijau terang dan novobiosin adalah bahan penghambat yang menghalang pertumbuhan bakteria Gram positif dan beberapa mikroorganisma Gram negatif.

Natrium tiosulfat adalah sumber sulfida dan ferrik sitrat adalah sumber zat besi, keduanya diperlukan untuk mengungkapkan pengeluaran hidrogen sulfida melalui pembentukan endapan besi sulfida hitam.

Glukosa adalah karbohidrat yang boleh ditapai dan merah fenol adalah penunjuk pH.

Pada medium ini, koloni Salmonella berkembang besar dengan pusat hitam yang dikelilingi oleh lingkaran merah dan diikuti oleh kawasan yang kelihatan jelas. Beberapa jenis Citrobacter freundii menghasilkan koloni yang serupa dengan Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Medium ini mengandungi agar-agar kedelai, ferit ammonium sitrat, natrium tiosulfat, laktosa, gliserol, hijau terang, novobiosin, dan air suling.

Perbezaan antara medium ini dan yang sebelumnya adalah bahawa glukosa digantikan oleh laktosa dan gliserol dan fenol merah tidak digunakan.

Medium ini juga digunakan untuk mengasingkan spesies Salmonella, koloni berkembang menjadi hitam, kerana pengeluaran hidrogen sulfida.

Hanya koloni yang tidak menghasilkan asid dari gliserol atau laktosa yang mencapai penghasilan H ₂ S yang mencukupi, kerana pH rendah mengganggu pembentukan H ₂ S. Ini mengakibatkan koloni tidak berwarna bagi kebanyakan spesies Proteus dan Citrobacter.

Penyediaan

-Berat 58 gram medium dehidrasi yang diperolehi secara komersial. Tambahkan ke dalam satu liter air yang disalurkan semula. Campurkan, biarkan beberapa minit, dan letakkan campuran pada sumber panas sehingga larut sepenuhnya.

-Autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit, jangan melebihi masa pensterilan.

-Biarkan rehat dan hidangkan sambil panas dalam piring Petri yang steril. PH akhir mestilah 6.9 ± 0.2.

-Biarkan pekat dan simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Sebelum menyemai pinggan hendaklah mengambil suhu bilik.

-Media serbuk berwarna hijau dan disiapkan mengambil warna oren-coklat atau kemerahan-hijau, bergantung pada pH dan syarikat komersial. Warna yang sangat coklat menunjukkan bahawa agar terlalu panas.

-Setelah agar mengeras, tidak digalakkan untuk dibuat semula, kerana mediumnya merosot.

Kegunaan / aplikasi

Medium ini digunakan untuk mencari jenis genus Salmonella dari sampel najis dan makanan tenusu, antara lain.

Oleh kerana ia adalah lingkungan yang tidak ramah, disarankan untuk menanam inokulum yang banyak jika sampel langsung digunakan. Jika tidak, pra-pengayaan dan pengayaan spesimen harus dilakukan sebelum disemai dalam medium ini.

Oleh kerana sebilangan strain Salmonella dihambat atau tumbuh dengan sukar, disarankan untuk menemani media ini dengan agar selektif lain untuk Salmonella.

Setiap koloni dengan ciri khas Salmonella mesti diserahkan kepada ujian biokimia untuk mengenal pasti pasti.

QA

Untuk menguji prestasi baik media agar hijau terang, strain ATCC dapat digunakan untuk melihat perkembangannya di atasnya.

Strain yang paling kerap digunakan untuk kawalan kualiti adalah: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC

3 yang pertama harus memberi koloni putih berwarna merah jambu atau telus dengan latar belakang merah. Salmonella dengan perkembangan yang baik dan Proteus dengan pertumbuhan kecil atau biasa.

Untuk Klebsiella dan Escherichia, dijangkakan koloni kuning-hijau dengan latar belakang kuning dan dalam kes Shigella dan Staphylococcus mereka harus dihambat.

Medium dehidrasi mesti disimpan pada suhu bilik, di tempat yang kering, kerana mediumnya sangat hygroscopic.

Rujukan

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Agar Hijau Hebat. 2009
2. Makmal Britannia. Agar Hijau Cerah. 2015.
3. Makmal BD. Agar Hijau BD. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. (Edisi ke-5.) Argentina, Editor Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA