VOGEL-JOHNSON AGAR: RASIONAL, PENYEDIAAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The agar Vogel-Johnson adalah medium terpilih dan pengkamiran budaya yang kukuh, dirumuskan khas untuk pengasingan Staphylococcus aureus. Medium ini dibuat oleh Vogel dan Johnson pada tahun 1960 dari pengubahsuaian agar glisin Tellurite yang diformulasikan pada tahun 1955 oleh Zebovitz, Evans dan Niven.

Pengubahsuaian tersebut dilakukan dalam meningkatkan kepekatan manitol yang terdapat dalam medium dan penggabungan penunjuk pH. Formula semasa terdiri daripada triptein, ekstrak ragi, manitol, dipotassium fosfat, litium klorida, glisin, fenol merah, agar, larutan kalium Tellurite 1%, dan air.

Sumber: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Perlu diingatkan bahawa ada media lain yang, seperti agar Vogel-Johnson, selektif untuk pengasingan S. aureus, seperti agar-agar manitol masin dan agar Baird Parker. Dalam pengertian ini, dapat dikatakan bahawa asas agar Vogel-Johnson adalah campuran antara agar-agar manitol masin dan agar-agar Baird Parker.

Pada yang pertama, koloni S. aureus dibezakan dengan fermentasi manitol dan mengubah penunjuk pH menjadi kuning. Sebaliknya, di kedua, S. aureus dicirikan dengan mengurangkan Tellurite ke Tellurium dan membentuk kelabu menjadi koloni hitam. Kedua-dua sifat diperhatikan dalam agar-agar Vogel-Johnson.

Medium ini, seperti rakan sejawatnya, berguna untuk mengesan Staphylococcus aureus dalam sampel makanan, kawalan kebersihan produk industri dan sampel klinikal.

Asas

Bekalan nutrien

Medium Vogel-Johnson mengandungi triptein dan ekstrak ragi; Kedua-dua bahan menyediakan asid amino rantai panjang yang berfungsi sebagai sumber karbon dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Bakteria yang dapat tumbuh dalam medium ini akan mengambil nutrien dari zat ini.

Kekuatan selektif

Agar Vogel-Johnson mampu menghalang pertumbuhan bakteria Gram negatif dan bahkan beberapa bakteria Gram positif, menyokong pengembangan staphylococci positif koagulase. Bahan penghambatnya adalah kalium Tellurite, lithium chloride, dan glycine.

Kuasa pembezaan

Bahan yang menjadikan medium pembezaan ini adalah manitol dan kalium Tellurite. Mannitol adalah karbohidrat, dan apabila asid fermentasi dihasilkan, menjadikan medium berubah menjadi merah menjadi kuning, yang terjadi berkat adanya penunjuk pH fenol merah.

Sedangkan, Tellurite yang tidak berwarna ketika dikurangkan menjadi Tellurium logam bebas, memerlukan warna abu-abu gelap hingga hitam.

Staphylococcus aureus fermentasi manitol dan mengurangkan Tellurite ke Tellurium. Atas sebab ini, koloni khas S. aureus dalam medium ini berwarna kelabu atau hitam dikelilingi oleh medium kuning.

Bakteria yang tumbuh di media ini dan tidak mengurangkan Tellurite atau fermentasi manitol akan membentuk koloni telus yang dikelilingi oleh media berwarna merah, bahkan lebih sengit daripada warna asalnya, kerana alkaliisasi medium dengan penggunaan peptones.

Sebaliknya, bakteria yang mengurangkan Tellurite tetapi tidak fermentasi manitol akan tumbuh sebagai koloni kelabu atau hitam yang dikelilingi oleh media merah tua.

Sekiranya medium disiapkan tanpa penambahan Tellurite kalium, koloni S. aureus akan berkembang sebagai koloni kuning, dikelilingi oleh media kuning, seperti pada agar manitol masin.

Ejen keseimbangan dan pemejalan osmotik

Dipotassium fosfat mengekalkan keseimbangan osmotik medium dan menyesuaikan pH ke neutraliti 7.2. Sementara agar memberikan konsistensi padat pada medium kultur.

Penyediaan

Larutan kalium Tellurite 1% w / v

Penyelesaian ini tidak termasuk dalam media dehidrasi, kerana tidak dapat disterilkan dalam autoklaf. Atas sebab ini ia disediakan secara berasingan dan ditambahkan ke medium yang sudah disterilkan.

Beberapa rumah komersial menjual larutan kalium Tellurite 1% yang siap digunakan. Sekiranya anda ingin membuat persediaan di makmal, lakukan seperti berikut:

Timbang 1.0 g Tellurite kalium dan ukur 100 ml air suling. Larutkan Tellurite kalium dalam bahagian air dan kemudian isi jumlah air hingga mencapai 100 ml. Mensterilkan larutan dengan kaedah penapisan.

Pangkalan Agar Vogel-Johnson

Timbang 60 gr medium dehidrasi, dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran dipanaskan hingga mendidih untuk membantu pembubaran lengkap. Semasa proses pembubaran media diaduk kerap.

Sterilkan dalam autoklaf pada tekanan 15 paun dan 121 ° C selama 15 minit. Keluarkan dari autoklaf dan biarkan sehingga rehat mencapai suhu sekitar 45 hingga 50 ° C. Masukkan 20 ml larutan kalium Tellurite 1% yang telah disediakan sebelumnya.

Campurkan dan tuangkan ke dalam piring Petri yang steril. Biarkan padat dan susun pada pemegang pinggan yang terbalik untuk disimpan kemudian di dalam peti sejuk sehingga digunakan.

PH akhir medium yang disediakan hendaklah 7.2 ± 0.2.

Sebelum menyemai sampel, tunggu pinggan mencapai suhu bilik.

Warna medium yang disediakan berwarna merah.

Gunakan

Walaupun ia dapat digunakan untuk pengasingan S. aureus dalam jenis sampel apa pun, ia banyak digunakan untuk analisis mikrobiologi produk farmasi, kosmetik dan makanan.

Disarankan agar inokulum padat. Penyemaian dapat dilakukan dengan mencetak dengan pemegang platinum atau permukaan dengan spatula Drigalski.

Plat diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam aerobiosis.

QA

Strain kawalan berikut dapat digunakan untuk melakukan kawalan kualiti pada media Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 atau Proteus mirabilis ATCC 43071.

Hasil yang diharapkan adalah seperti berikut: untuk pertumbuhan S. aureus yang memuaskan dengan koloni hitam yang dikelilingi oleh medium kuning. Untuk S. epidermidis pertumbuhan tetap dengan koloni tembus atau hitam dikelilingi oleh medium merah.

Begitu juga, penghambatan total diharapkan untuk E. coli, dan penghambatan sebahagian atau total untuk Proteus mirabilis; jika tumbuh ia akan melakukannya dengan hemat dan tanah jajahan akan dikelilingi hitam dengan warna merah.

Rujukan

1. Makmal BD. VJ (Vogel dan Johnson Agar). 2006. Terdapat di: bd.com
2. Makmal Britannia. Vogel- Johnson Agar. 2015. Terdapat di: britanialab.com
3. Makmal Britannia. Tellurite kalium. 2015. Terdapat di: britania.com
4. Makmal Himedia. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Terdapat di: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Pangkalan Agar Vogel- Johnson. Manual Mikrobiologi Merck. Edisi ke-12, hlm 502-503. Terdapat di: Pengguna / Pasukan / Muat turun
6. Penyumbang Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia a ensiklopedia bebas, tersedia di: wikipedia.org.
7. Venezuela Standard Covenin 1292-89. (1989). Makanan. Pengasingan dan penghitungan Staphylococcus aureus. Terdapat di: sencamer.gob.ve