BIURET: RASIONAL, REAGEN, PROSEDUR, PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The biuret ialah reagen digunakan untuk protein penentuan rantai panjang dan rantaian pendek. Ia digunakan terutamanya dalam bidang kimia analitik dan urinalisis untuk menyelidiki kepekatan protein total dalam serum, plasma dan air kencing.

Nilai protein dapat meningkat atau menurun dalam patologi tertentu. Gejala hipoproteinemia biasanya berlaku pada pesakit dengan penyakit ginjal, pada pesakit kekurangan gizi dan pada pesakit dengan jangkitan kronik.

Struktur kimia kompleks yang terbentuk dalam ujian Biuret Positif Biuret test. Sumber: Yikrazuul / flickr

Walaupun hiperproteinemia diperhatikan dalam patologi seperti multiple myeloma, lupus erythematosus sistemik, endokarditis bakteria, meningitis bakteria, makroglobulinemia Waldenstrom, antara lain.

Sebaliknya, kehadiran protein dalam air kencing disebabkan oleh penyaringan albumin oleh buah pinggang. Ini adalah tingkah laku patologi yang mesti dikaji.

Dalam pengertian ini, Biuret sangat berguna, kerana memungkinkan untuk mengukur kehadiran protein dalam serum, plasma, air kencing, di antara banyak sampel lain.

Bahkan Biuret dapat digunakan untuk menyiasat kehadiran dan kepekatan protein dalam sampel yang sedikit dieksplorasi atau komposisi yang tidak diketahui. Oleh itu, ia digunakan secara meluas di kawasan penyelidikan.

Ujian Biuret berdasarkan pengesanan ikatan peptida. Ujian dilakukan dalam medium alkali. Sampel mesti mengandungi sekurang-kurangnya dua ikatan peptida untuk membentuk kompleks ungu-ungu. Kompleks ini dibentuk oleh penyatuan ikatan dan ion tembaga.

Asas

Reagen Biuret terdiri daripada kalium hidroksida, sulfat cuprik, dan natrium dan kalium tartrat. Natrium hidroksida digunakan untuk mengalkali medium, kerana keadaan ini penting untuk tindak balas berlaku.

Bahan yang bertindak balas dengan protein adalah sulfat gelas, sedangkan natrium tartrat berfungsi untuk tidak membenarkan pembentukan hidroksida tembaga, yang cenderung memendap dan mengganggu tindak balas.

Sekiranya bahan dengan ikatan peptida (polipeptida atau protein) dijumpai dalam sampel, ujiannya akan positif.

Reaksi ditafsirkan sebagai positif apabila larutan bertukar menjadi ungu. Warna dihasilkan dengan pembentukan kompleks antara sekurang-kurangnya dua ikatan peptida yang mempunyai kumpulan CO-NH dan kation cuprik.

Kompleks ungu dapat dibentuk dengan dua cara: satu adalah dengan kehilangan proton dari kumpulan amida yang mengikat pada logam (depronotation), dan yang lain oleh penyatuan elektron oksigen dan nitrogen yang bebas dan mengikat dengan tembaga.

Tindak balas ini boleh berbeza-beza dalam intensiti dan warna bergantung pada jenis protein.

Ujian boleh dilakukan secara kualitatif atau kuantitatif. Dalam bentuk kualitatif ia dilaporkan positif atau negatif. Sementara dalam bentuk kuantitatif kepekatan dapat diukur dengan kaedah spektrofotometri.

Tindak balas dibaca antara 540-560 nm. Keamatan warna berkadar terus dengan kepekatan ikatan peptida dalam sampel.

Reagen

-20% natrium hidroksida (NaOH)

-Kuprat sulfat pentahidrat 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

-Tetrathidrat natrium dan kalium tartrat campuran (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Kestabilan reagen Biuret

- Ia mesti disimpan dalam peti sejuk.

Proses

Teknik

-Tempatkan 100 µl sampel atau piawai untuk dianalisis dalam tabung uji.

-Tambah 2 ml natrium hidroksida.

-Bancuh dengan baik.

-Tambah 5 ml reagen Biuret.

-Campurkan dan biarkan berehat selama 25 minit pada suhu bilik, tutup dan lindungi dari cahaya.

-Memerhatikan pembentukan atau tidak warna dan mengukur spektrofotometrik.

Keluk penentukuran

Albumin serum bovine dapat digunakan sebagai standard untuk melakukan keluk penentukuran. Pelbagai kepekatan disediakan daripadanya. Contohnya 25, 50, 75, 100, 125 dan 150%.

Tindak balas dibuat dengan semua kepekatan yang diketahui dan serapan dibaca pada panjang gelombang 540 nm. Dengan data kepekatan yang diketahui dan bacaan serapan, keluk penentukuran dibuat.

Dalam setiap penentuan atau kumpulan sampel yang diproses, disarankan untuk memasang standard. Albumin serum bovine 0.1-2 mg / ml boleh digunakan sebagai standard penentukuran.

Pengukuran dibuat pada spektrofotometer pada jarak 540 nm.

Lineariti dipenuhi hingga kepekatan 12 g / dl.

Gangguan

Bahan yang mengganggu ujian Biuret

Walaupun tidak begitu kerap, perlu diperhatikan bahawa beberapa bahan boleh mengganggu semasa pelaksanaan ujian ini. Contohnya, kehadiran ammonia dapat menghalang pembentukan warna.

Begitu juga, bahan lain dapat menyerap pada panjang gelombang yang sama, seperti pigmen tertentu.

Sebaliknya, gangguan boleh dihasilkan apabila bahan selain daripada ikatan peptida membentuk kompleks dengan garam cuprik. Contoh: sebilangan karbohidrat dan lipid tertentu.

Sekiranya sampel yang akan dianalisis menunjukkan beberapa jenis endapan, ia mesti disaring atau disentrifugasi sebelum menjalankan ujian.

Bahan yang tidak mengganggu ujian Biuret

Ujian tidak dipengaruhi oleh kehadiran:

-Bilirubin hingga kepekatan 20 mg / dl.

-Hemoglobin hingga kepekatan 750 mg / dl.

-Deksran hingga kepekatan 30 g / L.

-Trigliserida hingga kepekatan 4000 mg / dl.

Kelebihan

-Ia adalah kaedah mudah untuk dilaksanakan.

-Ia ujian ekonomi.

-Ia mempunyai kekhususan tinggi untuk protein.

-Gangguan kecil.

Kekurangan

Ia mempunyai kepekaan yang lemah untuk mengesan jumlah protein yang rendah. Kerja yang dilakukan oleh Fuentes et al. Menegaskan bahawa kaedah ujian Biuret mempunyai had pengesanan 1 mg / ml protein dan had kuantifikasi 3 mg / ml.

Walau bagaimanapun, penyelidikan lain yang dilakukan di University of Amazonia melaporkan nilai yang jauh lebih rendah. Had pengesanan yang dilaporkan oleh kajian adalah 0.020 mg / ml dan had pengukuran adalah 1.33 mg / ml.

Permohonan

Reagen atau ujian Biuret digunakan untuk penentuan protein dalam sampel klinikal dan bukan klinikal di makmal rutin dan penyelidikan.

Patologi yang berlaku dengan peningkatan atau penurunan pada

Dalam banyak patologi, penting untuk menentukan kepekatan protein total dalam sampel klinikal, yang mungkin meningkat atau menurun.

Mereka dinaikkan dalam:

-Banyak myeloma,

-Lupus eritematosus sistemik,

- Endokarditis bakteria,

-Meningitis bakteria,

Makroglobulinemia Waldenstrom, antara lain.

Ia berkurang dalam:

- Kekurangan renal,

-Orang dengan tahap kekurangan zat makanan yang teruk,

-Pasien dengan jangkitan kronik antara lain.

Sampel klinikal

Sampel klinikal yang paling biasa adalah serum, plasma, dan air kencing. Nilai normal protein dalam serum atau plasma adalah 6.0-8.8 gr / dl.

Kepekatan protein dalam air kencing pada orang dewasa tidak melebihi angka 150 mg / 24 jam.

Nisbah protein / urin kreatinin nisbah nilai normal

Bayi: <0.50 mg

Kanak-kanak 2 tahun ke atas: indeks: 0.20 mg

Dewasa: <0.2 mg

Sampel bukan klinikal

Reaksi Biuret boleh digunakan untuk banyak jenis sampel bukan klinikal, seperti produk tenusu, antivenom, atau bahan yang tidak diketahui yang anda ingin menyiasat kehadiran protein.

Rujukan

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Pencirian fisiko-kimia dan kandungan protein ekstrak cecair tiram bakau (Crassostrearizophorae). Jurnal Kimia Cuba, 26 (1), 66-74. Diakses pada 26 Jun 2019, dari http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Pencirian fungsional almond biji mangga (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 19 Jun 2019, 16:37 UTC. 26 Jun 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, Garcia J. Piawaian kaedah Biuret untuk mengukur jumlah protein dalam serum antibotropik polivalen yang dihasilkan di Pusat Nasional Produk Biologi INS. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Terdapat di: repositorio.ins.gob.pe
5. Makmal Winer. Jumlah protein. Kaedah kolorimetrik untuk penentuan jumlah protein dalam serum dan plasma. Terdapat di: wiener-lab.com.ar