RUANG NEUBAUER: SEJARAH, CIRI, KEGUNAAN - BIOLOGI - 2026

Ruang Neubauer , hematometer atau hemositometer, adalah instrumen makmal yang terdiri daripada plat kaca tebal khas. Kamera ini digunakan untuk menghitung beberapa jenis sel seperti sel darah merah, sel darah putih dan platelet, walaupun dapat digunakan untuk menghitung spora, sperma, parasit, dll.

Ini menyajikan beberapa ciri yang sangat pelik, kerana terdiri dari 3 zon, yang satu pusat untuk dihitung dan dua zon sokongan. Setiap ruang mempunyai dua zon penghitung atau silang, satu di bahagian atas dan satu di bahagian bawah.

Ruang Neubauer. Sumber: SantiBadia. Gambar yang diedit.

Ini mempunyai beberapa bahagian dalam bentuk grid. Kawasan penghitungan adalah petak sederhana yang terdapat di 4 sudut kedua-dua graticules, ditambah dengan petak tengah.

Pemasangan kamera mesti dilakukan dengan berhati-hati, kerana perincian apa pun mempengaruhi jumlah sel. Terdapat banyak kesalahan yang dapat dilakukan, tetapi jika berlaku, kamera mesti dibongkar, dibersihkan dan dipasang kembali. Kesalahan utama merangkumi perkara berikut:

Melimpahi ruang atau mengisi minyak, membiarkan ruang kering, cuba mengeluarkan lebihan cecair dengan kain kasa, memiringkan ruang ketika mengangkutnya, mengisi ruang yang kotor atau basah, tidak mencampurkan pencairan atau sampel dengan baik, antara lain. Semua kesalahan ini akan menghasilkan nilai yang tidak nyata.

Sejarah

Ruang Neubauer adalah instrumen ketepatan, dan proses pembuatannya menjalani kawalan kualiti yang ketat. Ia dibuat untuk pengiraan tepat zarah atau unsur terbentuk per mm ³ , seperti sel dalam pelbagai cecair. Grafiknya yang halus diukir dengan pensil berlian.

Ciri-ciri ruang Neubauer

Seluruh ruang berukuran slaid normal sehingga boleh diletakkan di atas panggung mikroskop.

Ruang terdiri daripada tiga permukaan segi empat tepat pusat (a, b, c). Di zon "b" terletak zona R atau zon penghitungan, juga disebut retikulum. Satu di setiap sisi kamera, dipisahkan oleh zon "d".

Gambar rajah grafik Neubauer Chamber. Sumber: Panduan Praktikal untuk Hematologi. Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo, Venezuela.

Setiap graticule adalah kawasan yang digilap yang mengandungi kawasan penghitungan yang terukir. Ia terdiri daripada sebuah segi empat sama dengan luas permukaan 9 mm ² dan secara dalaman dibahagikan kepada 9 kotak dengan luas permukaan masing-masing 1 mm ² . Kotak empat sudut dibahagikan kepada 16 kotak lebih kecil (kawasan 0,0625 mm ² ).

Grid ini dibentuk oleh rangkaian garis milimeter yang bersilang antara satu sama lain, membentuk grid bergrafik sempurna yang dibatasi dengan ukuran yang telah ditentukan. Garis-garis ini telah terukir dengan hujung berlian.

Retikulum Neubauer yang dipertingkatkan. Sumber: Panduan praktikal Hematologi Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo, Venezuela.

Keempat sisi sesuai dengan kawasan penghitungan. Di sisi atau sudut inilah sebahagian besar sel (sel darah merah dan leukosit) dihitung, sementara trombosit dihitung di kawasan tengah.

Zon tengah mempunyai lebih banyak bahagian, ia terdiri daripada 1 mm ² persegi yang dibahagikan kepada 25 kotak yang masing-masing mempunyai luas permukaan 0,04 mm ² . Ini seterusnya dibahagikan kepada 16 grid dengan luas 0,0025 mm ² .

Penerangan mengenai retikulum Neubauer yang diperbaiki. a) Petak sudut, b) petak tengah, c) petak median dari petak tengah. Sumber: Panduan praktikal Hematologi Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo, Venezuela.

Zon "a" dan "c" berfungsi sebagai sokongan untuk meletakkan objek penutup khas yang disebut slaid hematometrik atau penutup hematimeter.

Ketinggian antara kerajang dan permukaan pengira adalah 0.1 mm. Pengukuran luas permukaan kotak penghitungan, serta ketinggian ruang dan pencairan sampel, adalah data yang diperlukan untuk membuat pengiraan akhir.

Permohonan

Ia digunakan untuk pengiraan sel. Ini sangat membantu di kawasan hematologi, kerana ia memungkinkan penghitungan 3 siri sel darah; iaitu sel darah merah, sel darah putih, dan platelet.

Namun, ia dapat digunakan di daerah lain, misalnya untuk menghitung sperma, spora, bakteria atau barang penting lain bergantung pada jenis sampel.

Bagaimana nak guna?

Penyediaan sampel

Untuk melakukan kiraan sel, biasanya dimulakan dari pencairan sebelumnya. Contoh: untuk mengira sel darah putih, sediakan pencairan 1:20 dengan cecair Turk. Pencairan dicampur dengan baik sebelum memuatkan pipet dan memasang ruang Neubauer.

Ada kalanya pencairan 1:20 tidak cukup untuk dikira. Sebagai contoh, pada pesakit yang menderita jenis leukemia kronik tertentu. Dalam kes ini, pencairan yang lebih tinggi seperti 1: 100 harus dibuat.

Sekiranya, sebaliknya, jumlahnya sangat rendah, seperti pada leukopenias yang teruk, pengenceran yang lebih kecil dapat dilakukan untuk memusatkan sampel. Contoh: anda boleh membuat pencairan 1:10.

Perubahan yang dilakukan mempengaruhi pengiraan.

Pemasangan ruang Neubauer

Ruang Neubauer dipasang dengan meletakkan slaid hematometrik di kawasan tengah. Kedua-duanya mesti sangat bersih dan kering. Untuk meletakkan lamela, ia diambil di tepi dan dijatuhkan dengan perlahan ke kamera.

Ini diisi dengan meletakkan hujung pipet atau pipet Thoma automatik pada sudut 35 ° di pinggir zon pemuatan. Cecair dikeluarkan dengan lancar dan kawasan pemuatan dipenuhi oleh kapilari. Ini dilakukan dari kedua-dua belah pihak untuk memuatkan kedua-dua salib.

Retikel tidak boleh berlebihan dan tidak boleh dinafikan cecair. Beban mestilah tepat. Adalah penting bahawa pengisian dilakukan secara homogen, iaitu, tidak ada gelembung.

Setelah ruang dipasang, dibiarkan berehat selama 2 minit sehingga sel-sel mendapan ke bawah dan visualisasi dan penghitungannya lebih mudah.

Selepas waktu rehat, ia dipasang di panggung mikroskop cahaya untuk pemerhatian. Pertama, ia difokuskan dengan objektif 10X dan jika perlu maka ia menjadi 40X.

Untuk meningkatkan visualisasi, aliran cahaya dari mikroskop dikurangkan. Untuk melakukan ini, kondensor diturunkan dan diafragma ditutup sedikit.

Mengira

Untuk mengira sel darah putih atau leukosit, keseluruhan permukaan empat petak sudut median dan segi empat tengah setiap retikulum mesti dihitung.

Pengiraan bermula di petak di sudut kiri atas. Anda bermula dari petak pertama baris pertama, iaitu dari kiri ke kanan sehingga anda sampai di hujung yang bertentangan.

Di sana anda turun dan melihat kembali dari kanan ke kiri sehingga anda sampai di hujung yang lain, dan seterusnya, sel-sel dalam setiap grid dikira secara zigzag. 16 grid setiap median petak dikira.

Untuk mengelakkan pengiraan sel dua kali, ada peraturan mengenai sel yang terletak di garis batas setiap grid. Sel di garis kiri dan atas dihitung dan sel di garisan kanan dan bawah diabaikan.

Kaunter sel manual mesti ada supaya operator menekan kekunci peranti seberapa banyak sel yang diperhatikan. Dengan penggunaan kaunter, pengendali dapat mengira tanpa perlu melihat dari medan mikroskopik. Pada akhir kiraan, anda akan melihat jumlah sel yang dikira.

Pengiraan

Untuk pengiraan anda boleh meneruskan dengan beberapa cara. Graticule tunggal dapat dihitung atau kedua-duanya dapat dihitung dan keduanya rata-rata. Dalam dua situasi ini, sel yang dikira mesti dikalikan dengan faktor, yang dalam kes ini adalah 40. Dan dengan itu jumlah kiraan per mm ^{3 diperoleh} .

Tetapi jika dua grid dihitung dan rata-rata tidak diambil, ia mesti dikalikan dengan faktor yang berbeza, dalam kes ini dengan 20.

-Faktor pelbagai

Inilah cara faktor pendaraban dikira.

Pelbagai data dipertimbangkan untuk pengiraan, termasuk titer pencairan, ketinggian ruang dan luas yang dikira.

Pencairan

Pencairan standard yang digunakan ialah 1:20 untuk kiraan leukosit.

Ketinggian ruang

Ketinggian antara ruang dan sel darah adalah 0.1 mm.

Kawasan yang dikira

Sekiranya 5 petak luas 1mm ² dikira , ini bermaksud bahawa jumlah luas kiraan adalah 5mm ² . Data ini mesti dikalikan dengan ketinggian ruang untuk mendapatkan jumlah isipadu yang dikira. Maksudnya, 5mm ² x 0.1mm = 0.5mm ³ .

Rumusan dan pengiraan

Dengan data yang kita miliki dikatakan:

Sekiranya dalam 0,5 mm ³ - ada --- jumlah sel dikira

Dalam 1 mm ³ --- akan ada - X n ° sel

X bilangan sel = (bilangan sel yang dikira x 1) / 0,5 mm ³

Tetapi pencairan juga mesti diambil kira. Oleh itu, formula adalah seperti berikut:

(bilangan sel dikira x 1) x 20 / 0.5 mm ³

Akhirnya, untuk meringkaskan, bilangan sel yang dikira dapat dikalikan dengan 40. Oleh itu, nilai leukosit per mm ^{3 diperoleh} .

Sekiranya dua retikel dihitung, data untuk kawasan yang dihitung diubah, yang dalam hal ini akan menjadi 10 kotak, yaitu 10 mm ² . Dan jumlah keseluruhan yang dikira 1 mm3. Rumusannya adalah:

(bilangan sel dikira x 1) x 20/1 mm ³

Oleh itu, dalam kes ini faktor pendaraban adalah 20.

Kesalahan

-Jika memuat kamera melebihi atau melebihi cecair, ketinggian kamera akan berbeza. Ini mengakibatkan kiraannya lebih tinggi daripada yang sebenarnya. Sekiranya anda cuba membuang lebihan dengan kain kasa atau kapas, ini adalah kesalahan besar. Tindakan ini akan menyebabkan sel berkonsentrasi, meningkatkan kiraannya.

-Jika ia dimuat dengan teruk, kiraannya akan lebih rendah daripada yang sebenarnya.

-Jika kamera dipasang dan dibiarkan kering, tidak dapat dihitung lagi kerana akan memberikan hasil yang salah.

-Jika pencairan sampel tidak dicampur dengan baik sebelum memuatkan ruang, terdapat risiko kesalahan dalam pembacaan, kerana sel tidak akan diedarkan secara homogen. Oleh itu, akan ada kepekatan sel yang lebih rendah atau lebih tinggi, bergantung pada sama ada sampel diambil dari permukaan cecair atau dari bahagian bawah tiub masing-masing.

-Kehadiran gelembung mengurangkan jumlah cecair yang mesti memasuki retikulum, mengganggu visualisasi dan pengedaran sel yang betul. Semua ini mempengaruhi hasilnya dengan ketara.

-Selama menghitung, jangan melihat dari mikroskop sehingga setiap petak besar selesai untuk mengelakkan tersesat.

-Satu sebab kesalahan adalah memiringkan kamera setelah dipasang. Atas sebab ini, tahap mikroskop mesti dinaikkan dengan teliti.

Syor

Sekiranya atas sebab apa pun anda mengesan kelainan pada pengisian ruang, disarankan agar anda membongkar persiapan itu, membersihkan ruang dan memasang semula dari awal.

Berhati-hatilah ketika membersihkan kamera untuk mengelakkan menggaru rambut silang. Sebaliknya, ketahuilah bahawa slaid hematometrik adalah halus dan rapuh. Pengendalian yang tidak betul boleh mematahkannya.

Sebelum anda mula mengira, pastikan sel diedarkan dengan baik. Pembahagian sel yang tidak sekata berlaku akibat pencampuran atau pencairan sampel yang buruk. Sekiranya ini berlaku, pemasangan mesti diulang.

Salah satu cara untuk mengetahui sama ada sel diedarkan dengan baik adalah dengan membandingkan jumlah setiap petak besar, bilangan sel yang dikira untuk setiap petak tidak boleh dibesar-besarkan berbeza antara satu dengan yang lain.

-Jika kiraan sel darah putih melebihi 50,000 mm ^3, disarankan untuk mengulangi kiraan, menjadikan pencairan lebih besar.

-Jika anda menukar pencairan, anda mesti mengira semula faktor pendaraban, kerana ini mempengaruhi formula.

Rujukan

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Perbandingan kepekatan sperma menggunakan ruang Makler dan ruang Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Terdapat dalam: scielo.
2. Ruang Neubauer. (2018, 27 Mac). Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. Tarikh perundingan: 04:10, 23 Jun 2019 dari es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Aplikasi kaedah penghitungan alternatif di Neubauer Chamber untuk menentukan kepekatan Trichomonas vaginalis. Pendeta Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Terdapat di: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analisis Spermogram. Pendeta Venez. Endokrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Terdapat dalam: ve.scielo
5. Panduan praktikal hematologi Sekolah Bioanalisis Universiti Carabobo. Venezuela. 1998