EC BROTH: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The EC sup atau sup Escherichia coli adalah medium budaya cecair terpilih. Medium ini disarankan oleh Kaedah Piawai untuk menghitung koliform total dan tinja, dengan teknik nombor yang paling mungkin (MPN) dalam sampel air dan makanan, di mana agen utama yang terlibat adalah Escherichia coli.

Kaldu EC terdiri daripada triptein, laktosa, garam hempedu, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, natrium klorida, dan air. Rumusannya dirancang secara strategik untuk mendorong pertumbuhan koliform total dan tinja dan mencegah perkembangan mikroorganisma lain yang menyertainya.

Perwakilan kiasan penyediaan kaldu EC. Sumber: Pixabay.com

Bakteria Escherichia coli adalah koliform fecal utama yang terdapat sebagai bahan pencemar dalam sumber air dan makanan, yang menjadi penyebab gangguan gastrousus.

Perlu diperhatikan bahawa terdapat banyak serotip Escherchia coli; Antaranya kita boleh menyebut enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) dan enteroaggregative (EAEC).

Medium ini mempunyai kemampuan untuk memungkinkan perkembangan mereka semua, tetapi tanpa dapat membezakannya antara satu sama lain. Ini memerlukan ujian tambahan.

Kajian mikrobiologi air dan makanan dengan bilangan yang paling mungkin (MPN) untuk mencari koliform total dan fecal adalah protokol yang terdiri daripada beberapa fasa; fasa dugaan, fasa pengesahan dan fasa penyelesaian. Kaldu EC digunakan dalam fasa pengesahan.

Asas

Kaldu EC

Medium EC didasarkan pada penyediaan unsur pemakanan yang diperlukan untuk pengembangan koliform total dan fecal yang optimum, di mana bakteria Escherichia coli dimasukkan.

Unsur pemakanan ini disediakan oleh triptein, menjadi sumber peptida dan asid amino yang sangat baik. Di samping itu, ia juga mengandungi laktosa, karbohidrat fermentasi yang memberikan tenaga dan memungkinkan untuk menunjukkan apakah bakteria menghasilkan gas.

Sebaliknya, media mengandungi garam hempedu yang memberikan watak selektif, kerana ia menghalang pertumbuhan mikroorganisma Gram positif yang mungkin terdapat dalam sampel.

Begitu juga, dipotassium fosfat dan monopotassium fosfat bertindak sebagai sistem pengimbangan pH. Sistem ini diperlukan, kerana laktosa yang terkandung dalam kaldu cenderung mengasidkan media ketika diperam oleh mikroorganisma, tetapi ini dikompensasikan oleh garam fosfat.

Oleh itu, unsur-unsur ini sangat penting, kerana keasidan yang tidak terkawal dapat mempengaruhi perkembangan mikroorganisma yang dicari dengan betul.

Sebahagiannya, natrium klorida menstabilkan medium secara osmotik, sementara air adalah pelarut bagi zat terlarut yang ada dan memberikan konsistensi cecair ke medium.

Novobiocin Modified EC Broth

Okrend dan Rose mencipta pelbagai kaldu EC, yang disebut kaldu EC yang diubahsuai novobiocin. Pengubahsuaian terdiri daripada mengurangkan kepekatan garam hempedu dan menambahkan 20 mg / dl novobiocin.

Pengubahsuaian ini menyokong pemulihan strain enterohemorrhagic Escherichia coli (O157: H7).

Serotipe bakteria ini menyebabkan kolitis hemoragik teruk yang boleh menyebabkan sindrom uremik hemolitik (HUS); yang seterusnya boleh menyebabkan kegagalan buah pinggang akut, dengan kadar kematian yang tinggi yang boleh mencapai hingga 50% pada orang tua.

Oleh kerana morbiditi dan kematian tahunan yang disebabkan oleh bakteria ini kerana penggunaan makanan yang tercemar, Jabatan Pertanian Amerika Syarikat (USDA) sangat mengesyorkan penggunaan medium ini.

Penyediaan

Kaldu EC

Timbang 37.4 g medium dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran hendaklah dibiarkan selama 5 minit. Selepas itu, dalam sumber haba, larut selesai dengan kerap dikacau.

Setelah dilarutkan, ia diedarkan ke dalam tabung uji prasyarat dengan tiub Durham di dalamnya. Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.

PH medium hendaklah 6.9 ± 0.2. Warna medium dehidrasi berwarna kuning air dan medium yang disediakan berwarna kuning muda.

Kaldu disimpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Pada masa penggunaan, kaldu mesti berada pada suhu bilik.

Sebaliknya, kaldu EC juga boleh disediakan pada kepekatan dua kali ganda.

Novobiocin Modified EC Broth

Timbang 36.7 g medium dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air. Selebihnya penyediaan adalah sama seperti yang dinyatakan di atas.

Gunakan

Analisis koliform total dan fecal

Kaldu EC sangat sesuai untuk fasa pengesahan kajian koliform dengan kaedah NMP, baik dalam sampel air, maupun dalam produk farmasi dan makanan.

Kaldu laktosa penghasil gas yang diperoleh dalam fasa dugaan harus diturunkan semula dalam kaldu hijau terang empedu 2% dan kaldu EC.

Untuk koliform total, kaldu EC diinkubasi secara aerobik selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C, dan untuk koliform tinja mereka diinkubasi secara aerobik selama 24 hingga 48 jam pada suhu 44 ° C.

Dalam kedua kes ini ditafsirkan sebagai berikut: tiub keruh dengan pengeluaran gas dianggap positif. Sekiranya tidak ada pengeluaran gas dalam 24 jam, pengeraman berterusan hingga 48 jam.

Kaldu positif EC menuju ke fasa pengesahan penuh, yang terdiri daripada reseed pada media terpilih seperti agar-agar Mac Conkey, agar EMB atau agar Endo.

Sekiranya kaldu yang digunakan adalah EC yang diubahsuai novobiocin, tiub positif disyorkan untuk disiram pada agar-agar Mac Conkey dengan sorbitol.

QA

Setiap kumpulan medium yang disediakan mesti dikawal kualiti. Pertama, kemandulan medium mesti dinilai. Dalam pengertian ini, satu atau dua kaldu diinkubasi tanpa inokulasi dalam aerobiosis selama 24 jam pada suhu 37 ° C. Hasil yang diharapkan adalah kaldu telus, tanpa kekeruhan atau perubahan warna.

Kedua, pertumbuhan strain yang diketahui mesti dinilai, untuk ini bakteria berikut dapat digunakan: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kes diharapkan pengembangan mikroba yang memuaskan, mengamati kaldu mendung dengan pengeluaran gas untuk E. coli dan tidak ada gas untuk Salmonella.

Strain lain yang boleh dimasukkan dalam kawalan adalah: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Strain ini mesti dihambat sepenuhnya.

cadangan

-Penempatan tiub Durham sangat penting untuk kajian koliform.

-Sebarkan medium dalam tabung uji sebelum disterilkan, tidak akan pernah.

-Jangan gunakan jika medium berumur lebih dari 3 bulan.

-Jangan gunakan jika ada perubahan pada ciri biasa medium yang diperhatikan.

Rujukan

1. Makmal Britannia. Medium EC. 2015. Terdapat di: britanialab.com
2. Enterohemorrhagic E. coli. Pusat keselamatan makanan dan kesihatan awam. 2010. Terdapat di: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Medium EC. Terdapat di: drinksafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin diubah suai medium EC. Terdapat di: drinksafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Pengesanan, pengasingan dan pencirian Escherichia coli menghasilkan toksin Shiga dari daging tanah segar dari tukang daging di Concepción, provinsi dari Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Terdapat di: www.scielo.org.