The laktosa sup adalah satu cara untuk bukan - terpilih medium budaya cecair yang digunakan terutamanya sebagai satu pra-pengayaan dalam pengasingan jenis Salmonella daripada analisis mikrobiologi untuk makanan yang diproses, produk tenusu atau air. Ini disyorkan oleh Suruhanjaya Antarabangsa Spesifikasi Mikrobiologi untuk Makanan (ICMPF).
Medium mengandungi enzimatik pencernaan gelatin, ekstrak daging dan laktosa, bahan yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria. Selanjutnya, laktosa adalah karbohidrat yang boleh ditapai, oleh itu beberapa koliform mampu memecahnya dengan pengeluaran gas.
Kaldu yang disusui dengan kekeruhan. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa gil
Atas sebab ini, kaldu laktosa disyorkan oleh Persatuan Kesihatan Awam Amerika (APHA) untuk kajian awal mengenai bakteria kolesterol total dan fecal, menjadikannya sebagai alternatif yang sangat baik untuk menggantikan kaldu triptofosa lauril sulfat dalam teknik standard Nombor Paling Kemungkinan (MPN). ), digunakan untuk analisis mikrobiologi makanan, susu dan air permukaan, bawah tanah, rekreasi, sampah domestik dan industri.
Asas
Untuk analisis mikrobiologi beberapa sampel, langkah pra-pengayaan adalah mustahak untuk dapat memulihkan mikroorganisma tertentu yang mungkin dalam kuantiti yang sangat rendah atau dalam keadaan tidak baik yang melanggar atau meminimumkan daya maju.
Begitulah keadaan makanan kering dan olahan, mungkin terkontaminasi Salmonellas sp. Dalam kes ini, jika bakteria itu ada, mereka mengalami penyalahgunaan fizikal dan kimia semasa proses pengeluaran produk.
Dengan cara mikroorganisma terdedah kepada faktor-faktor buruk seperti dehidrasi, pendedahan kepada produk penghambat atau toksik, dan pertindihan yang dihasilkan oleh kehadiran bakteria lain dalam kuantiti yang lebih besar, antara lain.
Dalam pengertian ini, kaldu laktosa mempunyai kesan pembaikan pada struktur mikroorganisma yang rosak, menyebabkannya pulih dan membiak, sedemikian rupa sehingga dapat dikesan.
Begitu juga, kaldu laktosa mempunyai keupayaan untuk mencairkan bahan penghambat yang boleh mempengaruhi daya majunya, yang memungkinkan perkembangannya. Di samping itu, komposisi pemakanan kaldu laktosa adalah strategik untuk mendorong pertumbuhan Salmonella sp berbanding mikroorganisma lain.
Untuk pengenalpastian akhir, ia mesti dikultur dengan media budaya pasti yang lain.
Sebaliknya, komposisi medium juga memungkinkan untuk mengesan mikroorganisma penapaian laktosa yang menghasilkan gas.
Penyediaan
Untuk menyediakan satu liter kaldu laktosa, 13 gram medium dehidrasi mesti ditimbang dan dilarutkan dalam 1000 ml air suling.
Untuk membantu melarutkan medium di dalam air, larutan boleh dipanaskan sedikit, tetapi tidak terlalu banyak.
Setelah homogen, larutan disediakan seperti berikut: jika kaldu digunakan untuk mencari coliform, rak tabung uji disediakan, di mana tiub fermentasi Durham dimasukkan terbalik.
Tiub Durham adalah perincian yang sangat penting, kerana ia akan memungkinkan pengesanan pembentukan gas, data yang sangat bernilai dalam pencarian koliform.
Setelah tiub siap, 10 ml kaldu laktosa dibagikan ke dalamnya, jumlah yang mesti mencukupi untuk menutup seluruh tiub Durham.
Sekiranya kaldu laktosa digunakan sebagai kaldu pra-pengayaan, tidak perlu meletakkan tiub fermentasi Durham. Dalam kes ini, kuantiti medium yang lebih besar diperlukan (225 ml), yang akan disajikan dalam botol 500 ml, mulut lebar dan dengan penutup skru tahan termo.
Selepas itu, tiub atau termos ditutup secara automatik pada suhu 121 ° C selama 15 minit.
Medium mesti kekal pada pH akhir 6.9 ± 0.2 pada 25 ° C.
Kaldu disimpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan.
Sebelum digunakan, kaldu mesti dibawa ke suhu bilik.
Sebaliknya, kaldu laktosa juga boleh disediakan dalam kepekatan berganda.
Beberapa makmal menambahkan bromokresol ungu ke kaldu laktosa sebagai penunjuk pH, untuk menunjukkan tabung di mana laktosa telah diperam kerana perubahan warna. Dalam kes ini, kuahnya mengambil warna ungu dan jika ada penapaian ia berubah menjadi kuning.
Permohonan
Di makmal mikrobiologi, kaldu laktosa banyak digunakan kerana ia adalah medium yang agak murah yang memberikan hasil yang boleh dipercayai dan cepat (24-48 jam).
Ini dapat digunakan untuk analisis koliform total dan tinja dalam makanan dan air atau sebagai kaldu pra-pengayaan untuk Salmonella.
Pra pengayaan
Pra pengayaan adalah langkah sebelum pengayaan sampel, yang sangat meningkatkan pemulihan bakteria genus Salmonella dalam makanan yang diproses.
Untuk melakukan ini, sampel makanan pejal (25 gram) atau cecair (25 ml) disemai dalam 225 ml kaldu laktosa, diinkubasi selama 24 hingga 48 jam. Selanjutnya, ia akan dikultur dalam media yang diperkaya seperti kaldu cystine selenit atau kaldu tetrathionate. Kemudian beralih ke media terpilih XLD dan SS.
Analisis koliform total dan fecal
Ia adalah medium yang sangat baik sebagai petunjuk pencemaran kotoran.
Atas sebab ini, kaldu laktosa sangat sesuai untuk fasa dugaan kajian koliform dengan kaedah Angka Paling Kemungkinan.
Untuk sampel di mana sejumlah besar koliform dicurigai, kuantiti yang lebih kecil akan diinokulasi (1 ml), sedangkan untuk sampel di mana kuantiti koliform yang lebih kecil dicurigai, jumlah sampel yang lebih besar (10 ml) akan diinokulasi.
Untuk analisis, 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 pencairan dibuat , membentuk bateri 3-5 tiub untuk setiap kepekatan yang digunakan.
Dari setiap pencairan, isipadu yang sama dimasukkan ke dalam kaldu laktosa.
Tiub diinkubasi selama 24 jam. Kaldu negatif diinkubasi selama 24 jam lagi.
Tafsiran hasil dibuat dengan memerhatikan dua ciri: yang pertama adalah kehadiran atau ketiadaan kekeruhan dan kerana media ini tidak mengandungi penunjuk pH, tidak akan ada perubahan warna.
Yang kedua ialah pengeluaran gas atau tidak. Gas mudah dibuktikan dalam tiub Durham dengan munculnya satu atau lebih gelembung udara di dalamnya.
Ia dianggap positif jika kedua-dua ciri diperhatikan, iaitu kekeruhan dengan pengeluaran gas. Tiub positif harus ditanam semula dalam media pengesahan (kaldu Bile Green Brilliant 2% dan kaldu EC).
Kawalan kualiti medium
- Semasa menyediakan medium, penting untuk tidak lupa meletakkan tiub Durhams jika tujuannya adalah untuk mempelajari koliform.
- Jangan terlalu panas medium sebelum disterilkan.
- Sebarkan dalam tabung uji sebelum disterilkan, jangan sesekali.
- Jangan gunakan jika medium berusia lebih dari 3 bulan.
- Jangan gunakan jika anda melihat perubahan ciri biasa medium.
- Semasa menyiapkan sekumpulan kaldu laktosa, uji kualitinya dengan menyemai jenis yang diketahui seperti Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii, dan Klebsiella pneumoniae. Mereka tumbuh dengan baik, dengan pengeluaran gas (kawalan positif).
- Ini juga termasuk Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium atau Enterococcus faecalis, yang tumbuh dengan baik, tetapi tanpa pengeluaran gas (Kawalan Negatif).
- Harus diingat bahawa warna asal media dehidrasi berwarna kuning air dan warna media yang disediakan berwarna kuning terang dan telus. Sekiranya perubahan warna atau penampilan diperhatikan, ia mungkin merosot.
Rujukan
- Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologi persekitaran dan mikrobiologi. (2013) Edisi pertama. Universiti Cartagenas, Colombia.
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. (2009). Teknik untuk Analisis Mikrobiologi Makanan. Edisi ke-2. Fakulti Kimia, UNAM. Mexico.
- Makmal Conda Pronadisa. 2017. Kepekatan dua kali ganda kaldu laktosa (European Pharm.)
- Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Perbandingan teknik pengekstrakan bakteria koliform dari endapan Lake Xochimilco, Mexico. Hujah pendeta. mikrob. 2013; 45 (3): 180-184. Terdapat di: scielo.org.
- Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Penentuan kualiti mikrobiologi perairan artesian di daerah-daerah di pusat, Cordillera dan ibu kota Perbandaran. Penyelidikan Inst Mem. Sains. Kesihatan 2013; 11 (1): 5-14. Terdapat dari: scielo.iics.