The sup malonate adalah medium cecair budaya digunakan untuk ujian diagnostik (malonate), digunakan untuk membezakan beberapa genus dalam keluarga Enterobacteriaceae itu. Ia dicipta oleh Leifson pada tahun 1933 dan kemudian diubah suai oleh Ewing, yang menambahkan sejumlah kecil ekstrak dekstrosa dan ragi ke formula asalnya.
Medium kini terdiri daripada ekstrak ragi, ammonium sulfat, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, natrium klorida, natrium malonat, dekstrosa, dan bromotimol biru. Ujian ini umumnya dimasukkan ke dalam bateri pengenalan biokimia untuk Enterobacteriaceae, membantu membezakan genera dan spesies tertentu.
Perwakilan grafik ujian malonat. A. Ujian negatif, B. (Pengasidan) Ujian negatif, C. (Pengalkali sederhana) Ujian positif. Sumber: Tiub warna publicdomainpictures.net
Ujian malonat didasarkan terutamanya pada kemampuan beberapa mikroorganisma menggunakan natrium malonat sebagai sumber karbon tunggal mereka dan amonium sulfat sebagai sumber nitrogennya.
Ujian malonat biasanya positif pada beberapa spesies genera Enterobacter, Klebsiella, dan Citrobacter. Manakala, kebanyakan spesies genera Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus dan Providencia, memberikan reaksi negatif.
Asas
Uji malonat terdiri daripada menunjukkan bakteria yang mampu menggunakan natrium malonat sebagai sumber karbon tunggal dan ammonium sulfat sebagai sumber nitrogen.
Sebilangan besar Enterobacteriaceae yang tidak menggunakan malonate dapat tumbuh dalam medium ini, dengan mengambil dextrose dan ekstrak ragi sebagai nutrien.
Dalam kes ini, sebarang usaha untuk alkalinisasi dengan penggunaan pepton akan ditangguhkan dengan penghasilan asid yang dihasilkan oleh fermentasi dekstrosa. Begitu juga, dipotassium dan monopotassium fosfat bertindak sebagai penyangga, mengekalkan pH pada 6.7.
Itulah sebabnya, apabila ujiannya negatif, kuahnya tetap sama dengan warna asal (hijau). Kadang kala medium menjadi berasid kerana fermentasi dekstrosa; tanpa penggunaan peptone dan penunjuk pH ia akan mengubah warna medium menjadi kuning. Untuk ini berlaku, pH mesti turun menjadi 6.
Walau bagaimanapun, apabila ujian ini positif, dikatakan bahawa mikroorganisma menggunakan malonat dan ammonium sulfat sebagai sumber karbon dan nitrogen masing-masing, tanpa menggunakan komponen lain.
Dalam kes ini, medium menjadi alkali kerana pembebasan natrium dan pembentukan NaOH yang seterusnya. Dalam pengertian ini, penunjuk pH (bromothymol blue) mengubah warna medium dari hijau menjadi biru apabila pH sama dengan atau lebih besar daripada 7.6. Biru boleh menjadi terang atau sengit (biru Prusia).
Akhirnya, natrium klorida mengekalkan osmolariti medium dan air adalah pelarut semua komponen.
Tafsiran
Kaldu Warna Sama (Hijau) - Ujian Negatif
Kaldu kuning: ujian negatif
Kaldu biru muda atau terang: positif
Terdapat varian yang disebut kaldu fenilalanin malonat, juga disebut medium Shaw dan Clarke. Dalam kes ini, dua ujian dapat dianalisis, penggunaan malonat sebagai sumber karbon dan penghasilan asid piruvik dari fenilalanin.
Penyediaan
Kaldu malonat
Jumlah gram yang ditentukan oleh sisipan syarikat komersial yang dipilih ditimbang (mungkin berbeza antara satu dengan yang lain). Gram yang ditimbang digantung dalam satu liter air suling. Panaskan sedikit hingga larut sepenuhnya. Sebarkan 3 ml medium ke dalam tabung uji 13/100 dengan penutup kapas.
Sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 hingga 20 minit.
Sejukkan sebelum digunakan. Sekiranya tidak dapat digunakan dengan segera, simpan di dalam peti sejuk sehingga digunakan. Bawa kaldu ke suhu bilik sebelum diinokulasi.
PH medium hendaklah 6.7 ± 0.2. Warna medium yang disediakan berwarna hijau botol.
Kaldu Phenylalanine Malonate
Timbang 11 g medium dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Penyediaan selebihnya sama seperti yang dijelaskan sebelumnya.
Ia juga boleh disediakan dengan menambahkan 2 g / L fenilalanin ke medium kaldu malonat sebelum disterilkan.
Gunakan
Ia digunakan sebagai bagian dari uji biokimia yang dipasang untuk mengenal pasti bakteria dari keluarga Enterobacteriaceae.
Membantu membezakan antara:
- Genus Klebsiella dan Enterobacter (+) genus Escherichia dan Serratia (-).
-Spesies Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame dan Salmonella enterica ssp diarizonae (+), dari spesies Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Dari genus Klebsiella secara amnya (+) dari genus Actinobacillus (-).
-Kadang-kadang ia dapat membantu pembezaan genera dan spesies bakteria yang tidak tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae, seperti di antara Gram negatif bacilli Alcaligenes faecalis (+) dan Acinetobacter sp (-).
Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
Proses
Di bawah pemetik api, sebahagian cologne tulen diambil, menggunakan pemegang platinum yang disterilkan dan disejukkan dengan betul. Sampel yang diambil (inokulum ringan) dilarutkan dalam kaldu malonat. Inkubkan dengan penutup yang longgar dalam aerobiosis pada suhu 35 ° C ± 0.2 selama 24 hingga 48 jam.
Kaldu malonat juga dapat diinokulasi dari kultur 18-24 jam dalam kaldu soya. Dalam kes ini, 0,01 ml diambil dengan pipet steril dan kaldu malonat diinokulasi. Inkubkan dengan penutup yang longgar dalam aerobiosis pada suhu 35 ° C ± 0.2 selama 24 hingga 48 jam.
Selepas waktunya, hasilnya ditafsirkan. Sebarang jejak warna biru setelah inkubasi 48 jam harus dianggap positif. Ujian ini tidak boleh ditafsirkan sebagai negatif sehingga masa inkubasi 48 jam berlalu.
Sekiranya menggunakan varian kaldu phenylalanine malonate, malonate ditafsirkan terlebih dahulu dan kemudian 5 tetes HCl 1N dan 3-5 tetes ferrik klorida 8% ditambahkan. Warna hijau gelap ditafsirkan sebagai ujian positif untuk fenilalanin. Sekiranya, sebaliknya, media berubah menjadi biru pucat, ujiannya negatif untuk fenilalanin.
QA
Untuk melakukan kawalan kemandulan medium, satu atau dua kaldu harus diinkubasi pada suhu 35 ° C ± 0.2 selama 24 jam inkubasi. Selepas masa ini tidak akan ada keruh atau perubahan warna.
Untuk kawalan kualiti, strain yang dikenali atau diperakui dapat digunakan, seperti: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 dan Escherichia coli ATCC 25922.
Hasil yang diharapkan adalah:
- Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae dan Salmonella enterica ssp arizonae memberikan reaksi positif (warna biru sederhana).
- Untuk Escherichia coli, hasilnya harus negatif, yakni diharapkan tidak akan ada perubahan warna (hijau) atau akan berubah menjadi kuning akibat fermentasi glukosa.
Batasan
Jangan gunakan kaldu yang menunjukkan kekeruhan, mendakan, perubahan warna atau tanda kemerosotan.
Rujukan
- Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Pengasingan mikrobiologi Salmonella spp. dan alat molekul untuk pengesanannya. Kesihatan Uninorte. Barranquilla (Kol.) 2014; 30 (1): 73-94. Terdapat di: scielo.org.co
- BBL. Malonate Broth, Ewing diubah suai. 2007. Terdapat di: bd.com
- Makmal Senna. Kaldu Malonato. Terdapat di: cientificasenna.com
- RenyLab. Kaldu Malonato. 2013. Terdapat di: es.renylab.ind.br
- Diagnostik Mbiolog. Kaldu Malonato. Terdapat di: mbiolog.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Makmal Conda Pronadisa. Kaldu phenylalanine malonate. Terdapat di: condalab.com