The soya sup tryptone ialah medium budaya cecair, sangat berkhasiat, tidak terpilih. Oleh kerana serba boleh yang hebat, ia adalah salah satu media kultur cecair yang paling banyak digunakan di makmal mikrobiologi.
Ia juga dikenal dengan nama kaldu kedelai triptik atau kasein-soya yang dicerna, yang singkatannya adalah TSB untuk akronimnya dalam bahasa Inggeris Tryptic Soy Broth atau CST untuk singkatannya dalam bahasa Sepanyol. Kegunaannya sangat berbeza kerana komposisinya. Ia terdiri daripada triptein, peptone kedelai, natrium klorida, dipotassium fosfat, dan glukosa.
Kaldu soya Trypticasein yang diberi benih Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 di mana pengeluaran pigmen diperhatikan. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil.
Ia mampu menghasilkan bakteria patogen yang penting secara klinikal, termasuk bakteria yang memerlukan nutrisi dan bakteria anaerob. Beberapa kulat oportunis dan mencemari juga boleh berkembang di persekitaran ini.
Oleh kerana kekuatan nutriennya yang tinggi, ia mempunyai kepekaan yang tinggi untuk mengesan pencemaran mikroba, oleh sebab itu ia dipilih oleh Perkhidmatan Pemeriksaan Kesihatan Haiwan dan Tumbuhan USDA untuk analisis mikrobiologi vaksin.
Begitu juga, sup soya trypticasein memenuhi kehendak farmakopia yang berbeza (EP Eropah, JP Jepun dan USP Amerika Utara) untuk kajian mikrobiologi produk pada peringkat industri, seperti kosmetik dan makanan.
Sebaliknya, perlu disebutkan bahawa walaupun mempunyai kegunaan yang besar, medium ini agak murah, menjadikannya berpatutan untuk kebanyakan makmal mikrobiologi. Ia juga sangat senang disediakan.
Asas
Triptein, peptone dan glukosa memberikan khasiat nutrien penting untuk menjadikannya medium yang ideal untuk pertumbuhan mikrob yang cepat.
Dalam masa inkubasi sekitar 6 hingga 8 jam, pertumbuhan sudah dapat dilihat pada kebanyakan mikroorganisma. Walau bagaimanapun, terdapat ketegangan yang tumbuh perlahan yang memerlukan masa beberapa hari untuk berkembang.
Natrium klorida dan dipotassium fosfat masing-masing bertindak sebagai keseimbangan osmotik dan pengatur pH. Kehadiran pertumbuhan dibuktikan dengan penampilan kekeruhan di medium; jika tidak ada pertumbuhan, mediumnya tetap lut.
Oleh kerana warnanya yang terang, adalah mungkin untuk memerhatikan pengeluaran pigmen, seperti yang ditunjukkan dalam gambar pada awal artikel, yang sesuai dengan pigmen yang dihasilkan oleh Pseudomonas aeruginosa.
Penyediaan
-Kuah soya Triptysein
Untuk menyediakan kaldu kedelai triptik, 30 g medium komersial yang mengalami dehidrasi mesti ditimbang dalam skala digital. Kemudian dilarutkan dalam satu liter air suling yang terdapat dalam termos.
Campuran dibiarkan berehat selama 5 minit dan kemudian dibawa ke sumber haba untuk membantu melarutkan medium. Ia mesti dikacau dengan kerap semasa mendidih selama 1 minit.
Setelah larut, ia diedarkan ke dalam tabung dengan ukuran yang sesuai seperti yang diperlukan. Tiub dengan penutup kapas atau topi Bakelite dapat digunakan. Selepas itu, tiub disterilkan dengan medium di autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.
PH medium mesti kekal pada 7.3 ± 0.2
Perlu diperhatikan bahawa warna medium kultur dehidrasi berwarna kuning muda dan harus disimpan di antara 10 hingga 35 ° C, di tempat yang kering. Sedangkan kaldu yang disiapkan berwarna kuning muda dan harus disimpan di dalam peti sejuk (2 hingga 8 ° C).
-Variasi sup soya trypticasein
Kaldu soya trypticasein yang diubahsuai dapat disediakan dengan menambahkan garam hempedu dan novobiosin untuk menjadikannya selektif untuk pengasingan E. coli. Pilihan lain untuk tujuan yang sama adalah menyediakan sup soya trypticase yang dilengkapi dengan vancomycin, cefixime dan Tellurite (2.5 µg / ml).
Sebaliknya, lebih banyak glukosa (0.25%) dapat ditambahkan ke dalam sup soya triptik ketika objektifnya adalah untuk merangsang pembentukan biofilm.
Gunakan
Ia cukup berkhasiat untuk memungkinkan pertumbuhan bakteria cepat atau cepat seperti Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp dan Brucella sp, tanpa perlu ditambah dengan darah atau serum.
Begitu juga, beberapa kulat boleh tumbuh di dalam kaldu ini, seperti Candida albicans Complex, Aspergillus sp dan Histoplasma capsulatum.
Tambahan pula, medium ini dalam keadaan anaerobik sangat sesuai untuk memulihkan bakteria yang tergolong dalam genus Clostridium, serta bakteria anaerobik yang tidak sporulasi yang mempunyai kepentingan klinikal.
Sekiranya natrium klorida 6.5% ditambahkan, ia boleh digunakan untuk pertumbuhan Enterococcus dan Streptococcus Kumpulan D yang lain.
Pada peringkat penyelidikan, sangat berguna dalam pelbagai protokol, terutama dalam kajian biofilm atau bakteria pembentuk biofilm. Ia juga digunakan untuk menyiapkan suspensi bakteria Mac Farland 0,5% yang diperlukan untuk melakukan antibiogram dengan kaedah Kirby dan Bauer.
Dalam kes ini, 3 hingga 5 koloni penampilan serupa diambil dan diemulsi dalam 4-5 ml kaldu soya triptisasein. Ia kemudian diinkubasi selama 2 hingga 6 jam pada suhu 35-37 ° C dan seterusnya disesuaikan dengan kepekatan yang diinginkan menggunakan garam steril. Kaldu soya Trypticasein tidak boleh digunakan dari 18 hingga 24 jam pengeraman.
Disemai
Sampel boleh ditanam secara langsung atau koloni tulen yang diambil dari media terpilih dapat dikultur. Inokulum harus kecil agar tidak mengaburkan medium sebelum inkubasi.
Biasanya ia diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam, tetapi keadaan ini mungkin berbeza bergantung pada mikroorganisma yang dicari. Ia juga dapat diinkubasi dalam keadaan anaerobik pada suhu 37 ° C selama beberapa hari jika perlu. Sebagai contoh, mikroorganisma yang tumbuh dengan cepat atau cepat boleh diinkubasi sehingga 7 hari.
Dalam analisis mikrobiologi bahan farmasi - seperti vaksin - protokolnya lebih ketat. Dalam kes-kes ini, kaldu tanpa pertumbuhan tidak dibuang sehingga mencapai inkubasi berterusan selama 14 hari.
QA
Dari setiap kumpulan yang disediakan, 1 atau 2 tiub yang tidak diinokulasi harus diinkubasi untuk menunjukkan kemandulannya. Ia mesti tetap tidak berubah.
Strain yang dikenali juga boleh ditanam untuk menilai tingkah laku mereka. Antara strain yang boleh digunakan adalah:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 atau 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCConon P5Conon, ATCCon285
Dalam semua keadaan, pertumbuhan mesti memuaskan di bawah keadaan suasana dan suhu yang sesuai untuk setiap mikroorganisma.
Batasan
-Fermentasi glukosa menyebabkan penurunan pH medium kerana penghasilan asid. Ini boleh menjadi tidak baik untuk kelangsungan hidup beberapa mikroorganisma yang sensitif terhadap keasidan.
-Tidak dianjurkan untuk menjaga ketegangan, kerana selain keasidan, bakteria akan menghabiskan nutrien setelah beberapa hari dengan pengumpulan bahan toksik yang mengakibatkan persekitaran tidak ramah.
-Anda mesti berusaha menjaga semua protokol kemandulan, kerana kuahnya mudah tercemar.
-Setelah menyediakan kaldu soya triptisasein, anda tidak boleh cuba memindahkan kaldu ke tabung steril yang lain, kerana manuver jenis ini sangat terdedah kepada pencemaran.
Rujukan
- Cona E. Syarat untuk kajian kerentanan yang baik dengan ujian penyebaran agar. Pendeta chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Terdapat di: scielo.org
- Makmal Britannia. Kaldu soya Triptein. 2015. Terdapat di: britanialab.com
- Makmal MCD. Kaldu Soya Trypticasein. Terdapat di: electronic-systems.com
- Makmal Neogen. Triptych Soy Broth. Terdapat di: drinksafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Penilaian teknik imunoseparasi magnetik untuk pemulihan Escherichia coli O157: H7 dalam krim susu. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Terdapat di: scielo.org.ve
- Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Pembentukan biofilm dalam Staphylococcus aureus mengasingkan mengikut kerentanan antimikroba dan asal klinikal. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Terdapat di: saber.ucv.ve
- Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Pengasingan Escherichia coli O157: H7 dalam Sampel Fesyen Sapi Berkembar Berkembar dari Perbandaran Miranda, Negeri Zulia, Venezuela. Pendeta Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Terdapat di: scielo.org