KALDU TETRATHIONATE: RASIONAL, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAANNYA - BIOLOGI - 2025

The tetrathionate sup atau sup TT ialah medium budaya cecair terpilih untuk pengayaan dan pemulihan daripada strain genus Salmonella. Ia dicipta oleh Müeller dan kemudian diubah suai oleh Kauffmann, sebab itulah ada yang menyebutnya kaldu Müeller-Kauffmann.

Medium asli mengandungi peptone proteosa, kalsium karbonat, dan natrium tiosulfat. Kauffmann menambahkan garam hempedu ke dalamnya dan mencipta modaliti lain dengan warna hijau terang. Bahan-bahan ini menghalang pertumbuhan koliform, membiarkan media bebas untuk pengembangan bakteria patogen, dalam hal ini Salmonella.

Menambah larutan iodin iodin ke dalam kaldu tetrathionate. Sumber: Manuel Almagro Rivas

Pengubahsuaiannya sangat berjaya kerana meningkatkan kepekaan medium dengan ketara. Atas sebab ini, pada masa ini berguna untuk mencari Salmonella dalam jenis sampel apa pun, tetapi terutama untuk najis dan makanan pepejal atau cair.

Penyediaannya terdiri daripada dua fasa; Medium komersial adalah asas untuk menyediakan kaldu tetrathionate, dan selanjutnya, sehingga tetrathionate dapat terbentuk, larutan iodin iodin ditambahkan untuk melengkapkan medium.

Persatuan Kesihatan Awam Amerika (APHA) mengesyorkan penggunaan Tetrathionate Broth ditambah dengan hijau terang untuk pengayaan sampel untuk Salmonella, kerana lebih selektif daripada Tetrathionate Broth dan Selenite Broth.

Secara umum, kaldu tetrathionate sangat sesuai apabila kehadiran bakteria genus Salmonella disyaki dalam jumlah kecil atau ketika disalahgunakan oleh pendedahan kepada bahan penghambat atau oleh proses industri yang meminimumkan daya maju mereka.

Asas

Peptone yang hadir sesuai dengan pencernaan kasein pankreas dan pencernaan peptik pada tisu haiwan. Ini menyediakan sumber karbon, nitrogen, dan nutrien umum untuk pertumbuhan bakteria.

Sebahagiannya, natrium tiosulfat bertindak balas dengan larutan yodium untuk membentuk tetrathionate. Ini menghambat pertumbuhan koliform dan mendukung pengembangan bakteria yang mengandung enzim tetrathionate reductase, di antaranya adalah genus Salmonella, tetapi juga Proteus.

Garam hempedu juga bertindak sebagai bahan penghambat bagi kebanyakan Gram positif dan beberapa bakteria Gram negatif (koliform).

Kalsium karbonat menyerap bahan toksik yang dihasilkan oleh penguraian tetrathionate, yang membentuk asid sulfurik. Dalam pengertian ini, kalsium karbonat meneutralkan keasidan, menjaga pH medium stabil.

Sekiranya modaliti hijau terang, bahan ini meningkatkan daya selektif kaldu tetrathionate dengan menghalang mikroorganisma selain daripada genus Salmonella.

Penyediaan

-Tetrathionate kuah

Penyelesaian iodin iodin

Untuk menimbang:

• 6 gram iodin.
• 5 g kalium iodida.

Kalium iodida dilarutkan dalam kira-kira 5 ml air suling steril, kemudian yodium ditambahkan sedikit demi sedikit sementara campuran dipanaskan. Setelah larut sepenuhnya, isikan sampai dengan air suling steril hingga mencapai jumlah akhir 20 ml.

Medium asas untuk kaldu tetrathionate

Timbang 46 gram medium dehidrasi dan gantung dalam 1 liter air suling steril. Campurkan dan panaskan hingga larut sepenuhnya, ia boleh mendidih hanya selama beberapa minit. Jangan autoklaf. Asas medium dibiarkan sejuk hingga kira-kira 45 ° C dan pada masa itu 20 ml larutan iodinasi ditambahkan.

Setelah menambahkan larutan iodin ke media, ia mesti digunakan dengan segera. Sekiranya anda tidak mahu menggunakan keseluruhan campuran, lakukan seperti berikut:

10 ml medium asas diedarkan ke dalam tiub, dan hanya untuk yang diinokulasi dengan sampel ditambahkan 0,2 ml larutan iodinasi.

Yang tidak akan digunakan masih boleh disimpan di dalam peti sejuk, namun kerana media tidak disterilkan, yang ideal adalah menyediakan jumlah yang tepat yang diperlukan.

Warna medium sebelum menambahkan larutan iodin beryodium berwarna putih susu dengan mendakan putih dan setelah penambahan ia berwarna coklat dengan endapan yang padat. Endapan yang diamati adalah normal dan sepadan dengan kalsium karbonat yang tidak larut. PH akhir medium ialah 8.4 ± 0.2.

-Varian kaldu tetrathionate dengan hijau terang

Untuk menyediakan kaldu tetrathionate hijau terang, semua langkah yang dijelaskan di atas dilakukan, tetapi tambahan, 10 ml larutan hijau terang yang disiapkan pada 0.1% akan ditambahkan ke dalam campuran.

Bersinar hijau

Penyelesaian ini disediakan seperti berikut:

Timbang 0.1 g hijau terang dan gantungkan dalam 100 ml air suling. Panaskan hingga mendidih untuk mencapai pembubaran total. Simpan dalam botol ambar.

Gunakan

Untuk sampel tinja (kultur najis) protokolnya adalah seperti berikut:

Inokulasi 1 g najis pepejal atau 1 ml najis cair dalam tiub dengan 10 ml kaldu tetrathionate yang siap digunakan. Goncang dengan kuat dan inkubasi secara aerobik pada suhu 43 ° C selama 6-24 jam.

Selepas itu, ambil 10 hingga 20 µl bahagian kaldu dan subkultur dalam media terpilih untuk Salmonella, seperti agar SS, agar XLD, agar hijau terang, agarek enterik Hektoen, antara lain.

Secara selari, media selektif untuk Salmonella harus diinokulasi dengan sampel langsung (tinja) tanpa pengayaan. Untuk spesimen sapu rektum, buangkan bahan yang terkumpul ke dalam tiub dan teruskan seperti yang dijelaskan di atas.

Untuk sampel makanan, timbang 10 g makanan pejal atau 10 ml makanan cair dan suntikan sebotol dengan 100 ml kaldu tetrathionate yang siap digunakan. Teruskan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan di atas tetapi inkubasi pada suhu 37 ° C.

Seperti yang dapat dilihat, hubungan antara sampel dan kaldu akan selalu menjadi 1:10.

QA

Strain kawalan yang diketahui boleh digunakan untuk menguji medium kultur. Jenis yang paling banyak digunakan ialah strain yang diperakui ATCC.

Strain yang akan digunakan ialah Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Pertumbuhan yang sangat baik dijangka untuk strain Salmonella, sementara Escherichia coli mungkin mempunyai pertumbuhan yang lemah atau biasa, dan strain positif Gram (Enterococcus dan Staphylococcus) dihambat sebahagian atau keseluruhannya.

cadangan

-Sebab medium ini tidak menghalang pertumbuhan Proteus, sebilangan makmal menggunakan 40 mg / L novobiocin untuk mencegah perkembangan ketegangan mikrob ini. Antibiotik mesti ditambah sebelum larutan yodium.

-Setelah menyediakan medium termasuk larutan iodin iodin, tidak boleh mengambil masa lebih dari 2 jam untuk diinokulasi.

-Semasa menyebarkan medium di dalam tabung, campuran mesti terus dihomogenkan untuk menumpukan kembali endapan yang terbentuk.

-Dalam sampel yang kurang tercemar, kaldu tetrathionate diinkubasi pada suhu 35-37 ° C, dan dalam sampel yang sangat tercemar, disarankan inkubasi pada suhu 43 ° C.

Rujukan

1. Makmal Conda Pronadisa. 2010. Pangkalan kaldu Tetrathionate menurut Müeller-Kauffmann. Terdapat dalam:
2. Makmal BD. 2003. Pangkalan Kaldu Tetrathionate. Terdapat dalam:
3. Makmal Britannia. 2015. Kaldu asas tetranate. Terdapat dalam:
4. Media BBL. 2005. Disiapkan dalam tabung untuk budaya spesies Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Perbandingan antara media kultur natrium selenit dan natrium tetrathionate, keduanya diinkubasi pada suhu 37 ° C dan 42 ° C untuk pengasingan Salmonella spp dari tinja pembawa. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220