KALDU THIOGLYCOLLATE: RASIONAL, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAANNYA - BIOLOGI - 2025

The sup thioglycollate adalah medium diperkaya konsisten cecair. Ia dikenali dengan akronim FTM untuk singkatannya dalam Bahasa Inggeris Fluid Thioglycollate Medium. Ia dibuat oleh Brewer dan dimodifikasi pada tahun 1944 oleh Vera, yang menambahkan peptone kasein ke dalamnya.

Medium ini mempunyai potensi pengurangan pengoksidaan yang rendah, oleh itu ia tidak digalakkan untuk pengembangan bakteria aerobik yang ketat, tetapi ia sangat sesuai untuk memulihkan bakteria aerobik, anaerobik ketat dan mikroerofilik yang tidak diperlukan.

Kaldu thioglycollate tanpa petunjuk. Menunjukkan keputihan. Sumber: Bobjgalindo

Prestasi tinggi yang diamati dengan media ini dalam pengasingan dan pemulihan pelbagai jenis mikroorganisma, menjadikannya diterima oleh Amerika Syarikat Pharmacopeia (USP), oleh Persatuan Pegawai Kimia Pertanian (AOAC) dan oleh Farmakope Eropah ( EP).

Organisasi-organisasi ini mengesyorkannya untuk ujian kawalan kemandulan produk farmaseutikal dan untuk pengayaan pelbagai jenis sampel.

Tioglikolat cado terdiri daripada ekstrak ragi, pencernaan kasein pankreas, dekstrosa anhidrat, L-sistin, natrium klorida, natrium tioglikolat, resazurin dan agar dalam jumlah kecil.

Terdapat beberapa versi medium ini, antaranya ialah: kaldu thioglycollate dengan indikator, kaldu thioglycollate tanpa petunjuk, kaldu thioglycollate dengan penunjuk yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K _1, dan kaldu thioglycollate dengan kalsium karbonat.

Terutama, varian kaldu thioglycollate yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K berfungsi untuk meningkatkan pertumbuhan anaerob yang cepat, dan varian kaldu thioglycollate yang mengandungi kalsium karbonat berguna untuk mengatasi asid yang dihasilkan semasa pertumbuhan mikroba.

Asas

Kaldu Thioglycollate dianggap sebagai media pengayaan yang tidak selektif kerana ia memungkinkan pertumbuhan bakteria yang tidak cepat. Keperluan pemakanan disediakan oleh ekstrak ragi, pencernaan pankreas dan glukosa.

Sebaliknya, medium ini, walaupun kaldu, mengandungi sedikit agar; Ini bermaksud bahawa ia mempunyai potensi pengurangan oksidasi yang rendah, kerana fakta bahawa ia melambatkan kemasukan oksigen, sedemikian rupa sehingga oksigen menurun ketika masuk lebih dalam ke dalam tiub.

Itulah sebabnya medium ini sangat sesuai untuk pengembangan bakteria anaerobik aerobik, mikroerofilik dan ketat fakultatif, yang kedua tanpa perlu diinkubasi dalam keadaan ini. Medium yang sama mengatur jumlah oksigen dalam medium, tidak ada di bahagian bawah tiub dan dalam jumlah yang mencukupi di permukaan.

Begitu juga, thioglycollate dan L-cystine bertindak sebagai agen pengurangan, membantu mencegah pengumpulan bahan yang berbahaya bagi perkembangan bakteria, seperti peroksida. Di samping itu, sebatian ini mengandungi kumpulan sulfhidril (-SH-), meneutralkan kesan penghambatan turunan merkuri, arsenikal, antara logam berat lain.

Sebaliknya, resazurin adalah petunjuk penurunan oksida. Bahan ini tidak berwarna apabila dikurangkan dan berwarna merah jambu ketika dioksidakan. Terdapat varian kaldu thioglycollate penunjuk dan bukan penunjuk. Penggunaannya akan bergantung pada jenis sampel dan pilihan makmal.

Sementara itu, natrium klorida mengekalkan keseimbangan osmotik kaldu thioglycollate dan penggunaan glukosa dalam bentuk anhidrat menghalang kelembapan berlebihan pada medium yang tidak kering.

Penyediaan

Kaldu Thioglycollate dengan Petunjuk

Timbang 29.75 g medium dehidrasi dan larutkan dalam 1 liter air suling. Campuran dibiarkan bertahan selama kira-kira 5 minit. Bawa ke sumber panas dan kacau kerap sehingga larut sepenuhnya.

Tuangkan medium ke dalam tabung uji dan autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit. Biarkan sejuk sebelum digunakan. Periksa bahagian rumah komersial untuk pemuliharaannya. Ada yang mengesyorkan menyimpan pada suhu bilik di tempat yang gelap, dan yang lain di dalam peti sejuk dilindungi dari cahaya.

PH medium yang disediakan ialah 7.1 ± 0.2.

Warna medium dehidrasi berwarna kuning muda dan medium yang disiapkan berwarna kuning muda dengan sedikit opalecence.

Kaldu thioglycollate dengan penunjuk yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K

Terdapat media komersial yang sudah mengandung hemin dan vitamin K ₁ , terutama untuk penanaman anaerob.

Sekiranya anda tidak mempunyai medium yang diperkaya untuk anaerob, anda boleh menyediakan kaldu thioglycollate asas. Untuk ini, 10 mg hemin hidroklorida dan 1 mg vitamin K _{1 ditambahkan} untuk setiap liter medium. Walau bagaimanapun, jika darah atau serum ditambahkan ke dalam kaldu thioglycollate, penambahan hemin atau vitamin K tidak diperlukan.

Kaldu thioglycollate dengan kalsium karbonat

Ia datang secara komersial dan disediakan mengikut arahan pada sisipan.

Kaldu thioglycollate tanpa petunjuk

Ini mempunyai komposisi thioglycollate asas yang sama, tetapi tidak mengandungi resazurin.

Timbang 30 g medium dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Sisa sediaannya sama seperti yang dijelaskan dalam kaldu thioglycollate dengan petunjuk.

Gunakan

Kaldu Thioglycollate berguna untuk pengayaan sampel klinikal, terutama dari tempat steril. Ia juga berguna untuk sampel bukan klinikal, seperti kosmetik, ubat-ubatan, dll.

Untuk inokulasi sampel cecair (seperti CSF, cecair sinovial, antara lain), sampel pertama disentrifugasi dan kemudian 2 titisan sedimen diambil dan dimasukkan ke dalam kaldu thioglycollate. Inkubasi pada suhu 35 ° C selama 24 jam. Sekiranya pada masa ini tidak ada pertumbuhan (kekeruhan), ia diinkubasi hingga maksimum 7 hari.

Sekiranya sampel diambil dengan penyapu, media kultur pertama kali diinokulasi dalam piring dan akhirnya penyapu dimasukkan ke dalam kaldu, bahagian yang menonjol dipecah dan tiub ditutup, meninggalkan pelapik ke dalam. Inkubasi pada suhu 35 ° C selama 24 jam, maksimum 7 hari.

Untuk sampel pepejal, homogenkan dalam larutan garam fisiologi (SSF) dan kemudian inokulasi kaldu thioglycollate dengan 2 tetes suspensi.

Kadang-kadang ia dapat digunakan sebagai media pengangkutan untuk sampel di mana anaerob ketat disyaki atau sebagai kaldu pengayaan cadangan.

Varian kaldu thioglycollate dengan kalsium karbonat digunakan untuk pemeliharaan strain kawalan untuk jangka masa yang lebih lama, kerana ia mempunyai kemampuan untuk meneutralkan asid yang dihasilkan oleh penggunaan glukosa; Asid ini beracun untuk bakteria tertentu.

Pertumbuhan dalam kaldu thioglycollate akan diperhatikan oleh kekeruhan medium. Sebaiknya lakukan pewarnaan Gram dan kemudian subkultur dalam media yang tidak selektif dan selektif, bergantung pada jenis sampel dan mikroorganisma yang disyaki.

QA

Untuk kawalan kemandulan disyorkan untuk menginkubasi satu atau dua kaldu tanpa inokulasi. Hasil yang diharapkan adalah kaldu yang jernih, tanpa perubahan warna, walaupun normal melihat sedikit warna merah jambu di permukaan tiub.

Untuk kawalan kualiti, antara 10 - 100 CFU strain kawalan yang diperakui harus diinokulasi, seperti Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubasi pada suhu 30-35 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam hingga maksimum 3 hari, kerana mikroorganisma ini berkembang pesat.

Perkembangan yang baik diharapkan dalam semua kasus, kecuali Micrococcus luteus dan Bacillus subtilis, di mana mungkin terdapat perkembangan yang sederhana.

Untuk kawalan kualiti kaldu thioglycollate yang diperkaya dengan hemin dan vitamin K ₁ , strain kawalan Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 dan Bacteroides fragilis ATCC 25285 dapat digunakan. Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan.

cadangan

-Kadang-kadang dapat diperhatikan bahawa permukaan kaldu thioglycollate dengan penunjuk berubah menjadi merah jambu; Ini disebabkan oleh pengoksidaan medium. Sekiranya warna merah jambu merangkumi 30% atau lebih dari jumlah kaldu, ia boleh dipanaskan dalam mandi air selama 5 minit, disejukkan semula dan digunakan.

Ini akan mengeluarkan oksigen yang diserap, mengembalikan medium ke warna asalnya. Prosedur ini hanya boleh dilakukan sekali.

-Untuk meningkatkan pertumbuhan bakteria aerobik, inkubasi dengan penutupnya sedikit longgar. Walau bagaimanapun, lebih baik digunakan untuk tujuan ini kaldu infus jantung otak atau kaldu soya triptis untuk pengembangan aerob yang ketat.

-Pembekuan medium atau terlalu panas harus dielakkan, kerana kedua-dua keadaan merosakkan medium.

-Cahaya langsung merosakkan media kultur, ia mesti disimpan dilindungi dari cahaya.

Rujukan

1. Makmal Britannia. Thioglycollate USP dengan penunjuk. 2015. Terdapat di: labBritania.com.
2. Makmal Chios Sas. 2019. Kaldu Thioglycollate. Terdapat di: quios.com.co
3. Makmal BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Terdapat di: bd.com/Europe
4. Media BBL disediakan dalam tabung untuk penanaman mikroorganisma anaerob. Media thioglycollate. 2013. Terdapat di: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.