ORCEIN: ASAS DAN PERSIAPAN - KIMIA - 2026

The orceína adalah semula jadi berwarna ungu, yang diekstrak daripada pelbagai liken sebagai orchilla atau archill, fruticose liken Rocella tinctoria dan Lecanora Parella terutamanya. Rocella tinctoria terdapat di benua Afrika dan Amerika, walaupun boleh digantikan oleh spesies lain yang terdapat di Eropah.

Noda ini telah banyak digunakan dalam kajian sitogenetik sejak zaman purba. Dalam pengertian ini, persiapan orcein yang merangkumi asid asetik diperkenalkan oleh LaCourt pada tahun 1941, itulah sebabnya pada awalnya ia disebut teknik LaCourt.

Struktur kimia larutan orcein dan orcein. Sumber: Wikipedia.org/ Oguenther di de.wikipedia (Dr. Guenther)

Begitu juga, kerana kesederhanaan dan kos rendah, ia telah digunakan untuk pembuatan litmus (noda yang diekstrak dari lichen) dan dalam kajian histologi (pewarnaan sel dan tisu).

Beberapa kajian menggunakan pewarnaan ini digabungkan dengan bahan kimia lain, seperti ammonia picrocarminate dan asid asetik, untuk mengotorkan serat elastik dan kromosom masing-masing. Pada masa ini, orcein terus digunakan dalam kajian sitogenetik haiwan dan tumbuhan.

Baru-baru ini, Silva et al. 2017 berjaya menggunakan noda ini untuk memerhatikan pelbagai perubahan yang berlaku pada serat elastik kulit ibu jari pada orang dewasa di Chile. Kajian ini mendedahkan bagaimana serat ibu jari berubah dengan penuaan.

Dalam pengertian ini, gentian elastik diperhatikan berwarna hitam kecoklatan pada individu yang berumur lebih dari 80 tahun; sementara pada yang termuda (dari 60 tahun) mereka dilihat berwarna coklat kemerahan. Sitoplasma dan struktur sel lain bertukar menjadi kekuningan-hijau.

Ini memungkinkan untuk mengesahkan kehadiran dan keadaan gentian elastik, dari segi pelupusan, kuantiti dan integriti mereka. Sebaliknya, juga telah menunjukkan bahawa orcein sangat membantu dalam mengenal pasti aneurisma dan mendiagnosis arteritis, antara lain.

Asas

Orcein adalah sebahagian daripada kumpulan pewarna oksazin, dan pewarnaan berdasarkan pertaliannya dengan DNA. Pewarna itu mengikat pada muatan negatif molekul ini, yang diwakili oleh kumpulan fosfat. Itulah sebabnya, kromosom berwarna ungu.

Walau bagaimanapun, struktur sel yang lain mengambil warna yang berbeza. Khususnya, dalam kes gentian elastik, berwarna coklat kemerahan, inti sel dari biru hingga ungu gelap, sementara kolagen tidak bernoda.

Atas sebab ini, orcein digunakan untuk mengotorkan kromatin dan membezakan jantina pada beberapa spesies lalat. Begitu juga, inti dan beberapa kemasukan hati yang dihasilkan oleh antigen hepatitis B dapat diwarnai.

Penyelesaian Orcein mempunyai fungsi khusus dalam pewarnaan. Orcein A mempunyai fungsi melembutkan membran sel, menyebabkan kematian mereka dan melumpuhkan proses pembelahan mereka. Sementara itu, orcein B bertanggungjawab untuk menyelesaikan pewarnaan dengan lekatannya pada kromosom.

Penyediaan

Penyelesaian Aceto-orcein 1%

Untuk menyediakan larutan 1% aceto-orcein, 2 gram orcein dilarutkan dalam 45 ml asid asetik glasial, lebih disukai panas, dan 55 ml air suling ditambahkan pada suhu bilik.

Kemudian, ia selalu dicampurkan untuk menghomogenkan larutan tersebut, kemudian dibiarkan sehingga ia sejuk. Akhirnya, disimpan pada suhu 4ºC dalam balang gelap. Penyediaan ini digunakan oleh Flores 2012, untuk memerhatikan tahap pematangan oosit sapi.

Dalam kes ini, misalnya, larutan aceto-orcein diletakkan di atas tisu yang sebelumnya terpaku dalam asid asetik-etanol selama 24 jam. Proses pewarnaan ini dilakukan selama 30 minit dan tisu kemudiannya berubah warna.

Begitu juga, ia boleh digunakan dalam mengenal pasti organel dalam tisu multiselular. Dalam kes ini, smear mukosa bukal diwarnai dengan setetes larutan aceto-orcein, penutup ditutup pada slaid dan inti sel dengan substrukturnya dapat dilihat dengan segera.

Penyelesaian lacto-proponic orcein 1%

Selain itu, orcein boleh disediakan dengan bahan kimia lain seperti asid laktik dan asid propionik. Untuk melakukan ini, satu gram orcein dilarutkan dalam larutan pracampuran pada suhu bilik 23 ml asid laktik dan 23 ml asid propionik; isi padu dengan air suling hingga 100 ml.

Dengan larutan lacto-propionic orcein ini adalah mungkin untuk memerhatikan pelbagai tahap pembahagian meiotik sel tumbuhan. Dalam kes ini, sampel pra-tetap dan hidrolisis diletakkan selama 15 minit dalam larutan lacto-propionic orcein dan kemudian tisu disebarkan pada slaid mikroskop.

Dalam kajian Duque 2016 mengenai kromosom poligenik, dia menggunakan sediaan 2 gram orcein yang diencerkan dalam asid asetik dan 85% asid laktik, dicairkan dengan larutan asid asetik 65%. Akhirnya, dia melihat kromosom di kelenjar air liur Drosophila melanogaster.

Orcein A dan Orcein B

Penting untuk diperhatikan bahawa bergantung pada sampel dan apa yang hendak dinilai, penyelesaian orcein yang sesuai disediakan. Oleh itu, sebagai contoh, asid hidroklorik 1N ditambahkan ke dalam larutan orcein A untuk memerhatikan sel yang membahagi.

Manakala larutan orcein B dilarutkan dalam asid asetik 45%. Teknik ini adalah kaedah pewarnaan yang disingkat dan umumnya digunakan sebagai tambahan kepada pewarnaan struktur kromosom.

Pemikiran terakhir

Sejak berabad-abad yang lalu, lumut seperti Lecanora, Parmelia dan Umbilicaria dapat dijumpai di negara-negara benua Amerika seperti Argentina, yang merupakan sumber orcein yang hebat. Juga kawasan Eropah seperti Kepulauan Canary, pada masa itu merupakan pengeluar orchilla yang besar.

Ini dieksport ke bandar-bandar lain di benua yang sama seperti Genoa dan negara-negara seperti England, sementara Belanda memonopoli pembuatan litmus dari orchilla. Oleh itu, lichen ini kemudian dikurangkan sehingga hampir pupus.

Ini menyebabkan orkilla digantikan oleh tanaman lain dengan sifat pewarna. Walau bagaimanapun, kemunculan pewarna sintetik menyumbang kepada penghentian perdagangan lichen sumber orcein ini.

Hal ini dimungkinkan berkat Cocq, yang pada tahun 1812 menjelaskan sintesis orcein, setelah mengetahui bahawa ia disintesis oleh sebatian fenolik yang disebut orcinol. Walau bagaimanapun, walaupun ini, orcein semula jadi masih menjadi pilihan masa kini.

Ini mungkin kerana orcinol adalah sebatian yang sangat berbau, dan pendedahannya yang berpanjangan boleh membawa risiko kesihatan, seperti kehilangan kemampuan untuk mengesan bau. Kerosakan ini pada pituitari boleh berubah dari sementara hingga kekal semakin besar pendedahannya.

Rujukan

1. Ortega L, García R, Morales C. «Aplikasi lak yang dihasilkan oleh kulat untuk degradasi pewarna mikrobiologi (orcein dan kristal ungu).» Orang Muda dalam Sains 2. 2015; 633-637. Terdapat di: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína dan Serat Elastik. Perubatan (Buenos Aires) 2003; 63: 453-456. Terdapat di: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Ciri Histologi Kulit Wajah Terbang Jempol pada Individu Cile dengan Daktilogram Memudar. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Terdapat di: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. "Biologi pembiakan kentang dan sitogenetik." Pusat Kentang Antarabangsa (CIP). Manual teknikal. Terdapat di: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. «Pengumpulan, budaya dan pematangan in vitro oosit sapi (bos taurus) di dataran tinggi Bolivia." . Universiti Nasional Altiplano, Puno-Peru; 2012. Terdapat di: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Kromosom polietik: Melihat fenomena endoreduplication. Universiti Nasional Colombia, Medellín; 2016. Boleh didapati di: edu.
7. Camarena F. Biologi Selular dan Molekul. Manual latihan. Universiti Autonomi Baja California. 2017. Boleh didapati di: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / IAEA. 2018. Manual untuk membezakan Anastrepha ludens (Loew) liar dan betina terbang dari regangan normal (“bi-seksual”) dan ketegangan seks genetik (Tapachula-7), disinari dan tidak disinari. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF dan Soto García DN Makanan dan Pertanian Pertubuhan Bangsa-Bangsa Bersatu. Rome, Itali, 95 hlm.
9. Orcein. (2018, 30 November). Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. Tarikh perundingan: 03:38, 31 Julai 2019 es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, 16 Julai). Mikroskopi Orcein untuk mikroskopi Certistain. Terdapat di: merckmillipore.com