UJIAN COAGULASE: RASIONAL, PROSEDUR, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The ujian coagulase adalah teknik makmal yang digunakan untuk mendedahkan kehadiran coagulase enzim. Enzim ini mempunyai sifat pembekuan plasma. Loeb pada tahun 1903 adalah yang pertama menggambarkan enzim ini.

Ujian ini dilakukan pada cocci Gram-positive, catalase-positive, yang memungkinkan untuk membezakan strain Staphylococcus aureus dari staphylococci yang lain, kerana ia adalah satu-satunya mikroorganisma yang mempunyai kepentingan klinikal yang menghasilkannya.

Kedua-dua gambar menunjukkan Ujian Coagulase positif. Sumber: Gambar kiri: Philippinjl. Gambar kanan: Foto diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil.

Dalam pengertian ini, anggota Keluarga Staphylococaceae yang menguji negatif sering disebut sebagai Staphylococcus negatif koagulase.

Terdapat beberapa strain selain S. aureus yang dapat menghasilkan koagulase, seperti Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius dan S. delphini.

Walau bagaimanapun, tiga yang pertama mempunyai kepentingan klinikal di peringkat veterinar dan jarang dijumpai sebagai agen penyebab jangkitan pada manusia, sementara S. delphini hanya dijumpai di persekitaran laut.

Selanjutnya, mereka mudah dibezakan kerana S. hyicus dan S. intermedius tidak fermentasi mannitol dan S. schleiferi spp coagulans tidak fermentasi maltosa atau trehalosa, sementara S. aureus melakukan fermentasi karbohidrat ini.

Kehadiran enzim koagulase telah dikaitkan dengan virulensi strain. Walau bagaimanapun, teori ini telah berantakan, kerana spesies negatif koagulase virulen lain yang mampu menghasilkan jangkitan ketara diperhatikan.

Asas

Tafsiran

Pengagregatan dalam 5-20 saat (ujian positif yang kuat).

Gabungan berubah-ubah berlaku antara 20 saat dan satu minit (ujian positif tertunda).

Beberapa tahap penyatuan selepas satu minit (bukti ragu). Dianjurkan untuk mengulangi ujian atau mengesahkan dengan kaedah tiub.

Tidak ada aglutinasi (ujian negatif).

Hasil dengan SSF. Ia mesti selalu memberikan yang negatif, jika secara automatik memberi positif maka hasil ujiannya tidak sah.

-Ujian koagulase YouTube

bahan

- Tabung uji steril

-Plasma

-Bath Mary pada 37 ° C.

Teknik

Pipet 0.5 ml plasma ke dalam tabung uji 12 x 75 dengan pipet steril. Muatkan gelung platinum dengan 2 hingga 4 koloni tulen untuk belajar dari kultur padat selama 18 hingga 24 jam dan larutkan dalam plasma campurkan dengan teliti dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 4 jam.

Periksa tiub pada jam pertama tanpa menggegarkannya, condongkan perlahan-lahan. Sekiranya gumpalan masih tidak dapat dilihat, ia dapat terus diperhatikan setiap 30 minit sehingga 4 jam selesai. Sekiranya selepas 4 jam masih negatif, ia boleh dibiarkan sehingga 24 jam tetapi pada suhu bilik. Perhatikan dan laporkan hasilnya.

Berdasarkan pengalaman, beberapa ahli mikrobiologi mengesyorkan menggunakan 500 µl suspensi bakteria dari kultur 18 jam dalam medium cair untuk melakukan ujian.

Tampaknya ia menawarkan hasil yang lebih cepat dan lebih dipercayai daripada ketika mengemulsi koloni dari media padat, terutama jika plasma manusia yang diperoleh dari bank darah telah digunakan.

Penggunaan strain dari kaldu membantu mencairkan kemungkinan adanya antibodi anti-staphylococcal manusia dalam plasma yang dapat menghambat tindakan koagulase.

Tafsiran

Sekiranya pembekuan dilihat merangkumi semua cecair (pembekuan lengkap) atau gumpalan tanpa apa-apa dalam baki cairan (pembekuan separa) ia harus dianggap sebagai ujian positif.

Sekiranya tidak ada gumpalan terbentuk, iaitu penggantungannya tetap homogen, ujiannya adalah negatif.

-Coagulase test menggunakan fibrinogen

Fibrinogen digunakan sama dengan plasma dan digunakan untuk ujian slaid dan tiub. Teruskan seperti yang dijelaskan untuk plasma dan tafsirkan dengan cara yang sama.

Gunakan

Ia digunakan untuk membezakan Staphylococcus aureus dari staphylococci negatif coagulase.

QA

Mempunyai kultur segar dari strain S. aureus untuk digunakan sebagai kawalan positif. Strain S. epidermidis juga boleh didapati sebagai kawalan negatif.

Batasan

- Ujian positif tidak boleh dibiarkan dalam inkubasi selama 24 jam, kerana S. aureus menghasilkan fibrinolysin yang melarutkan gumpalan.

-Untuk ujian yang boleh dipercayai, plasma segar atau yang baru dibentuk harus digunakan, dan juga penting untuk menggunakan kultur bakteria segar (18 hingga 24 jam). Ini mengelakkan negatif palsu.

-Ujian mesti dilakukan bersama dengan kawalan negatif dan positif.

-Beberapa media pepejal boleh mengganggu ujian koagulase. Tidak digalakkan menggunakan koloni dari agar manitol masin.

-Jika plasma sitrat digunakan, disarankan meletakkan 5 unit heparin per ml plasma untuk mengelakkan positif palsu. Ini kerana beberapa mikroorganisma selain S. aureus dapat memecah sitrat dan menyebabkan plasma membeku. Dalam kes ini, disarankan untuk melakukan ujian Gram dan catalase.

-Penting, dalam ujian tabung, untuk memantau tindak balas setiap 30 minit, kerana terdapat strain S. aureus yang menghasilkan kepekatan tinggi fibrinolysin dan akan mencairkan bekuan yang baru terbentuk dengan cepat. Elakkan negatif palsu.

-Semasa memantau ujian, elakkan menggegarkan tiub secara tiba-tiba, ini dapat menghancurkan permulaan pembentukan gumpalan yang tidak akan dipulihkan kemudian, menyebabkan negatif palsu.

Rujukan

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
4. Makmal Pro-Makmal. Arnab membekukan plasma. Terdapat di: pro-lab.com
5. "Coagulase." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 12 Feb 2019, 04:23 UTC. 22 Apr 2019, 15:50 wikipedia.org.