UJIAN OKSIDASE: RASIONAL, PROSEDUR, DAN PENGGUNAANNYA - BIOLOGI - 2026

The ujian oxidase adalah kaedah diagnostik yang menunjukkan kehadiran enzim kompleks yang dipanggil cytochrome oxidase c. Sistem ini mendorong transformasi sitokrom yang dikurangkan menjadi teroksidasi, kerana ia menangkap oksigen dan ini seterusnya bertindak sebagai akseptor elektron terakhir (H ⁺ ) dalam rantai pernafasan.

Istilah oksidase adalah cara ringkas merujuk kepada enzim sitokrom oksidase, juga dikenal sebagai indofenol oksidase. Pada zaman kuno dipercayai bahawa enzim sitokrom oksidase dan indofenol oksidase adalah dua enzim yang berbeza, tetapi hari ini mereka diketahui sama.

Ujian oksidase positif dan negatif. Sumber: Tidak ada pengarang yang boleh dibaca mesin. Alpha.prim ~ commonswiki dianggap (berdasarkan tuntutan hak cipta).

Bagi mereka, sitokrom adalah hemoprotein yang mengandungi zat besi dan melengkapkan sistem sitokrom oksidase. Sitokrom boleh berbeza dari satu spesies ke spesies.

Terdapat pelbagai jenis sitokrom (sitokrom a1, a2, a3 dan 0). Sebilangan bakteria dapat menghasilkan hanya satu, tetapi yang lain hingga dua atau tiga pada satu masa. Dalam pengertian ini, kehadiran sitokrom a dan a3 dikenali sebagai sitokrom oksidase c. Ini adalah jenis sitokrom yang dikesan oleh ujian oksidase.

Generasi Neisseria dan Pseudomonas mengandungi sitokrom oksidase c. Genera ini memberikan ujian oksidase positif, membantu membezakannya dari genera Acinetobacter dan Stenotrophomonas.

Terdapat juga genera lain yang positif oksidase.

Asas

Ciri-ciri sistem sitokrom oksidase c

Sistem sitokrom oksidase berfungsi dengan cara berikut: mikroorganisma positif oksidase menggunakan oksigen untuk menghasilkan tenaga melalui pernafasan aerobik. Sistem ini berfungsi berkat pengangkutan elektron dari bahan penderma seperti NADH ⁺ ke bahan reseptor, dalam hal ini oksigen.

Ini menghasilkan pengeluaran tenaga (ATP) dan air atau hidrogen peroksida, bergantung pada sistem oksidase sitokrom yang dimiliki oleh mikroorganisma.

Itulah sebabnya sebilangan besar bakteria positif oksidase juga positif katalase, suatu syarat yang diperlukan untuk menghilangkan hidrogen peroksida yang dihasilkan, kerana bahan ini beracun kepada bakteria.

Sistem sitokrom oksidase c terdapat dalam beberapa bakteria aerobik, beberapa anaerob fakultatif, beberapa mikrobaerofilik, dan tidak ada anaerob yang ketat. Yang terakhir dapat difahami, kerana anaerob yang ketat tidak dapat hidup di hadapan oksigen, oleh itu mereka kekurangan sistem oksidase sitokrom.

Prinsip ujian

Dalam ujian ini menggunakan bahan yang bertindak sebagai akseptor elektron tiruan, menggantikan bahan semula jadi dalam rantai pengangkutan elektron.

Terutama, pewarna seperti paraphenylenediamine dan indophenol digunakan, yang bertindak sebagai substrat reseptor dan penderma elektron tiruan.

Paraphenylenediamine dioksidakan oleh sistem sitokrom oksidase c. Pewarna dalam bentuk yang dikurangkan tidak berwarna, tetapi dalam bentuk teroksidasinya berwarna.

Ini adalah bagaimana keberadaan sistem sitokrom oksidase c terbukti; kerana tindak balas positif akan menghasilkan warna lavender atau biru-ungu bergantung kepada reagen yang digunakan.

Sebaliknya, jika bahan penerimaan elektron terakhir dalam rantai pernafasan berbeza dengan oksigen, ujian oksidase akan menjadi negatif (tidak ada penghasilan warna); ini berlaku dengan mikroorganisma anaerobik.

Begitu juga, jika sitokrom yang digunakan oleh mikroorganisma berbeza dengan sitokrom oksidase c, ia juga akan memberikan ujian negatif.

Proses

Terdapat pelbagai reagen dan protokol untuk ujian oksidase, semuanya untuk tujuan yang sama.

Reagen

Reagen Kovacs, reagen Gordon dan McLeod, reagen Nadi, Carpenter, Suhrland dan reagen Morrison, dan penggunaan cakera oksidase.

Reagen oksidase Kovacs

Ia terdiri daripada 1% tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride.

Reagen Kovacs disediakan dengan melarutkan 1 g bahan yang disebutkan di atas dalam 50 ml air suling. Ia dipanaskan secara halus hingga larut sepenuhnya. Pindahkan ke botol amber dengan kapasiti yang cukup dan isi hingga 100 ml dengan air suling. Tunggu sekurang-kurangnya 15 minit sebelum menggunakan. Simpan di dalam peti sejuk yang dilindungi dari cahaya.

Ia dilabel reagen Kovacs oksidase, untuk membezakannya dari reagen Kovacs yang digunakan untuk mengungkapkan ujian indole. Reagen ini adalah yang paling sensitif, kurang toksik tetapi lebih mahal daripada reagen yang lain.

Reaksi positif akan dibuktikan dengan reagen ini dengan perubahan warna koloni menjadi lavender, yang dengan cepat berubah menjadi ungu hampir hitam. Reaksi negatif terbukti kerana tidak ada perubahan warna di koloni atau berlaku sedikit warna merah jambu. Medium juga boleh menjadi gelap, tetapi itu tidak bermaksud reaksi positif.

Dengan reagen ini, masa reaksi sangat penting, perubahan warna yang berlaku antara 5 hingga 15 saat dianggap sebagai reaksi positif.

-Gordon dan reagen McLeod

Ia terdiri daripada dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, juga dikenal sebagai N-dimethyl-p-phenylenediamine atau p-aminodimethylaniline monohydrochloride. Ia disediakan seperti yang dijelaskan untuk reagen Kovacs oksidase, menggantikan bahan yang terlibat.

Reagen ini sedikit lebih stabil daripada reagen Kovacs oxidase, walaupun semua reagen yang mengandungi p-phenylenediamine tidak stabil.

Reaksi ini kemudian, ia ditafsirkan sebagai positif dengan penampilan warna biru-ungu dalam masa 10 hingga 30 minit.

Reagen Nadi

Ia terdiri daripada 1% α-naftol dalam etil alkohol (95% etanol) dan 1% aminodimethylaniline. Campuran disediakan dalam bahagian yang sama dan menggunakan etil alkohol mutlak sebagai pelarut, hingga membentuk kuantiti yang mencukupi untuk 100 ml.

- Reagen Carenter, Suhrland dan Morrison

Ia terdiri daripada 1% p-aminodimethylalanine oxalate. Siapkan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan untuk reagen Kovacs oxidase, dengan menukar bahan yang sesuai.

Dengan larutan siap, jalur ujian disediakan seperti berikut: Jalur kertas saringan Whatman No. 1 berukuran 6-8 cm diresapi dengan 1% reagen dimetil-p-phenylenediamine oxalate.

Mereka dibiarkan kering tanpa bersentuhan dengan logam, simpan dalam balang tutup skru dengan pengering dan simpan di dalam peti sejuk. Jalur ini stabil sehingga 6 bulan.

Ini adalah reagen paling stabil dari semua yang disebutkan, dan boleh bertahan sehingga 6 bulan dalam penyelesaian. Titik tambah lain ialah ia tidak mewarnai medium di sekitar jajahan, jika digunakan secara langsung di atas pinggan.

Penampilan warna merah ditafsirkan sebagai ujian positif.

-Cakera oksidase

Mereka adalah cakera komersial yang diresapi dengan reagen untuk ujian oksidase. Terdapat beberapa jenama komersial di pasaran.

Penggunaannya cukup praktikal, kerana tidak perlu menyediakan reagen segar, yang memudahkan kerja. Hasil yang diperoleh boleh dipercayai selagi cakera disimpan dengan betul.

Protokol

Kaedah plat langsung, kaedah tidak langsung di atas kertas dan penggunaan cakera yang diresapi dengan reagen oksidase.

- Kaedah papan langsung

2 atau 3 tetes mana-mana reagen yang disebutkan di atas ditambahkan untuk tujuan ini secara langsung pada koloni yang terdapat dalam piring media kultur yang tidak mengandungi glukosa.

Perubahan atau tidaknya warna koloni ditafsirkan, bukan dari medium. Masa tindak balas yang sah bergantung pada reagen yang digunakan.

-Kaedah tidak langsung di atas kertas

Potong sekeping kertas turas (Whatman No. 1) hingga ukuran 6 cm ² dan letakkan di dalam piring Petri kosong.

Tambahkan 2 atau 3 tetes reagen Kovacs oksidase ke kertas, ambil bahagian koloni untuk dikaji dengan pemegang platinum atau tusuk gigi kayu dan sebarkannya dalam garis lurus pada kertas yang diresapi reagen. Tafsirkan dalam 5 hingga 10 saat.

Dengan jalur yang disediakan dengan reagen Carpenter, Suhrland dan Morrison, koloni tersebar di jalur kering. Jalur tunggal digunakan untuk menguji beberapa regangan. Tafsirkan dalam 10 saat.

-Disk (m

Lembabkan cakera komersial secara halus dengan air suling steril dan tumpangkan pada koloni untuk dikaji. Dianjurkan untuk menggunakan pelat pada suhu 35 ° C, jika pinggan pada suhu bilik atau plat sejuk digunakan, reaksi sedikit lebih perlahan. Tafsirkan perubahan warna antara 10 hingga 20 saat.

Koloni yang terdapat pada darah atau agar coklat boleh digunakan.

-Disk (kaedah tidak langsung)

Basahkan cakera seperti yang dijelaskan sebelumnya. Letakkannya di dalam piring Petri kosong. Ambil jumlah koloni yang mencukupi untuk belajar dengan pemegang platinum atau tusuk gigi kayu dan letakkan di cakera. Tafsirkan perubahan warna antara 10 hingga 20 saat.

Gunakan

Genus Neisseria dan Acinetobacter kadang-kadang sangat serupa secara morfologi kerana walaupun genus Acinetobacter adalah batang Gram-negatif, kadangkala dapat mengambil bentuk coccoid dan diedarkan secara berpasangan, mensimulasikan genus Neisseria.

Dalam kes ini, ujian oksidase sangat berguna. Genus Neisseria positif dan Acinetobacter negatif.

Walau bagaimanapun, genus Moraxella sangat mirip dengan genus Neisseria dan kedua-duanya memberikan reaksi positif; Inilah sebabnya mengapa ujian penapaian karbohidrat mesti selalu dilakukan untuk mengenal pasti pasti.

Sebaliknya, ujian oksidase berguna untuk membezakan bakteria yang tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae (semua oksidase negatif) dari fermenter lain, seperti genus Pasteurella, Aeromonas, Plesiomonas (oksidase positif).

Genus Vibrio dan Helicobacter juga positif oksidase.

QA

Gunakan strain Escherichia coli yang diketahui sebagai kawalan negatif dan strain Pseudomonas aeruginosa sebagai kawalan positif.

Batasan

-Ragen mesti digunakan yang baru disiapkan, jangka hayatnya dalam larutan pada suhu bilik adalah pendek kerana sangat tidak stabil. Sejuk boleh bertahan antara 5 hari hingga 2 minggu.

Reagen tidak berwarna, jika berubah warna, ia mesti dibuang. Cakera yang rosak muncul kerana ia semakin gelap dari masa ke masa.

-Tindak balas positif dengan reagen Kovacs oksidase antara 15-60 saat dianggap sebagai tindak balas yang tertunda dan setelah 60 saat ia harus dianggap negatif.

-Haemophylus influenzae memberikan reaksi oksidase negatif jika ada reagen dengan dimetil-p-phenylenediamine, tetapi positif jika reagen Kovacs oxidase (tetramethyl-p-phenylenediamine) digunakan.

-Medium yang mengandungi glukosa mengganggu ujian, memberikan negatif palsu.

-Bordetella pertussis strain dapat memberikan reaksi positif yang salah jika berasal dari plat agar darah yang sangat pekat.

-Penggunaan logam (besi) memberikan reaksi positif yang salah.

cadangan

-Kerana reagen sangat tidak stabil dan cenderung mengoksidasi sendiri, disarankan untuk membekukan aliquot 1 hingga 2 ml dan membuangnya sesuai keperluan.

-Cara lain untuk melambatkan pengoksidaan auto reagen adalah dengan menambahkan asid askorbik 0.1% semasa menyediakan reagen.

- Oleh kerana reagen tidak stabil, kawalan kualiti mingguan disyorkan.

-Ragen yang tidak lulus ujian kawalan kualiti tidak boleh digunakan.

Rujukan

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. "Ujian Oksidase." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 15 Jan 2018, 10:32 UTC. 3 Apr 2019, 14:03
4. Pertubuhan Kesihatan Dunia. Manual Makmal untuk Pengenalpastian dan Pengujian Kerentanan Antimikrobial Patogen Bakteria Kepentingan Kesihatan Awam di Dunia Membangun. Terdapat di: who.int/drugresistance/infosharing
5. Jalur reagen untuk diagnosis aktiviti oksidase pada bakteria. Rev Cubana Med Trop. 2000; 52 (2): 150-151.