TINDAK BALAS XANTHOPROTEIN: RASIONAL, PROSEDUR, PENGGUNAAN - KIMIA - 2025

The reaksi xanthoprotein adalah prosedur kimia yang digunakan untuk menentukan kehadiran atau ketiadaan asid amino aromatik, seperti tyrosine dan tryptophan, yang boleh dalam bentuk bebas atau merupakan protein larut, peptida atau polypeptides.

Ia juga digunakan untuk mengesan bahan toksik dalam darah yang mengandungi kumpulan benzena dalam strukturnya. Ujian ini juga dikenali sebagai tindak balas xanthoprotein Becher.

Tindak balas xanthoprotein positif Sumber: Diambil dari video: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Tindak balas xanthoprotein menggunakan asid nitrik pekat, haba, dan alkali peneutralan. Sekiranya larutan bertukar dari kuning ke oren setelah meneutralkan tindak balas, ujian dianggap positif. Pewarnaan yang diperhatikan disebabkan oleh pembentukan sebatian nitrogen yang berasal dari nitrifikasi kumpulan benzena.

Sekiranya jumlah protein total perlu diukur, perlu menggunakan kaedah penentuan protein lain, seperti Biuret.

Reaksi xanthoprotein digunakan terutamanya ketika bahan dianalisis yang komposisi kimianya tidak diketahui. Reaksi ini biasanya merupakan sebahagian daripada satu set ujian yang akan membantu menentukan komposisi kimia bahan atau ekstrak tertentu. Itulah sebabnya ia digunakan secara meluas oleh penyelidik.

Sebaliknya, reaksi xanthoprotein Becher digunakan untuk mengesan zat fenolik dan indol dalam darah, memungkinkan untuk meramalkan penampilan nefropati, sebelum parameter lain yang lain meningkat.

Asas

Reaksi pada dasarnya mengesan kehadiran kumpulan benzena, baik dalam asid amino, serta protein dan peptida. Asid nitrik bertindak pada cincin benzena asid amino yang memilikinya, membentuk sebatian fenolik nitro.

Tindak balas memerlukan haba untuk dilakukan, umumnya endapan terbentuk yang mendung medium, menjadikannya susu. Endapan boleh berwarna putih atau kuning. Akhirnya, ia memerlukan langkah alkali yang menonjolkan warna. Untuk ini, asas seperti natrium hidroksida 40% atau amonia digunakan.

Tindak balas akan ditafsirkan sebagai positif jika pewarnaan kuning yang kuat diperhatikan semasa proses pemanasan atau oren gelap ketika reaksi alkali. Asid amino yang dikesannya terutamanya tirosin dan triptofan.

Tindak balas Xanthoprotein. Sumber: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

Dalam kes fenilalanin, walaupun merupakan asid amino aromatik, nukleus benzena asid amino ini sukar dinitratkan dalam reaksi sederhana, oleh itu, ia akan memancarkan reaksi positif negatif atau lemah.

Secara umum, ujian xanthoprotein dapat ditambah dengan ujian Hopkins-Cole, yang digunakan untuk mengenal pasti triptofan secara khusus. Sekiranya ujian xanthoprotein positif dan ujian Hopkins-Cole adalah negatif, kehadiran tryptophan dalam larutan tersebut tidak dapat disangkal, menunjukkan adanya terutamanya tirosin. Begitu juga, ia juga dapat dilengkapi dengan reaksi Millon untuk mengesan tirosin, antara lain.

Reaksi ini juga dapat digunakan pada sampel darah, plasma atau serum desalbuminated untuk diagnosis uremia atau gagal ginjal. Dalam kes ini, yang dicari adalah pengesanan bahan toksik (fenolik dan indol) yang dihasilkan dari pembusukan usus.

Bahan-bahan ini mempunyai kumpulan benzena dan karenanya memberikan reaksi xanthoprotein positif, walaupun bahan yang bertindak balas itu bukan asam amino atau protein.

Proses

- Tindak balas Xanthoprotein untuk pengesanan asid amino dengan kumpulan aromatik

Letakkan 1 ml sampel ujian ke dalam tabung uji yang bersih dan kering.

-Masukkan 0.5 ml asid nitrik pekat.

-Masukkan campuran dalam air mandi pada suhu 70 ° C selama 2 minit. Sebelum ini sediakan mandian air pada suhu yang disebutkan.

-Semasa mengeluarkan tiub dari mandian air, dapat diperhatikan bahawa larutan tersebut telah menjadi susu dan telah mengambil warna putih kekuningan.

-Penyelesaiannya disejukkan dengan menjatuhkan air sejuk di dasar tiub.

-Penyediaannya dibuat beralkali dengan perlahan-lahan menambahkan (setetes demi setitik) larutan natrium hidroksida 40% sehingga ada perubahan warna.

-Jika ujian positif, cincin berwarna oren gelap akan terbentuk di antara muka cecair.

-Jika reaksi negatif, tidak akan ada pembentukan warna.

- Tindak balas Xanthoprotein untuk mengesan zat fenolik dan indol dalam darah

- Membuang 5 cc 20% asid trikloroasetik pada 5 cc darah vena, plasma atau serum, yang terakhir adalah yang paling banyak ditunjukkan. Gaul rata dan tapis.

-Ambil 2 ml filtrat dan campurkan dengan 0.5 ml asid nitrik. Kemudian dipanaskan hingga mendidih, untuk ini tiub diletakkan terus di atas api yang lebih ringan selama 30 saat. Ia disejukkan dengan air dan 1.5 dari 33% natrium klorida ditambahkan.

Ia ditafsirkan sebagai berikut:

-Hasil negatif: warna kekuningan.

-Positif (+) hasil kuning lemon.

- (++) kuning keemasan.

- (+++) kuning tua hingga coklat

Ia juga dapat ditafsirkan menggunakan skala kolorimetri Autenrieth referensi, yang terdiri daripada pelbagai kepekatan kalium dikromat. Ini disediakan dalam 10 dalam 10 pencairan dari larutan stok 0.03874%. Setiap tiub mewakili peratusan.

Skala pentafsiran

Terdapat dua skala penafsiran yang disebut kuno dan moden. Nilai normal adalah:

Jadual lama: antara 75 hingga 85%

Jadual moden: antara 15 hingga 25%

Sekiranya warna tabung uji berada di tengah-tengah dua tabung standard, kedua-dua ukuran adalah rata-rata.

Penyelesaian standard kalium dikromat disediakan seperti berikut: 7.9 ml kalium dikromat 10 N diukur dan dibuat hingga 100 ml dalam termos volumetrik. Pencairan diikuti seperti yang ditunjukkan dalam jadual kolorimetri Autenrieth.

Jadual kolorimetri autenrieth. Sumber: Tindak balas Vásquez A. Xanthoprotein. Jurnal klinikal Sepanyol. 1949; 35 (5): 326-327. Terdapat di: Elsevier

Gunakan

Penggunaan tindak balas xanthoprotein adalah sebahagian daripada satu set ujian biokimia yang membantu mengetahui komposisi kimia beberapa bahan yang tidak diketahui. Ujian ini menyumbang kepada analisis kimia pengesanan protein yang mengandungi kumpulan benzena dalam strukturnya.

Reaksi ini banyak digunakan oleh penyelidik dalam pelbagai kajian mengenai bahan yang diminati.

Dalam pengertian ini, Vásquez-Jorge dan kolaborator menggunakan ini dan reaksi lain untuk menyiasat kandungan protein cecair yang diekstrak dari tiram bakau (Crassostrea rhizophorae).

Begitu juga, Rojas dan kolaborator (2009) menggunakan serangkaian ujian, di antaranya ialah tindak balas xanthoprotein, untuk menganalisis glikomakropeptida dalam endapan ricotta whey.

Sebaliknya, reaksi xanthoprotein Becher diubahsuai oleh Volhard untuk digunakan untuk tujuan lain. Dalam kes ini, untuk pengesanan zat fenolik dan indol yang boleh meningkat lebih awal (minggu atau bulan) sebelum tahap urea dan nitrogen sisa dalam darah meningkat.

Sisa toksik ini terbentuk dari pembusukan makanan dalam usus.

Bahan-bahan ini terkumpul di dalam darah apabila tidak disingkirkan dengan betul, oleh itu, ujian xanthoprotein positif dapat meramalkan permulaan awal kegagalan ginjal dengan betul atau keadaan uremia.

Bergantung pada intensiti warna, anda dapat menentukan seberapa maju. Dalam kes ini ujian adalah kuantitatif.

Pada orang yang sihat ujian ini memberikan sedikit warna kuning, sesuai dengan tahap normal triptofan dan tirosin yang mungkin ada di dalam darah.

Sementara itu, pada pesakit ginjal reaksi xanthoprotein sangat positif kerana adanya bahan berikut: fenol, indol, paracresol, oksidat aromatik, antara lain.

Langkah berjaga-berjaga

Ujian ini mesti dilakukan oleh profesional terlatih. Semua peraturan biosafety mesti dipertimbangkan, kerana reagen yang digunakan adalah asid dan basa yang menghakis.

Sekiranya secara tidak sengaja beberapa tetes asid nitrat jatuh pada kulit atau pada kuku, ia akan menjadi kuning, kerana kedua-dua struktur mengandungi protein. Selain itu, pada kulit dan selaput lendir menyebabkan luka bakar yang teruk.

Sekiranya sentuhan kulit berlaku, protokol yang harus diikuti adalah mencuci kawasan tersebut dengan sabun dan air dengan segera selama lebih kurang 20 minit.

Sekiranya terpercik ke mata, ia mesti dicuci dengan banyak air tawar, berusaha agar mata tetap terbuka.

Rujukan

1. "Reaksi Xanthoprotein" Wikipedia, Ensiklopedia Bebas. 2 Sep 2019, 17:49 UTC. 21 Okt 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Pencirian fizikokimia dan kandungan protein ekstrak cecair tiram bakau (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Terdapat di Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Pengasingan dan prestasi GMP dengan pemendakan whey dengan asid trikloroasetik. Cient. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Terdapat di: ve.scielo.
4. Tindak balas Vásquez A. Xanthoprotein. Jurnal klinikal Sepanyol. 1949; 35 (5): 326-327. Terdapat di: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Reaksi Becher dan Andrewes dalam pembedahan kencing. Perkhidmatan Urologi Hospital Sepanyol. Jurnal urologi Argentina 395-404