Rose Bengal adalah ujian makmal berdasarkan reaksi antigen-antibodi untuk diagnosis brucellosis. Teknik ini membolehkan pengesanan antibodi spesifik terhadap bakteria Brucella abortus pada sampel serum manusia. Hasilnya dapat dilaporkan secara kualitatif atau semi-kuantitatif.
Bentuk kualitatif menyatakan sama ada pesakit positif atau negatif untuk ujian, iaitu sama ada terdapat antibodi atau tidak. Sementara itu, laporan semi-kuantitatif dilaporkan dalam IU / ml dan menunjukkan anggaran jumlah antibodi yang ada. Perlu diperhatikan bahawa antibodi hanya akan dihasilkan jika pesakit bersentuhan dengan mikroorganisma.
Tindak balas Rose Bengal dalam plat aglutinasi. Sumber: diambil dari video https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Kerana kesederhanaan, kepekaan dan kekhususan yang tinggi, ini adalah salah satu teknik seroaglutinasi yang paling banyak digunakan dalam perubatan sebagai ujian awal untuk diagnosis penyakit ini.
Sebilangan penyelidik membandingkan keberkesanan ujian Rose Bengal dengan teknik lain, seperti seroagglutination (antigen demam) dan telah memerhatikan bahawa walaupun ada korelasi yang baik, mereka melihat kes terpencil di mana ujian antigen demam adalah negatif dan Rose de Suar positif
Perbezaan yang diperoleh adalah disebabkan oleh fakta bahawa pesakit ini mempunyai subkelas antibodi IgG terhadap Brucella abortus dengan daya pengikat yang lebih baik pada pH berasid, oleh itu mereka dapat bertindak balas dengan reagen Rose Bengal tetapi tidak dengan antigen demam.
Dalam pengertian ini, mereka telah menyarankan agar reagen teknik antigen demam diubah menjadi pH berasid sehingga mereka dapat mengesan jenis kes ini.
Asas
Reagen Rose Bengal terdiri daripada suspensi antigenik. Ia terdiri daripada strain S99 dari Brucella abortus, diencerkan dalam penyangga laktat berasid (pH 3.6), ditambah fenol dan pewarna Rose Bengal.
Oleh itu, dalam sampel yang dicari adalah antibodi anti-Brucella, jika ada, mereka akan bertindak balas dengan antigen reagen dan reaksi aglutinasi yang dapat dilihat secara makroskopik. Ujian tersebut mengesan sama ada antibodi IgM atau antibodi IgG.
Ini bermaksud bahawa ia dapat mengesan penyakit baik pada tahap akut di mana antibodi IgM berlaku atau pada tahap kroniknya di mana antibodi IgG mendominasi.
Ini menunjukkan kelebihan kerana meningkatkan kepekaan ujian, tetapi pada masa yang sama adalah kelemahan kerana tidak membedakan antara satu tahap dengan tahap yang lain, kerana reaksi dengan antibodi IgM dan IgG adalah serupa.
Ujian mesti selalu dilakukan bersama dengan kawalan negatif dan kawalan positif. Kontrol negatif mengandungi serum haiwan tanpa antibodi dan kawalan positif mengandungi serum asal haiwan dengan 50 IU / ml antibodi anti-Brucella.
Gunakan
Brucellosis adalah penyakit serius yang cenderung kronik dan berbahaya, jadi sangat penting untuk didiagnosis lebih awal. Ini adalah zoonosis dan manusia dapat dijangkiti dengan kontak langsung dengan bahan yang tercemar, orang yang paling rentan adalah doktor haiwan dan penjaga haiwan.
Jangkitan juga boleh berlaku dengan memakan daging mentah yang dijangkiti, antara lain bentuk jangkitan.
Penyakit ini menyerang secara tempatan atau sistematik. Bentuk sistemik adalah yang paling serius, kerana pelbagai organ boleh terjejas, termasuk sistem endotel retikulum (hati, limpa, sumsum tulang), kulit (selulitis dan limfadenopati), sistem pernafasan (radang paru-paru), sistem muskuloskeletal (arthritis, sacroiliitis dan spondylitis), antara lain.
Ujian Rose Bengal adalah teknik yang sangat berguna untuk melakukan pemeriksaan awal, kerana sangat murah, mudah digunakan, dan memiliki kekhususan dan kepekaan yang luar biasa.
Kes negatif negatif dan positif palsu sangat jarang berlaku, dan boleh berlaku pada orang dengan kadar antibodi yang sangat rendah (<25 IU / ml) atau sangat tinggi (> 1000 IU / ml) masing-masing.
Proses
bahan
-Rose Bengal Kit
Latar belakang putih plat agregasi
-50 µl pipet
-Rotator (pilihan)
-Vorteks
Teknik (kaedah kualitatif)
Kit Rose Bengal komersial dilengkapi dengan reagen yang siap digunakan.
-Memperbaiki reagen sebelum mula berfungsi.
-Piring aglutinasi dilukis bulatan, masing-masing untuk sampel yang berbeza. Gunakan 3 bulatan, yang pertama untuk kawalan negatif, yang kedua untuk sampel, dan yang ketiga untuk kawalan positif.
-Tempatkan tetes atau 50 µl kawalan dan sampel dalam bulatan yang sesuai.
-Campurkan reagen Rose Bengal menggunakan pusaran. Letakkan setetes di sebelah yang diletakkan sebelumnya.
-Campurkan dengan tusuk gigi kayu (gunakan satu untuk setiap spesimen atau kawalan). Lakukan gerakan bulat dan ratakan sehingga anda menutupi seluruh bulatan.
Sumber: gambar yang diambil dari Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Susun atur gambar yang diedit.
-Letakkan plat pada rotator automatik pada 80 hingga 100 RPM atau putar secara manual selama 4 minit. Baca buktinya pada akhir masa ini.
-Sahkan bahawa kawalan memberi seperti yang diharapkan. Bandingkan reaksi sampel ujian dengan kawalan. Laporkan positif jika aglutinasi diperhatikan dan negatif jika tidak ada penyatuan.
Ujian positif menunjukkan bahawa pesakit mempunyai jumlah yang sama atau lebih besar daripada 25 IU / ml antibodi anti-Brucella.
Tafsiran reaksi positif (dengan aglutinasi) dan negatif (tanpa pengagregatan). Sumber: Citrulline. Gambar yang diedit.
Teknik (separuh kuantitatif)
Sekiranya dalam tindak balas kualitatif sampel sangat positif, ia boleh dikira secara separa. Untuk ini, pengenceran ganda bersiri sampel dibuat dengan larutan garam fisiologi. Prosedur yang dijelaskan sebelumnya dijalankan dengan setiap pencairan.
Ia juga ditafsirkan dengan memerhatikan penggabungan secara makroskopik. Hasilnya akan menjadi titik pencairan tertinggi di mana hasil positif diperhatikan.
Untuk mengira nilai anggaran antibodi anti-Brucella, formula berikut digunakan:
25 IU / ml x titer tindak balas = IU / ml
Contohnya, jika pesakit dalam ujian separa kuantitatif menguji positif pada pencairan ½, ¼ dan 1/8 dan mula negatif dari pencairan 1/16 dan seterusnya, ini bermakna pesakit mempunyai titer 8 .
Menggunakan formula:
25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml
QA
-Kak mempunyai tarikh luput dan mesti dipatuhi. Tidak boleh digunakan jika reagen telah habis masa berlakunya.
-Semasa digunakan, pastikan reagen tidak mengandungi zarah pepejal, kerana ini adalah tanda kemerosotan.
-Jauhkan antara 2 hingga 8 ° C.
-Jangan membeku, tindakan ini merosakkan reagen secara tidak langsung.
-Sentiasa menjalankan ujian bersama dengan kawalan negatif dan positif.
-Teknik ini mentolerir sampel serum dengan tahap lipemia dan hemolisis tertentu, namun tidak digalakkan menggunakan sera lipemik dan hemolisis yang berlebihan, kedua-dua keadaan mengubah keputusan ujian.
-Sentiasa membawa reagen ke suhu bilik sebelum memulakan analisis.
-Jangan menafsirkan reaksi yang mengambil masa yang lebih lama daripada waktu yang disyorkan, kerana ini menghasilkan laporan positif palsu, kerana setelah waktu tertentu reagen memicu, mensimulasikan reaksi positif.
-Teknik ini sensitif 100% dan mempunyai kekhususan 98%.
-Setelah semi-kuantifikasi 1000 IU / ml ada kemungkinan memerhatikan kesan prozon (negatif palsu kerana kelebihan antibodi berbanding dengan jumlah antigen).
Rujukan
- Rubio M, Barrio B dan Díaz R. Nilai ujian Rosa de Bengala, Coombs dan counter-immunoelectrophoresis untuk mendiagnosis kes-kes brucellosis manusia di mana penggabungan serum adalah negatif. Jabatan Mikrobiologi. Perkhidmatan Mikrobiologi Klinikal. Klinik Universiti. Universiti Navarra. 406-407. Terdapat di: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucellosis." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 6 Dis 2019, 14:37 UTC. 18 Dis 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Makmal Monlab. Monlab Bengal Rose - ujian. 2016. Terdapat di: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Pendeta Peru. Med. Exp. Kesihatan Awam 1997; 14 (1): 63-66. Terdapat di: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Susulan tindak balas rantai klinikal, serologi dan polimerase keluarga yang mengalami brucellosis. Pendeta chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Terdapat di: scielo.conicyt.