SAFRANIN: CIRI, PENGGUNAAN, TEKNIK, KETOKSIKAN - KIMIA - 2026

The safranin adalah pewarna meriquinoide, yang dinamakan bagi struktur kimianya mempunyai dua cincin benzenoid dan 2 cincin quinoid, yang terakhir merupakan mereka yang menyediakan warna merah.

Ia juga disebut dimetil safranin atau merah asas 2 dalam bentuk pendeknya, kerana nama saintifiknya adalah 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-phenyl-phenaziniumchloro dimethyl safranin dan formula kimianya adalah C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Struktur kimia safranin yang menunjukkan cincin benzenoid dan quinoid / Larutan berair safranin. Sumber: NEUROtiker disunting oleh MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Terdapat varian yang disebut trimethyl-safranin tetapi tidak ada perbezaan yang signifikan antara kedua zat tersebut.

Safranin adalah pewarna monokromatik dan, bergantung pada ciri formula kimia, adalah bahan bermuatan positif. Oleh itu, ia mempunyai pertalian untuk struktur bercas negatif. Struktur ini akan berwarna merah.

Properti ini memberikan penerapannya dalam banyak teknik histologi untuk mengotorkan pelbagai struktur selular, baik dari organisma eukariotik maupun prokariotik.

Safranin digunakan sebagai pewarna kontras dalam teknik penting dan terkenal untuk penggunaan rutin dalam bakteriologi. Teknik-teknik ini adalah: noda Gram-Hucker, noda Schaeffer Fulton untuk spora atau pewarnaan kapsul bakteria, antara lain.

ciri-ciri

Warna safron (rempah yang diperoleh dari stigma bunga Crocus sativus) adalah inspirasi untuk menamakan pewarna ini. Dari istilah safron muncul nama safranin. Ini disebabkan oleh persamaan besar antara warna safron dan pewarna yang disediakan oleh pewarna ini.

Safranin boleh didapati sebagai kristal atau serbuk, yang mana kedua-duanya boleh larut dalam air. Pewarna safranin tidak berbau. Noda struktur berwarna merah. Struktur yang menarik pewarna safranin disebut safranofil.

Safranin secara struktural kompleks, ia mempunyai dua cincin benzenoid di hujungnya dan di tengahnya terdapat dua cincin quinoid di mana kation N ⁺ dijumpai . Bahagian tengah struktur adalah sistem yang bertugas memberikan warna. Oleh kerana ciri ini, pewarna ini tergolong dalam kategori II.

Gunakan

Safranin digunakan untuk mengotorkan pelbagai struktur. Terutama menonjolkan sel-sel Kulchitsky yang terdapat di saluran gastrointestinal, juga disebut sel enterokromafin.

Ia mampu mengotorkan mikroorganisma yang tergolong dalam keluarga Rickettsiaceae. Begitu juga, ia digunakan dalam pelbagai teknik, seperti kaedah Koster, yang diubahsuai digunakan untuk mengotorkan bakteria genus Brucella.

Sebaliknya, safranin digunakan dalam teknik pewarnaan spora Schaeffer Fulton dan pewarnaan Gram-Hucker. Dalam kedua teknik tersebut, safranin berfungsi sebagai pewarna kontras.

Pada yang pertama, spora mengambil warna hijau malachite dan selebihnya struktur berwarna merah oleh safranin. Pada yang kedua, bakteria Gram negatif kehilangan warna kristal ungu pada langkah perubahan warna, oleh itu safranin adalah bakteria Gram negatif yang merah.

Selain itu, safranin digunakan dalam bakteriologi untuk menyediakan media agar Brucella dengan pencairan safranin 1: 5000. Medium ini berfungsi untuk membezakan spesies Brucella suis dari spesies lain. Brucella melitensis dan Brucella abortus tumbuh pada medium ini tetapi B. suis dihambat.

Di bidang pertanian industri, safranin telah digunakan pada 2,25% dan dicairkan 1:10 untuk mengotorkan sampel batang tanaman tebu.

Tumbuhan ini biasanya dijangkiti oleh bakteria Leifsonia xyli subsp. xyli, yang merosakkan xilem tumbuhan. Batang yang diberi noda dinilai untuk menentukan fungsi saluran xilem.

Teknik dalam bidang bakteriologi

Noda Castaeda untuk pewarnaan

Darah atau tisu smear diletakkan dalam larutan penyangga (fosfat buffer pH 7.6). Biarkan kering secara spontan dan kemudian tutup dengan metilena biru selama 3 minit dan timbulkan dengan safranin. Rickettsiae berwarna biru, berbeza dengan latar belakang merah.

Noda Koster diubah suai untuk

Smear dibuat dan dinyalakan dalam korek api untuk diperbaiki. Selepas itu, ia ditutup dengan campuran 2 bahagian safranin berair tepu dengan 3 bahagian larutan KOH 1 mol / L, selama 1 minit. Pencucian dilakukan dengan air suling dan dikira dengan warna metilena biru karbol 1%.

Sekiranya sampel mengandungi bakteria genus Brucella, mereka akan kelihatan oren pada latar belakang biru.

Pewarnaan kapsul bakteria

Campuran suspensi bakteria dibuat dengan dakwat India dan safranin ditambahkan. Di bawah mikroskop, halo kemerahan akan muncul di sekitar setiap kapsul bakteria dengan latar belakang hitam.

Pewarnaan spora

Penyebaran dibuat dengan penggantungan bakteria. Kemudian ia tetap menjadi panas. Ia ditutup dengan hijau malachite 5%, sering menyala hingga mengeluarkan wap. Proses diulang selama 6-10 minit. Akhirnya, ia dibasuh dengan air dan dikira dengan 0,5% safranin selama 30 saat. Noda bacilli berwarna merah dan spora berwarna hijau.

Noda Gram-Hucker

Smear dibuat dengan penggantungan bakteria dan tetap panas. Tutup slaid dengan kristal ungu selama 1 minit. Kemudian lugol diletakkan sebagai larutan mordant selama 1 minit. Selepas itu, ia dilunturkan dengan alkohol aseton dan akhirnya diwarnai dengan safranin selama 30 saat.

Bakteria gram positif mengotorkan ungu kebiruan dan bakteria negatif Gram berwarna merah.

Beberapa makmal telah berhenti menggunakan teknik Gram-Hucker untuk menggunakan teknik Gram-Kopeloff yang diubah suai. Pada yang terakhir, safranin digantikan oleh fuchsin asas. Ini kerana safranin mengotorkan spesies genera Legionella, Campylobacter dan Brucella dengan lemah.

Teknik dalam bidang histologi

Pewarnaan sel Kulchitsky (enterokromafin)

Bahagian tisu dari saluran gastrointestinal diwarnai dengan perak klorida. Ia kemudian diwarnai dengan natrium tiosulfat dan akhirnya diwarnai dengan safranin.

Sel-sel Kulchitsky dibezakan dengan adanya butiran coklat kehitaman.

Noda Osteoartritis

Kerana safranin mempunyai muatan positif, ia mengikat dengan sangat baik kepada kumpulan karboksil dan sulfat glikosaminoglikan. Ini adalah sebahagian daripada proteoglikan yang membentuk tulang rawan artikular. Dalam pengertian ini, ketika mewarnai dengan safranin O, adalah mungkin untuk mengenal pasti ada atau tidaknya kehilangan tulang rawan.

Kehilangan tisu tulang rawan dapat diukur menggunakan skala Mankin atau disebut juga skala osteoartritis.

Teknik ini dijelaskan di bawah: bahagian histologi direndam dalam dulang dengan larutan hematoksilin besi Weigert, kemudian disalurkan melalui alkohol asid dan dibasuh dengan air.

Teruskan proses pewarnaan dengan merendam lembaran dengan warna hijau cepat, ia dibasuh dengan asid asetik dan sekarang ia direndam dalam safranin O. Untuk menyelesaikan prosesnya, ia dilembabkan menggunakan alkohol pada kepekatan yang berbeza dalam urutan menaik. Langkah terakhir memerlukan xylene atau xylene agar sampel diperjelaskan.

Slaid dikondisikan dengan balsam Kanada atau serupa untuk diperhatikan di bawah mikroskop.

Dengan teknik ini, inti berwarna hitam, tulang hijau dan tulang rawan di mana proteoglikan didapati berwarna merah.

Noda untuk mengenal pasti makroalga

Pérez et al pada tahun 2003 mencadangkan teknik yang mudah dan murah untuk mewarnai makroalga. Sampel disediakan dalam bahagian histologi parafin. Bahagian tersebut diperbaiki dengan gliserin 1%, sehingga kering sepenuhnya. Ia kemudian dimasukkan ke dalam xylol untuk menghilangkan parafin.

Bahagian tersebut dihidrasi semula dengan melewati rangkaian dulang yang mengandungi etanol dalam darjah kepekatan yang berbeza (urutan menurun), masing-masing selama 2 minit.

Selepas itu, ia diwarnai selama 5 minit dengan campuran 3: 1 safranin 1% dengan 1% toluidin biru, kedua-duanya disiapkan dengan 50% etanol. Tiga tetes asid picik ditambahkan ke dalam campuran, yang bertindak sebagai mordant.

Kemudian dinyahhidrasi dengan melewati dulang alkohol sekali lagi, tetapi kali ini dengan cara menaik. Akhirnya, ia dibilas dengan xylol dan sampel disediakan dengan balsam Kanada untuk diperhatikan.

Ketoksikan

Nasib baik, safranin adalah pewarna yang tidak mewakili bahaya bagi mereka yang mengatasinya. Ia adalah pewarna yang tidak berbahaya, tidak karsinogenik dan tidak mudah terbakar.

Sentuhan langsung dengan kulit atau mukosa boleh menyebabkan sedikit kemerahan di kawasan ini, tanpa komplikasi besar. Untuk ini, disyorkan untuk mencuci kawasan yang terjejas dengan banyak air.

Rujukan

1. García H. Colorante safranina O. Juruteknik dalam kesihatan, 2012; 1 (2): 83-85. Terdapat di: medigraphic.com
2. Gil M. Gram noda: asas, bahan, teknik dan kegunaan. 2019. Tersedia di: lifeder.com
3. Gil M. Spore pewarnaan: rasional, teknik dan penggunaan. 2019. Tersedia di: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 7 Mac 2017, 10:39 UTC. 3 Ogos 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Teknik pewarnaan yang berguna dalam penafsiran anatomi Gracilariopsis tenuifrons dan Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Bertindak Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Terdapat di: scielo.org.
6. Gereja Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Hubungan fungsi saluran xilem dan kehadiran Leifsonia xyli subsp. xyli. Perlindungan Veg Rev. 2007; 22 (1): 65-65. Terdapat di: scielo.sld