UJIAN VOGES-PROSKAUER: ASAS, PENYEDIAAN DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2024

Ujian Voges-Proskauer adalah ujian biokimia yang digunakan untuk membantu mengenal pasti bakteria yang tergolong dalam keluarga Enterobacteriaceae. Ia sangat berguna untuk membezakan strain Escherichia coli dari Klebsiella dan Enterobacter, antara lain.

Ujian dilakukan dalam medium kultur cair yang disebut Methyl Red - Voges Proskauer, yang lebih dikenali dengan singkatan RM / VP. Medium ini terdiri daripada buffer polipepton, glukosa, dipotassium fosfat, dan air suling.

Uji medium / VP komersial Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) masing-masing positif dan negatif. Sumber: Foto yang diambil oleh pengarang MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, dari Wikimedia Commons

Medium RM / VP semasa adalah pengubahsuaian medium Clark dan Lubs, yang pada asalnya mengandungi kepekatan pepton dan glukosa yang lebih rendah. Oleh itu, kurang ion hidrogen, yang diperlukan untuk reaksi positif Voges-Proskauer, dihasilkan.

Ujian ini berdasarkan kemampuan mikroorganisma menggunakan glukosa melalui laluan butilena-glikol, dan membentuk produk akhir yang netral yang disebut asetin, dengan adanya oksigen dan pH alkali.

Dalam medium RM / VP, selain dapat mendedahkan ujian Voges-Proskauer, ujian metil merah juga dapat dinyatakan.

Asas

Asas ujian Voges-Proskauer

Pluripepton yang terdapat dalam medium menyediakan keperluan pemakanan penting untuk pertumbuhan bakteria. Sebaliknya, glukosa adalah sebatian utama. Banyak bakteria mempunyai kemampuan untuk memetabolisme glukosa dan membentuk asid piruvik.

Asid piruvik adalah titik tengah dalam metabolisme glukosa dan dari situ setiap mikroorganisma dapat menempuh jalan yang berbeza. Sebahagiannya akan membentuk asid campuran, seperti asid laktik, asid asetik, asid formik, dan asid succinic, dan yang lain akan membentuk produk neutral seperti 2,3-butanediol.

Ujian Voges-Proskauer menunjukkan kemampuan mikroorganisma untuk membentuk asetil metil karbinol (asetin), produk perantaraan 2,3-butanediol dalam keadaan aerobik.

Acetoin dikurangkan dan membentuk 2,3-butanediol, tetapi tindak balas ini dapat diterbalikkan, oleh itu jika 2,3-butanediol dioksidasi, asetin terbentuk. Oleh itu, oksigen sangat penting.

Dipotassium fosfat adalah buffer yang menambat campuran pada pH 6.9 ± 0.2.

Dasar pendedahan dan tafsiran bukti

Untuk menunjukkan reaksi, pengembangan mesti dilakukan dengan menggunakan dua reagen (reagen Barrit), yang dikenali sebagai Voges A dan Voges B.

Voges A adalah larutan α-naphthol 5%, dan Voges B adalah penyediaan kalium hidroksida 40%. Sekiranya kalium hidroksida tidak tersedia, ia boleh diganti dengan 40% natrium hidroksida.

Α-Naphthol adalah pemangkin yang akan meningkatkan intensiti warna tindak balas, menjadikan ujian lebih sensitif. Α-naphthol mesti selalu ditambahkan terlebih dahulu, menggegarkan tiub sehingga medium bersentuhan dengan oksigen. Dengan cara ini asetin yang ada dioksidakan menjadi diasetil, dan 2,3-butanediol dioksidakan untuk membentuk asetin, meneruskannya ke diasetil.

Ini adalah bagaimana α-naphthol akan mengikat pada diasetil, yang pada gilirannya telah bergabung dengan nukleus guanidine yang terdapat dalam arginin asid amino, yang terakhir berasal dari pluripeptones.

Sebahagiannya, kalium atau natrium hidroksida bertanggungjawab menyerap CO ₂ dan bertindak balas dengan pepton. Tindak balas ini menyebabkan pembentukan warna merah jambu salmon, dapat dilihat dengan jelas setelah menggoncangkan tiub dengan sangat baik.

Jumlah diacetyl, peptone, dan α-naphthol yang betul mesti dicampurkan agar warna berlaku serta-merta. Sekiranya ini tidak berlaku, tiub dibiarkan berehat selama 15 minit sebelum menafsirkan.

Ujian biasanya positif selepas 2 hingga 5 minit, apabila warna merah jambu samar dapat dilihat. Sekiranya dibiarkan selama 30 minit hingga 1 jam, intensiti warnanya akan maksimum (merah pekat).

Ujian negatif akan muncul apabila kuahnya menjadi kuning. Selepas 1 jam, jika ujiannya negatif, warna tembaga dapat terbentuk akibat reaksi kalium hidroksida pada α-naftol.

Penyediaan

MR / VP sederhana

Timbang 17 g medium kultur dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Biarkan selama 5 minit. Panaskan hingga mendidih hingga larut sepenuhnya. Hidangkan 3 hingga 4 ml dalam tiub dan sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.

Medium kultur dehidrasi berwarna kuning air dan medium yang disiapkan berwarna kuning muda.

PH akhir medium ialah 6.9 ± 0.2.

Reagen Voges

Timbang 5 g α-naftol dan larutkan dalam 50 ml etil alkohol (mutlak). Kemudian teruskan menambahkan etil alkohol sehingga mencapai 100 ml.

Reagen Voges B

Timbang 40 g kalium hidroksida dan larutkan dalam 50 ml air suling dalam bikar. Gelas mesti diletakkan di dalam tab mandi air dingin untuk mengawal suhunya, kerana ketika penyediaan larut, suhu meningkat dengan mendadak.

Setelah larutan sejuk, ia dipindahkan ke termos volumetrik dan diisi hingga 100 mL dengan air suling.

Prosedur ujian Voges-Proskauer

Untuk melakukan ujian Voges-Proskauer, kaldu RM / VP diinokulasi dengan mikroorganisma yang dikaji, dari budaya murni selama 18 hingga 24 jam.

Inokulum tidak boleh sangat padat. Ia diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam, walaupun pengeraman selama beberapa hari kadang-kadang diperlukan. Cowan dan Steel berpendapat bahawa 5 hari adalah masa inkubasi minimum yang diperlukan untuk mengesan semua spesies Voges-Proskauer (VP) positif dari keluarga Enterobacteriaceae.

Pembangunan ujian

Pisahkan aliquot 1 mL ke dalam tiub dan kembangkan seperti berikut: Letakkan 12 tetes (0,6 mL) reagen Voges A dan 4 tetes (0,2 mL) Voges B. Campurkan untuk mengudar dan biarkan mendidih selama 5 - 10 minit sebelum membuat interpretasi. Namun, jika ujian masih negatif, biarkan dan diamkan tiub selepas 30 minit hingga 1 jam.

Penampilan warna merah jambu menunjukkan bahawa reaksi Voges-Proskauer positif. Sekiranya medium kekal kuning reaksi negatif.

Menambah pembangun mengikut urutan dan kuantiti yang ditunjukkan adalah mustahak untuk mengelakkan negatif palsu.

Gunakan

Ujian Voges-Proskauer berguna untuk membezakan antara strain E. coli yang negatif VP, dari genera Klebsiella, Enterobacter, Serratia, antara lain, yang positif VP.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Strain kawalan boleh digunakan untuk menguji kualiti medium yang disediakan, termasuk Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium dan Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Hasil yang diharapkan adalah reaksi positif Voges-Proskauer hanya untuk K. pneumoniae dan E. cloacae. Selebihnya memberikan reaksi negatif.

Rujukan

1. Makmal Britannia. MR-VP Medium. 2015. Terdapat di: www.britanialab.com
2. Makmal Microkit. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Terdapat: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Ujian biokimia untuk mengenal pasti bakteria yang mempunyai kepentingan klinikal. Edisi ke-3. Panamericana editorial. Buenos Aires. Argentina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.