NODA GIEMSA: RASIONAL, BAHAN, TEKNIK DAN KEGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The Giemsa noda adalah sejenis pewarna sampel klinikal, berdasarkan campuran pewarna asid dan asas. Penciptaannya diilhamkan oleh karya yang dilakukan oleh Romanowsky, di mana Gustav Giemsa, seorang ahli kimia dan ahli bakteriologi yang berasal dari Jerman, menyempurnakannya dengan menambahkan gliserol untuk menstabilkan sebatian.

Perubahan yang dihasilkan pada teknik Romanowsky yang asli memungkinkan untuk meningkatkan pemerhatian mikroskopik, oleh itu teknik ini dibaptis dengan nama noda Giemsa.

Pelbagai sampel diwarnai dengan noda Giemsa. A. Trypanosoma evansi dalam darah periferal. B. Sel darah normal. C. Borrelia theileri dalam darah periferal. D. Limfoma Burkitt.

Oleh kerana ia adalah teknik yang mudah untuk dilakukan, sangat berfungsi dan ekonomik, kini digunakan secara meluas di makmal klinikal untuk hematologi smear, sampel sumsum tulang dan bahagian tisu.

Teknik pewarnaan Giemsa sangat berguna untuk kajian sitologi, kerana memungkinkan pemerhatian struktur sel tertentu. Teknik ini mengotorkan sitoplasma, inti, nukleoli, vakuola dan butiran sel, sehingga dapat membezakan jejak kromatin yang halus.

Selanjutnya, perubahan ketara dalam ukuran, bentuk atau pewarnaan inti dapat dikesan, di mana mungkin untuk menggambarkan kehilangan hubungan inti-sitoplasma.

Sebaliknya, ia memungkinkan untuk mengenal pasti sel-sel yang belum matang dalam sumsum tulang dan darah periferal, yang penting untuk diagnosis penyakit serius seperti leukemia. Juga mungkin untuk mengesan hemoparasit, bakteria tambahan dan intraselular, kulat, antara lain.

Dalam sitogenetik digunakan secara meluas, kerana mungkin untuk mengkaji mitosis sel.

Asas pewarnaan Giemsa

Pewarna jenis Romanowsky didasarkan pada penggunaan kontras antara pewarna berasid dan asas, untuk mencapai pewarnaan struktur asas dan asid masing-masing. Seperti yang dapat dilihat, terdapat pertalian pewarna asid untuk mengotorkan struktur asas dan sebaliknya.

Pewarna asas yang digunakan adalah metilena biru dan turunannya yang teroksidasi (Azure A dan Azure B), sementara pewarna asid adalah eosin.

Struktur asid sel adalah asid nukleik, butiran basofil yang tersegmentasi, antara lain, oleh itu ia akan diwarnai dengan metilena biru.

Dalam pengertian yang sama, struktur asas sel adalah hemoglobin dan beberapa butiran seperti yang terdapat dalam eosinofil tersegmentasi, antara lain; ini akan diwarnai dengan eosin.

Sebaliknya, kerana hakikat bahawa metilena biru dan biru dicirikan sebagai pewarna metakromatik, mereka dapat memberikan warna yang berubah-ubah ke struktur yang berbeza mengikut beban polianion yang mereka miliki.

Ini adalah bagaimana gabungan strategi pewarna asas dan asid berjaya mengembangkan spektrum warna yang luas, sesuai dengan ciri-ciri biokimia setiap struktur, berjalan melalui warna biru pucat, biru tua, ungu dan ungu dalam hal struktur asid.

Walaupun pewarnaan yang disediakan oleh eosin lebih stabil, menghasilkan warna antara oren kemerahan dan salmon.

bahan

Bahan untuk menyediakan penyelesaian stok

Penyediaan larutan stok memerlukan berat 600 mg noda Giemsa serbuk, berukuran 500 cc metil alkohol bebas aseton dan 50 cc gliserin neutral.

Cara menyediakan penyelesaian stok

Letakkan serbuk Giemsa yang berat di dalam lesung. Sekiranya terdapat gumpalan, ia harus disembur. Selepas itu tambahkan jumlah gliserin yang diukur dan campurkan dengan baik. Campuran yang diperoleh dicurahkan ke dalam botol ambar yang sangat bersih.

Selebihnya gliserin diletakkan di dalam mortar. Campurkan lagi untuk membersihkan sisa pewarna yang telah menempel pada dinding mortar dan tuangkan ke dalam balang yang sama.

Botol ditutup dan diletakkan di tempat mandi air pada suhu 55ºC selama 2 jam. Semasa mandi air, kocok perlahan-lahan campuran setiap setengah jam atau lebih.

Selepas itu, campuran dibiarkan sejuk untuk meletakkan alkohol. Sebelumnya, sebahagian alkohol yang diukur diletakkan di dalam mortar untuk menyelesaikan pencucian pewarna yang tinggal dan kemudian ditambahkan ke campuran bersama dengan alkohol yang lain.

Penyediaan ini harus dibiarkan sehingga matang sekurang-kurangnya 2 minggu. Bahagian larutan stok yang digunakan harus ditapis.

Untuk mengelakkan pencemaran penyediaan, disarankan untuk memindahkan bahagian yang akan digunakan terus ke botol ambar kecil dengan penitis. Isi semula setiap kali reagen habis.

Bahan untuk menyediakan penyelesaian Buffer

Sebaliknya, larutan penyangga pada pH 7.2 disediakan seperti berikut:

6.77 g natrium fosfat (anhidrat) (NaHPO ₄ ), 2.59 g kalium dihidrogen fosfat (KH ₂ PO ₄ ) dan air suling ditimbang hingga 1000 cc.

Penyediaan akhir pewarna

Untuk penyediaan larutan pewarnaan akhir, 2 ml larutan stok yang disaring diukur dan dicampurkan dengan 6 ml larutan penyangga. Kacau campuran.

Fakta yang relevan yang mesti diambil kira adalah bahawa teknik penyediaan pewarnaan dapat berubah bergantung pada syarikat komersial.

Bahan tambahan diperlukan untuk melakukan pewarnaan

Selain daripada bahan yang dijelaskan, anda mesti mempunyai jambatan pewarna, t-shirt dengan air atau penyangga untuk mencuci, slaid objek atau penutup untuk objek, jam randik untuk mengawal masa pewarnaan dan kertas blotting atau beberapa bahan yang boleh digunakan untuk mengeringkan ( kain kasa atau kapas).

Teknik

Proses pewarnaan

1) Sebelum pewarnaan, smear sampel mesti siap pada slaid yang bersih.

Sampel boleh berupa darah, sumsum tulang, bahagian tisu histologi atau sampel serviks-vagina. Sebaiknya penyebarannya tipis dan pengeringan selama 1 atau 2 jam sebelum mewarnai.

2) Di jambatan pewarna, letakkan semua kepingan yang harus diwarnai. Anda selalu bekerja mengikut urutan yang sama dan setiap helaian dikenal pasti dengan baik.

3) Letakkan beberapa tetes metil alkohol 100% (metanol) pada smear dan biarkan ia bertindak selama 3 hingga 5 minit, untuk memperbaiki dan mengeringkan sampel.

4) Buang metanol yang ada di atas kepingan dan biarkan kering.

5) Setelah kering, letakkan larutan pewarnaan terakhir dengan penitis hingga seluruh kepingan ditutup. Biarkan bertindak selama 15 minit. Sebilangan pengarang mencadangkan masa sehingga 25 min. Itu bergantung pada rumah perniagaan.

6) Tiriskan noda dan basuh noda dengan air suling atau dengan larutan penyangga 7.2.

7) Pada kertas pelekap, biarkan lembaran kering di udara terbuka, disusun secara menegak dengan bantuan sokongan.

8) Bersihkan bahagian belakang slaid dengan swab alkohol atau kapas untuk menghilangkan kesan noda.

Utiliti

Teknik pewarnaan Giemsa digunakan dalam berbagai bidang, antaranya: hematologi, mikologi, bakteriologi, parasitologi, sitologi dan sitogenetik.

Hematologi

Ini adalah penggunaan yang paling kerap diberikan pada noda ini. Dengan itu, setiap sel yang terdapat dalam sumsum tulang atau sampel darah periferal dapat dikenal pasti. Serta menganggarkan bilangan setiap siri, dapat mengesan leukositosis atau leukopenia, trombositopenia, dll.

Kerana sensitif dalam mengenal pasti sel-sel yang belum matang, relevan dalam diagnosis leukemia akut atau kronik. Juga memungkinkan untuk membuat diagnosis anemia, seperti anemia sel sabit, sel sabit, antara lain.

Mikologi

Di kawasan ini, penggunaannya adalah umum untuk mencari Histoplasma capsulatum (kulat dimorfik intraselular) pada sampel tisu.

Bakteriologi

Pada smear hematologi yang diwarnai dengan Giemsa, adalah mungkin untuk mengesan Borrelias sp pada pasien yang menderita penyakit yang disebut demam berulang. Spirochetes banyak terdapat di antara eritrosit, dalam sampel yang diambil pada puncak demam.

Juga dapat membayangkan bakteria intraselular seperti Rickettsia sp dan Chlamydia trachomatis pada sel yang dijangkiti.

parasitologi

Dalam bidang parasitologi, pewarnaan Giemsa memungkinkan untuk mendiagnosis penyakit parasit seperti malaria, penyakit Chagas dan leishmaniasis.

Pada dua yang pertama, parasit Plasmodium sp dan Trypanosoma cruzi masing-masing dapat dilihat pada darah periferi pesakit yang dijangkiti, mereka dapat dijumpai dalam tahap yang berbeza bergantung pada tahap penyakit.

Untuk meningkatkan pencarian parasit dalam darah, disarankan untuk menggunakan noda Giemsa yang dicampur dengan noda May-Grünwald.

Begitu juga, leishmaniasis kulit boleh didiagnosis dengan menilai sampel biopsi kulit yang berwarna-warni Giemsa di mana parasit dijumpai.

Sitologi

Pewarnaan Giemsa juga digunakan untuk kajian sitologi sampel endoserviks, walaupun bukan teknik yang paling sering digunakan untuk tujuan ini.

Tetapi dalam kes kekurangan sumber daya dapat digunakan, memiliki fungsi yang serupa dengan yang ditawarkan oleh teknik Papanicolaou dan dengan biaya yang lebih rendah. Namun, ia memerlukan kepakaran dari pihak pemeriksa.

Sitogenetik

Ciri yang relevan dari pewarnaan Giemsa adalah kemampuannya untuk mengikat kuat dengan kawasan DNA yang kaya dengan adenin dan timin. Ini membolehkan DNA dilihat semasa mitosis sel, dalam keadaan pemeluwapan yang berbeza.

Kajian-kajian ini diperlukan untuk mengesan penyimpangan kromatik seperti pendua, penghapusan atau translokasi dari pelbagai kawasan kromosom.

Penyelidikan menunjukkan keberkesanan pewarnaan Giemsa

Cannova et al (2016), membandingkan 3 teknik pewarnaan untuk diagnosis leishmaniasis kulit.

Untuk ini, mereka menggunakan sampel yang diperoleh dari haiwan eksperimen (Mesocrisetus auratus) yang diinokulasi dengan Leishmanias.

Penulis menunjukkan bahawa noda Giemsa lebih baik daripada noda Pap-mart® dan Gaffney. Oleh itu, mereka menganggap noda Giemsa sangat sesuai untuk mendiagnosis leishmaniasis kulit.

Hasil yang sangat baik yang diperoleh oleh penulis adalah kerana gabungan pewarna yang membentuk campuran Giemsa memberikan syarat yang diperlukan untuk mewujudkan kontras yang baik, yang membolehkan struktur amastigot dapat dibezakan dengan jelas, baik intra maupun ekstraselular.

Teknik lain (Pap-mart® dan Gaffney) melakukannya juga, tetapi dengan cara yang lebih lemah dan oleh itu lebih sukar untuk dilihat. Itulah sebabnya mengapa noda Giemsa disyorkan untuk diagnosis parasitologi leishmaniasis.

Begitu juga, kajian oleh Ramírez et al (1994) menilai kesahan noda Giemsa dan Lendrum dalam smear konjungtiva untuk mengenal pasti Chlamydia trachomatis.

Penulis menentukan bahawa noda Giemsa dan Ledrum mempunyai kekhususan yang sama, tetapi Giemsa didapati lebih sensitif.

Ini menjelaskan mengapa noda Giemsa saat ini paling sering digunakan untuk diagnosis jangkitan klamidia, terutama jika terdapat sedikit sumber.

Sumber: Reagen PanReac Applichem ITW. Noda Giemsa. Versi 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Sepanyol.

Cadangan untuk pewarnaan yang baik

Pengeringan cadar tidak boleh dipercepat. Jangka masa yang mencukupi mesti dijangkakan untuk mengeringkannya di udara terbuka. Lebih kurang 2 jam.

Warnakan segera selepas 2 jam untuk hasil terbaik.

Agar smear dapat diperbaiki dan noda lebih baik, sampel mesti diedarkan pada slaid sedemikian rupa sehingga lapisan nipis dan seragam tetap ada.

Sampel darah yang disukai adalah kapilari, kerana smear dibuat secara langsung dari titisan darah dan oleh itu sampel tidak mengandungi bahan tambahan, yang menyokong pemeliharaan struktur sel.

Namun, jika darah vena digunakan, EDTA harus digunakan sebagai antikoagulan dan bukan heparin, kerana heparin biasanya merusak sel.

Kesalahan biasa dalam pewarnaan Giemsa

Dalam praktik pewarnaan ini kesalahan boleh dilakukan. Mereka dibuktikan dengan perubahan mendadak dalam nada struktur.

Pewarna biru yang sangat

Ia mungkin disebabkan oleh:

• Smear yang sangat tebal
• Melebihi masa pewarnaan
• Cuci dengan tidak mencukupi.
• Penggunaan reagen di atas pH neutral (alkali).

Di bawah keadaan ini warna struktur berikut diputarbelitkan, sedemikian rupa sehingga eritrosit dan bukannya berwarna merah jambu salmon akan kelihatan hijau, butiran eosinofil yang mesti berwarna merah bata akan berubah menjadi kebiruan atau kelabu dan seterusnya akan ada penyimpangan dalam nada biasa.

Pewarnaan merah jambu yang luar biasa

Ia mungkin disebabkan oleh:

• Masa pewarnaan tidak mencukupi.
• Mencuci yang berpanjangan atau berlebihan.
• Pengeringan yang teruk.
• Penggunaan reagen yang sangat berasid.

Dalam kes ini, struktur yang biasanya berwarna biru tidak akan hampir kelihatan, sementara struktur yang berwarna noda merah jambu akan mempunyai warna yang berlebihan.

Contoh: Sel darah merah akan berubah menjadi merah terang atau oren terang, kromatin nuklear akan kelihatan merah jambu pucat, dan butiran eosinofil akan berwarna merah terang.

Kehadiran mendakan dalam smear

Sebabnya boleh:

• Gunakan filem kotor atau tidak dicuci dengan teruk.
• Jangan biarkan smear kering dengan baik.
• Meninggalkan penyelesaian penetapan terlalu lama.
• Pencucian yang tidak mencukupi pada akhir pewarnaan.
• Penapisan yang tidak mencukupi atau tiada penapisan pewarna yang digunakan.

Kehadiran artifak morfologi

Artefak morfologi mungkin muncul dalam bentuk smear, sehingga sukar untuk menggambarkan dan menafsirkan struktur yang ada. Ini adalah kerana:

• Jenis antikoagulan yang digunakan, seperti heparin.
• Penggunaan filem kotor, merosot atau berminyak.

Mod simpanan

Selepas penyediaan, pewarna mesti disimpan pada suhu bilik (15 - 25 ° C), untuk mengelakkan pewarna mendapan. Ia mesti disimpan dalam bekas ambar yang tertutup rapat.

Rujukan

1. Cannova D, Brito E dan Simons M. Penilaian teknik pewarnaan untuk diagnosis Leishmaniasis kulit. Salus. 2016; 20 (2): 24-29.
2. Reagen PanReac Applichem ITW. Noda Giemsa. Versi 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Sepanyol.
3. Prosedur pewarnaan Clark G. (1981), ke-4. Williams & Willkins.
4. Kimia Klinikal Gunaan. Pewarnaan Giemsa untuk diagnostik in vitro. Pengedar: cromakit.es
5. Ramírez I, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F dan Grazioso C. Kesahan noda Giemsa dan Lendrum dalam smear konjungtiva untuk pengenalan Chlamydia trachomatis. Bol Sanit Panam. 1994; 116 (3): 212-216.
6. Casas-Rincón G. Mikologi Umum. 1994. Edisi ke-2, Central University of Venezuela, Edisi Perpustakaan. Venezuela Caracas.
7. "Noda Giemsa." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 1 Sep 2017, 01:02 UTC. 6 Dis 2018, es.wikipedia.org.