PEWARNAAN HEMATOXYLIN-EOSIN: CIRI, KEGUNAAN, TEKNIK - KIMIA - 2026

The hematoxylin - eosin adalah teknik pewarnaan menggunakan gabungan hematoxylin pewarna dan eosin. Sepasang pewarna ini menjadikan duo sempurna, kerana hematoxylin bertindak sebagai pewarna asas dan eosin adalah pewarna asid.

Penunjukan pewarna asas atau asid tidak merujuk pada pH yang diperoleh dalam larutan, melainkan berbicara mengenai perkadaran yang berlaku dari segi caj anionik atau kationik yang mereka miliki atau berdasarkan lokasi kumpulan kromofor.

Hematoxylin - eposel kolumnar bersisik eosin (HE) Sumber: Todd Straus dan Vladimir Osipov

Dalam pengertian ini, hematoxylin dianggap sebagai pewarna asas (kationik) dan oleh itu mempunyai pertalian untuk struktur asid, seperti inti sel. Walaupun eosin, sebagai pewarna asid (anionik), mempunyai kaitan dengan struktur alkali atau asas, seperti sitoplasma sel.

Atas sebab ini, gabungan pewarna ini banyak digunakan untuk pewarnaan tisu, kerana ia membolehkan inti dan sitoplasma dapat dibezakan dengan jelas. Nukleus berwarna biru tua atau ungu dan sitoplasma berwarna merah jambu.

Pewarnaan hematoxylin-eosin adalah salah satu teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan dalam bidang histologi dan sitologi, kerana pengendaliannya yang mudah dan kosnya rendah. Ia digunakan untuk memvisualisasikan sel, serat saraf tebal dan kehadiran mikroorganisma tertentu dalam tisu, seperti: parasit, kulat dan bakteria, antara lain.

ciri-ciri

Hematoksilin

Hematoxylin adalah pewarna neutral. Walau bagaimanapun, komponen yang memberikan warna (kromofor) terletak di pusat kationik atau asas molekul. Oleh itu pertaliannya dengan struktur asid. Formula kimianya adalah C ₁₆ H ₁₄ O ₆ dan nama saintifiknya ialah 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Ini terutama mengotorkan inti sel, kerana mereka sangat kaya dengan asid nukleik. Ia juga dapat mengotorkan sitoplasma yang berasal dari virus.

Agar hematoxylin ternoda, ia mesti berada dalam keadaan teroksidasi dan terikat pada logam. Yang terakhir akan berfungsi untuk melekat pada tisu, iaitu, ia akan bertindak sebagai mordant.

Apabila hematoxylin dioksidasi ia dipanggil hematein. Pengoksidaan dicapai dengan pendedahan kepada oksigen (penuaan) reagen atau oleh bahan yang membantu pengoksidaannya (pengoksidaan kimia).

Eosin

Eosin adalah pewarna yang berwarna merah atau merah jambu. Tidak larut dalam air walaupun ada versi larut dalam air. Secara amnya, eosin disediakan dengan larut dalam alkohol (95 ° etanol).

Ia mengotorkan sitoplasma, serat otot, organel sitoplasma, dan kolagen, tetapi tidak mengotorkan inti sel. Ini kerana ia bercas negatif, oleh itu, ia mempunyai pertalian untuk struktur bermuatan positif.

Terdapat dua jenis eosin "Y" dan "B". Eosin "Y" dikenali sebagai eosin kuning. Nama saintifiknya adalah tetrabromofluorescein dan formula kimianya ialah C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Sebaliknya, eosin "B" kadang-kadang disebut eritrosin B kebiruan. Nama saintifiknya adalah dibromodynitro fluorescein dan rumusnya ialah C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Kedua-duanya sangat serupa dan perbezaan antara penggunaan satu atau yang lain tidak begitu ketara. Walau bagaimanapun, yang paling popular ialah eosin "Y".

Eosin mempunyai sifat membezakan antara sel hidup dan sel mati, kerana ia hanya mampu melintasi membran untuk mengotorkan sitoplasma ketika sel mati, meninggalkan sitoplasma sel tidak berwarna jika ia masih hidup.

Permohonan

Pewarnaan serat saraf

Serat saraf tebal boleh diwarnai dan dikenal pasti dengan hematoxylin-eosin. Walau bagaimanapun, ia tidak berguna untuk mengotorkan gentian saraf nipis, kerana pewarnaan perak diperlukan untuk menggambarkan yang terakhir.

Noda bahagian kulit histologi

Dalam pewarnaan lapisan kulit yang terangsang, pewarna yang bertindak adalah eosin, kerana pada tahap ini sel tidak memiliki inti.

Pada lapisan butiran kulit, hematoxylin dengan kuat mengotorkan butiran keratohyalin di dalam sel granul. Sebaliknya, lapisan kulit berputar lemah bernoda dengan hematoksilin, sementara lapisan basal atau germinal cukup bernoda.

Eosin mengotorkan sitoplasma semua sel dan intensiti warnanya boleh berbeza-beza dari satu lapisan ke lapisan yang lain.

Hematoxylin-eosin pewarnaan sampel najis

Gómez et al., Pada tahun 2005 menunjukkan bahawa pewarnaan hematoxylin-eosin lebih berkesan dalam mengenal pasti kes amoebiasis kerana Entamoeba histolytica dan Entamoeba berbeza daripada kaedah visualisasi segar (saline dan lugol) pada pesakit dengan penyakit diare akut.

Ia juga terbukti sangat sensitif dalam mengesan eritrofagositosis (amuba yang menelan eritrosit).

Pewarnaan bahagian histologi untuk diagnosis jangkitan

Walwyn et al., Pada tahun 2004 mencadangkan penggunaan noda histologi untuk mengesan mikroorganisma penyebab jangkitan.

Dengan menggunakan pewarnaan hematoxylin-eosin, mereka dapat memvisualisasikan jangkitan yang disebabkan oleh Clostridium, Actinomyces, spirillae atau Candida. Mereka juga dapat melihat kehadiran parasit Sarcoptes escabiei di bahagian kulit dan kemasukan virus oleh sitomegalovirus dan herpes di bahagian pelbagai tisu.

Teknik

Untuk sampel histologi

Pewarnaan bahagian histologi melalui beberapa langkah. Perkara pertama adalah mendapatkan bahagian histologi. Ini mesti dililin untuk mendapatkan potongan kemudian (ultra-halus) dengan mikrotom. Teknik ini terdiri daripada langkah-langkah berikut:

1-Penghapusan kelebihan parafin : untuk ini anda boleh menggunakan xylol atau Heme-D, rendam selama 3-5 minit.

2-Rehidrasi sampel: ini dicapai dengan merendam sampel dalam kepekatan alkohol yang berbeza (etanol) dalam urutan menurun (100 °, 90 °, 70 °). Dalam semua kes selama 7 minit.

3-Penghapusan berlebihan alkohol: untuk ini direndam dalam air selama 7 minit.

4-Pewarnaan dengan hematoxylin: sampel direndam selama 6-10 minit di dalam dulang yang mengandungi hematoxylin. Masa pendedahan bergantung pada ukuran dan ketebalan sampel.

5-Penghapusan berlebihan hematoksilin: ia dibasuh dengan air selama 5 minit dan kemudian jalan cepat (10-20 saat) dilakukan melalui alkohol asid. Kemudian dicuci dengan air lagi selama 5 minit. Kemudian direndam dalam etanol pada suhu 96 ° selama 1 minit.

6-Pewarnaan dengan eosin: untuk ini, sampel direndam selama 5 minit di dalam dulang eosin.

7-Dehidrasi sampel : untuk melakukan ini, ia melalui dulang alkohol (etanol), tetapi kali ini dalam urutan menaik. (70 °, 90 °, 100 °). (Selama 5 saat, 5 saat, 1 minit masing-masing).

8-Klarifikasi sampel : untuk ini, ia terdedah kepada xylol selama 5-10 minit dan dikeringkan untuk ditutup secara kekal dengan balsam Kanada atau bahan lain yang serupa.

Untuk sampel najis yang mencari

Smear dibuat pada slaid dengan najis pesakit dan diperbaiki dengan alkohol 80% selama 5 minit. Lapisan itu direndam dalam hematoxylin selama 5 minit dan segera dibasuh dengan air.

Selepas itu, ia cepat direndam dalam alkohol berasid dan kemudian di dalam air ammonia. Ia dibasuh dengan air. Ia diwarnakan selama 5 minit dalam eosin. Sampel tersebut dihidrasi seperti yang dijelaskan dalam seni sebelumnya dan akhirnya dibilas dengan xilena.

Penyediaan reagen

- Hematoxylin

Dalam satu liter air suling larutkan 50 gram kalium atau ammonium aluminium sulfat. Apabila larut sepenuhnya, tambahkan 1 gram hematoxylin yang dikristal. Apabila larut sepenuhnya, 1 g asid sitrik ditambahkan bersama dengan 50 g klorida hidrat dan 0.2 g natrium iodat.

Campuran direbus selama 5 minit, kemudian dibiarkan sejuk dan disaring untuk mengeluarkan zarah pepejal yang tinggal. Reagen yang disediakan boleh digunakan dengan segera.

- Eosin

Ia boleh disediakan dengan asas alkohol atau dengan dasar air.

Eosin alkohol

Dalam 100 ml etanol pada 95 ° larutkan 0,5 gram eosin "Y". Kemudian masukkan beberapa tetes asid asetik glasier.

2% eosin berair

Dalam 1250 ml air suling larutkan 25 gram eosin larut dalam air "Y". Kemudian masukkan beberapa tetes asid asetik glasier.

Alkohol asid

Ukur 0.5 ml asid hidroklorik pekat dan buat hingga 100 ml dengan alkohol mutlak.

Air amonia

Ukur 0.5 mL ammonia pekat dan buat hingga 100 mL dengan air suling.

Rujukan

1. Navarrete, G. Histologi kulit. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Terdapat di: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Pengenalan Entamoeba histolytica / E. Ketidaksesuaian dengan teknik amuba segar berbanding pewarnaannya dengan hematoxylin-eosin pada cirit-birit akut. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Terdapat di: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Kegunaan teknik histologi untuk diagnosis jangkitan pada spesimen anatomi. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Terdapat di: scielo.sld
5. Reagen PanReac AppliChem ITW. Pewarnaan hematoxylin-eosin. 2017, Sepanyol. Terdapat di: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 7 Nov 2018, 08:18 UTC. 4 Ogos 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoksilin." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 3 Mei 2019, 11:23 UTC. 4 Ogos 2019, 22:48 wikipedia.org