PEWARNAAN KINYOUN: RASIONAL DAN TEKNIK - BIOLOGI - 2025

The Kinyoun pewarnaan adalah teknik pewarnaan digunakan untuk bakteria noda dan parasit alkohol asid tahan. Ia lahir dari pengubahsuaian pewarnaan Ziehl-Neelsen; Kedua-dua teknik ditafsirkan dengan cara yang sama tetapi berbeza dalam dua elemen: dalam penyediaan reagen utama dan teknik Kinyoun tidak menggunakan haba.

Atas sebab ini ia juga dikenali sebagai noda sejuk Ziehl-Neelsen atau Kinyoun yang diubahsuai dengan sejuk. Ia ditunjukkan untuk pewarnaan Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atypical mycobacteria, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris dan Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum bernoda dengan noda Kinyoun. Punlop Anusonpornperm, dari Wikimedia Commons

Perlu diingat bahawa Nocardia bernoda lemah dengan teknik ini kerana sebahagiannya tahan asid-alkohol, jadi untuk gen ini terdapat pengubahsuaian metodologi.

Pada gilirannya, teknik Kinyoun sejuk telah digabungkan dengan teknik trikrom yang diubah suai oleh Didier untuk mengesan coccidia (Cryptosporidium parvum dan Isospora belli) dan spora mikrosporidia (Enterocytozoon bieneusi dan Encephalitozoon usus).

Asas

Reagen pewarnaan utama adalah carbolfuchsin atau carbol fuchsin, yang mempunyai sifat mengikat asid karbol dalam dinding sel lilin kaya lemak (asid mikolik) mikobakteria dan parasit tertentu.

Ikatan ini tidak dilawan oleh peluntur asid; oleh itu, mikroorganisma ditakrifkan sebagai cepat asid.

Tidak seperti teknik Ziehl-Neelsen-yang memperbaiki pewarna melalui haba-, dalam teknik Kinyoun langkah ini tidak diperlukan, kerana larutan karbolaik fuchsin yang disediakan untuk teknik ini mengandungi kepekatan fenol yang tinggi.

Phenol melarutkan bahan lipid di dinding sel, membiarkan pewarna carbolfuchsin masuk. Selepas pewarna menembusi, ia tetap tetap walaupun asid alkohol dicuci.

Dengan cara ini, mikroorganisma cepat asid mengambil ciri warna merah, sementara semua yang tidak cepat asid menjadi berubah warna dan berwarna biru.

Teknik

bahan

- Carbol fuchsin yang diubah suai.

- Alkohol-asid.

- Metilena biru.

Penyediaan Kinyoun carbol fuchsin

- Fuchsin asas: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Air suling: 100 ml.

Fuchsin asas harus dilarutkan dengan perlahan dalam alkohol, mencampurkan secara berterusan. Selepas itu, fenol yang dihablurkan cair dalam mandi air pada suhu 56 ° C. Setelah larut, 8 ml ditambahkan ke dalam larutan fuchsin yang disediakan di atas.

Penyediaan asid-alkohol

- Asid hidroklorik pekat: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Ia mesti diukur, bergabung dan dicampur.

Penyediaan pewarna kontras biru metilena

- Biru metilena: 0.3 g.

- Air suling: 100 ml.

Ia ditimbang dan dilarutkan.

Teknik pewarnaan Kinyoun

1- Siapkan smear secara langsung dari sampel, yang boleh berupa dahak, cecair paru-paru, sedimen air kencing, cecair serebrospinal atau tinja, antara lain; atau dari penggantungan mikroorganisma yang diperoleh dari koloni tulen yang dikembangkan dalam media budaya primer.

2- Betulkan smear dengan api.

3- Letakkan smear di jambatan pewarnaan dan tutup dengan reagen Kinyoun carbol fuchsin yang telah disediakan. Biarkan berehat selama 3 hingga 5 minit.

4- Basuh dengan air suling.

5- Pemutih dengan alkohol berasid selama 3 minit dan basuh lagi dengan air suling.

6- Pemutih sekali lagi dengan alkohol asid selama 1 atau 2 minit sehingga tidak ada lagi pewarna.

7- Basuh dengan air suling dan biarkan mengalir, meletakkan slaid pada kedudukan menegak.

8- Tutup sediaan dengan metilena biru dan biarkan selama 4 minit.

9- Basuh dengan air suling dan biarkan kering.

10- Kaji pada suhu 40X dan kemudian pada suhu 100X.

Untuk memperbaiki dan mempercepat pewarnaan mikroorganisma cepat asid, tambahkan 1 tetes agen pembasah (seperti Tergitol No. 7) ke 30 atau 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Beberapa makmal menukar pewarna biru metilena menjadi hijau terang atau asid picik; yang pertama memberikan warna hijau pada latar belakang dan yang kedua menghasilkan warna kuning.

Teknik Kinyoun Khas untuk Nocardias

Untuk memperbaiki pewarnaan bakteria genus Nocardia, pengubahsuaian noda Kinyoun digunakan. Tekniknya adalah seperti berikut:

1- Tutup smear dengan Kinyoun carbol fuchsin selama 3 minit.

2- Basuh dengan air suling.

3- Warnai sebentar dengan alkohol asid yang disediakan pada kadar 3% sehingga tidak ada lagi pewarna.

4- Basuh lagi dengan air suling.

5- Tutup sediaan dengan metilena biru dan biarkan selama 30 saat.

6- Basuh dengan air suling dan biarkan kering.

Teknik gabungan karbol fuchsin dan trichrome yang diubah suai oleh Didier

Teknik ini disyorkan untuk menganalisis sampel tinja untuk spora coccidia dan Microsporidium spora pada masa yang sama. Prosedur yang harus diikuti adalah seperti berikut:

1- Tutup smear dengan Kinyoun carbol fuchsin selama 10 minit.

2- Keluarkan pewarna dan basuh dengan air suling.

3- Pemutihan selama 30 saat dengan alkohol asid hidroklorik.

4- Basuh lagi dengan air suling.

5- Tutup smear dengan larutan trikrom selama 30 minit pada suhu 37 ° C.

6- Basuh dengan air suling.

7- Pemutihan selama 10 saat dengan alkohol asid asetik.

8- Cuci smear selama 30 saat menggunakan etanol 95%.

QA

Sebagai kawalan positif, smear dengan strain Mycobacterium tuberculosis disiapkan dan diwarnai dengan reagen yang disiapkan untuk mengesahkan bahawa bakteria mengambil warna yang sesuai (red-fuchsia).

Kawalan negatif juga dapat digunakan dengan menyediakan smear dengan ketegangan selain alkohol asid dengan cepat, sehingga mengesahkan bahawa keseluruhan sampel mengambil warna yang kontras.

Teknik Kinyoun berbanding teknik Ziehl-Neelsen

Teknik Kinyoun lebih sederhana kerana menghilangkan langkah pemanasan, tetapi kelebihan utamanya ialah mengelakkan pelepasan wap, sangat toksik dan penyebab barah dalam jangka masa panjang. Oleh itu, noda Kinyoun lebih selamat untuk mengotorkan anggota badan.

Penting untuk diperhatikan bahawa harus berhati-hati agar reagen tidak bersentuhan langsung dengan kulit, kerana ia menghakis dan pelunturnya mudah terbakar.

Mengenai keburukan, smear negatif tidak semestinya menunjukkan bahawa organisma tidak ada. Selanjutnya, kehadiran serpihan selular boleh menyebabkan positif palsu, yang menyebabkan kekeliruan dalam diagnosis.

Rujukan

1. Kimia Klinikal Gunaan. (2016). Kit BK Kinyoun. Terdapat di: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Noda Kinyoun dan dua Coccidia dalam HIV. Jurnal Perubatan MD. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. (Edisi ke-5.) Argentina, Editor Panamericana SA
5. Penyumbang Wikipedia. "Noda Kinyoun." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. Wikipedia, Ensiklopedia Percuma, 8 Februari 2018. Web. 5 Januari 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Pelaksanaan teknik pewarnaan untuk diagnosis serentak Coccidia dan Microsporidia. Institut Kebersihan Universiti Republik. Montevideo. Uruguay. Terdapat di: hygiene.edu.uy