MUNGKIN NODA GRÜNWALD-GIEMSA: RASIONAL, TEKNIK DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The May Grünwald-Giemsa atau Pappenheim noda adalah teknik pewarnaan pembezaan yang campuran Giemsa dan Mei Grünwald reagen. Ia digunakan untuk pembezaan sel darah normal dan abnormal dalam darah perifer dan smear sumsum tulang, serta untuk pewarnaan bahagian histologi dan sampel sitologi.

Kedua-dua reagen -Giemsa dan May Grünwald- berasal dari pewarnaan jenis Romanowsky, teknik yang berdasarkan gabungan pewarna berasid dan asas.

Smear menunjukkan neutrofil tersegmentasi dan milleosit dalam kes Leukemia Myeloid Kronik, diwarnai dengan noda May Grünwald Giemsa. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) melalui Wikipedia.org.

Giemsa meningkatkan teknik dengan menstabilkan campuran eosin, metilena biru dan turunannya, dengan gliserol. Sebaliknya, May Grünwald menggunakan eosin dan metilena biru, menggunakan metanol sebagai pelarut. Gabungan strategik ini memberikan hasil yang sangat baik.

Walaupun dari segi pemerhatian morfologi sel ia bertindak dengan cara yang serupa dengan noda Giemsa dan Wright, teknik ini memperbaiki yang sebelumnya dengan memperbaiki pewarnaan parasit yang menyebabkan malaria, penyakit Chagas, leishmaniasis dan trichomoniasis.

Selain itu, ia terbukti menjadi teknik yang sangat berguna untuk kajian sitologi cecair spermatik. Ia menonjol bukan hanya dengan menunjukkan ciri-ciri morfologi sperma, tetapi juga dengan memungkinkan pembezaan leukosit, sel epitelium dan sel spermatogenesis dengan kecekapan yang besar.

Asas

Teknik ini mengikuti asas noda Romanowsky, di mana pewarna berasid mempunyai pertalian selektif untuk komponen sel asas dan komponen berasid menarik noda asas.

Dijelaskan dengan cara lain, kedua-dua struktur sel dan pewarna mempunyai cas elektrik positif atau negatif; seperti caj menghalau dan caj berbeza menarik.

Sebagai contoh, pewarna asas seperti metilena biru dikenakan positif dan tertarik pada struktur bercas negatif. Itulah sebabnya pewarna ini mengotorkan inti yang kaya dengan DNA dan RNA yang mempunyai kumpulan fosfat bermuatan negatif.

Butiran basofil tersegmentasi dan sitoplasma sel darah putih mononuklear yang mengandungi RNA juga diwarnai.

Begitu juga, pewarna asid membawa muatan negatif, sebab itulah ia mengikat struktur bermuatan positif seperti eritrosit dan butiran eosinofil yang tersegmentasi. Bagi butiran neutrofil tersegmentasi, ini memperbaiki kedua pewarna.

Pelbagai pewarna

Dalam teknik ini, gabungan tindak balas antara pewarna ortokromatik dan metakromatik wujud. Orthochromatics (eosin dan metilena biru) mengikat struktur sel yang berkaitan dengannya dan memberikan warna stabil yang tidak berbeza.

Sebaliknya, metachromats (turunan dari metilena biru biru dan biru biru), mengubah warna asalnya setelah dilekatkan pada struktur tertentu, dan bahkan mungkin terdapat pelbagai warna.

Akhirnya, langkah yang diambil penyelesaian May Grünwald memerlukan kehadiran air, kerana tanpa ini pewarna akan menembusi struktur tetapi tidak akan dapat diperbaiki. Untuk ini berlaku, pewarna mesti menjadi polar atau mengion, dan dengan demikian dapat memendapkan dan mengikat struktur yang berkaitan.

Teknik

bahan

- Slaid slaid.

- Jambatan pewarna.

- Penyelesaian Mei-Grünwald.

- Noda Giemsa.

- Air suling.

Boleh larutan pekat Grünwald

0.25 g biru eosin-metilena (noda menurut May Grünwald) harus ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml metanol. Kemudian sediaan dicampurkan selama 1 jam dan dibiarkan berehat selama 24 jam. Apabila waktunya habis, ia disaring.

Untuk menerapkan teknik ini, pewarna May Grünwald mesti dicairkan seperti berikut: untuk 200 ml pewarna yang dicairkan, ukur 30 ml larutan pekat, tambahkan 20 ml larutan penampan dan 150 ml air suling disesuaikan dengan pH7.2-7.3 . Kemudian dicampurkan dan ditapis.

Pekat noda Giemsa

0.5 g azure-eosin-metilena biru (noda menurut Giemsa) mesti ditimbang, dilarutkan dalam 50 ml metanol dan 50 ml gliserin ditambahkan ke dalam campuran.

Untuk melaksanakan teknik ini, cairkan 1:10 dengan larutan penyangga dan biarkan selama 10 minit. Ia boleh disaring jika perlu.

Penyediaan larutan penyangga pada pH 7.2

Mereka harus ditimbang:

- 40 mg kalium di-hidrogen fosfat (KH2PO4).

- 151 mg di-sodium hidrogen fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).

Kedua-dua sebatian tersebut dilarutkan dalam 100 ml air.

Prosedur pewarnaan smear darah atau sumsum tulang

Terdapat dua mod: klasik dan cepat.

Mod klasik

1. Tutup smear selama 2 hingga 3 minit dengan larutan May-Grünwald yang dicairkan.
2. Basuh dengan air suling yang telah disekat untuk menghilangkan larutan sebelumnya.
3. Tutup dengan larutan pencucian yang sama dan biarkan selama 1 minit. Ideanya adalah bahawa pewarna sebelumnya terpaku pada struktur dan bahawa, pada masa yang sama, sel-sel dihidrat.
4. Tambahkan 12 tetes tincture Giemsa yang dicairkan ke dalam air yang telah disekat dan hembus untuk dicampur dan homogenkan. Biarkan berehat selama 15 hingga 20 minit.
5. Basuh smear dengan air suling yang disangga dan letakkan hingga kering.
6. Fokus dan lihat sel darah bernoda di bawah mikroskop cahaya menggunakan objektif 40X. Sekiranya perlu, 100X boleh digunakan.

Mod pantas

1. Tutup smear dengan noda May Grünwald yang dicairkan selama 1 minit.
2. Basuh dengan air suling yang disangga.
3. Tutup dengan air yang telah disekat dan biarkan selama 1 minit.
4. Masukkan noda Giemsa yang telah dicairkan dan biarkan selama 5 minit.
5. Basuh dengan air suling yang ditampal dan biarkan kering.

Teknik yang dijelaskan di sini adalah pedoman, tetapi harus diperhatikan bahawa prosedur dan waktu pewarnaan bervariasi sesuai dengan perusahaan komersial yang mengedarkan reagen. Sebaiknya ikuti langkah-langkah yang ditunjukkan dengan tegas oleh setiap rumah komersial.

Teknik untuk mewarnai smear cecair spermatik

1- Tutup smear dengan lapisan nipis larutan May Grünwald selama 4 minit.

2- Keluarkan pewarna dan basuh dengan air suling.

3- Letakkan lapisan Giemsa yang dicairkan (1:10) dalam air suling selama 15 minit.

4- Keluarkan pewarna dan basuh dengan air suling.

5- Biarkan kering dan perhatikan di bawah mikroskop.

Warna yang diharapkan dengan noda May Grünwald Giemsa

Spesifikasi Penting

Teknik ini memerlukan bahawa reagen dan larutan pencucian mempunyai pH yang disesuaikan dengan 7.2 -7.3, sehingga pertalian pewarna untuk struktur sel tidak terdistorsi dan warna akhir yang diharapkan tidak berubah.

Permohonan

Teknik ini digunakan oleh makmal klinikal untuk mengotorkan darah perifer dan smear sumsum tulang, bahagian tisu, dan sitologi.

Dalam bidang hematologi, teknik ini sangat penting dalam kajian keabnormalan sel dari segi bentuk, ukuran dan bilangannya. Ini adalah alat yang sangat berharga untuk diagnosis penyakit tertentu, seperti leukemia dan anemia.

Di samping itu, ia sangat berguna ketika mencari parasit di kawasan hematologi (Plasmodium sp dan Trypanosoma cruzi) atau histologi (Leishmanias sp).

Sitologi faraj

Mengenai sitologi vagina, teknik ini sangat berguna untuk pemerhatian Trichomonas vaginalis. Ini adalah penemuan penting, kerana kehadirannya mensimulasikan gambar karsinoma in situ yang kemudian hilang ketika parasit dihilangkan.

Sampel sperma

Ini telah menjadi alat yang ideal untuk kajian sampel sperma, kerana ia memberikan maklumat berharga mengenai kualiti sperma.

Data yang ditawarkannya berkaitan terutamanya dengan bilangan dan morfologi, serta sel-sel bersamaan yang mungkin ada dan yang sangat penting, seperti sel kuman, leukosit dan sel epitelium.

Dengan analisis ini adalah mungkin untuk menggambarkan kelainan yang diperhatikan pada sperma di kepala, leher, bahagian tengah dan bahagian utama.

Selain itu, mereka juga dapat membantu menunjukkan kes hemospermia (kehadiran sel darah merah dalam air mani) dan leucospermia atau piospermia (peningkatan jumlah leukosit dalam air mani).

Rujukan

1. Costamagna S, Prado M. Pengesahan ujian segar, May Grünwald-Giemsa dan Gram noda dan media kultur untuk diagnosis Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Terdapat dalam: scielo.
2. Makmal Merck KGaA. Boleh Grünwald eosin metilena biru untuk mikroskopi.
3. "Noda May-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 15 Nov 2018, 14:37 UTC. 8 Jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Makmal Panreac Chemical Chemicals. Reagen untuk teknik histologi, hematologi dan mikrobiologi. Terdapat di: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Pengesyoran untuk pewarnaan darah untuk membaca hemogram. Makmal Bioperubatan Nasional dan Rujukan. Institut Kesihatan Awam Chile.
6. Sarabia L. Spermiogram mengikut kriteria WHO. Program Anatomi dan Biologi Perkembangan. Pusat Pengajian Perubatan. Universiti Chile. Terdapat di: pp.centramerica.com