NODA WRIGHT: RASIONAL, BAHAN, TEKNIK, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2026

The Wright noda adalah teknik pewarnaan yang dicipta oleh Amerika pakar patologi James Homer Wright pada tahun 1902, berdasarkan noda Romanowsky itu. Oleh kerana noda Romanowsky tidak stabil, Wright memasukkan metanol sebagai pelarut dan fiksatif.

Pewarnaan ini bersifat polikromatik, yang bermaksud bahawa ia menghasilkan beberapa warna bergantung pada struktur yang menyerap pewarna. Teknik pewarnaan ini telah banyak digunakan untuk melakukan pembezaan jumlah sel darah putih dan untuk mengkaji morfologi sel darah merah, platelet, dan leukosit dalam darah periferal dan sumsum tulang.

Pelbagai smear darah periferi diwarnai dengan noda Wright. A. Leukemia akut B. Plasmodium vivax di dalam eritrosit. C. Plasmodium falciparum, makrogametosit. D. Limfosit

Penerapannya sangat penting, kerana kelainan dapat dilihat pada garis sel darah yang berlainan, memudahkan diagnosis penyakit seperti leukemia atau jangkitan bakteria atau parasit.

Mungkin ini adalah aplikasi yang paling biasa di mana teknik ini digunakan, tetapi bukan satu-satunya aplikasi. Ia juga berguna dalam sampel selain darah dan sumsum tulang, seperti pelepasan hidung, lendir tinja, dahak, sampel kulit, antara lain.

Rasional untuk noda Wright

Noda Wright lahir dari noda Romanowsky, yang terdiri daripada larutan metil alkohol pewarna asid (eosin Y) dan pewarna asas (biru metilena) dan produk pengoksidaan mereka.

Campuran pewarna yang digunakan dalam noda Wright menyebabkan kesan yang dikenali sebagai Romanowsky, iaitu, memberikan warna ungu yang indah pada inti leukosit dan butiran neutrofil, sementara sel darah merah berwarna merah jambu.

Komponen yang bertanggungjawab untuk memberikan gamut warna khas noda Wright adalah biru B dan eosin Y. Kesan yang diperhatikan akan bergantung pada pengikatan pewarna ke struktur kimia dan interaksi biru B dan eosin Y.

Struktur asid seperti asid nukleik, protein nuklear, dan sitoplasma belum matang reaktif dari beberapa jenis sel, membetulkan warna biru B (noda asas).

Walaupun struktur asas seperti hemoglobin, butiran eosinofil tersegmentasi, antara struktur selular lain, mengikat eosin Y (pewarna asid).

Hasil pewarnaan dapat dipengaruhi oleh faktor yang berbeza, seperti pH pewarna Wright, penyangga dan larutan pencucian; serta masa pewarnaan dan penetapan.

Oleh itu, setiap langkah dalam penyediaan reagen sangat penting dan mesti dilakukan dengan memperhatikan setiap perincian.

bahan

Noda Wright. Untuk 100 mL diperlukan:

Timbang 0.3 g noda Wright, ukur 97 ml metanol dan 3 ml gliserol.

Penyediaan

Letakkan sejumlah besar noda Wright ke dalam mortar dan tambahkan gliserol secara beransur-ansur sehingga serbuk larut sepenuhnya.

Selepas itu, metanol ditambahkan, dicampurkan dan dituangkan ke dalam botol ambar.

Sebelum digunakan, larutan harus digoncang dengan gerakan lembut dan disaring.

Penyelesaian penyangga yang disekat

Dalam satu liter air suling, 3,76 g disodium hidrofosfat (Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0) ditambah 2,1 g dihidrogen kalium fosfat (KH ₂ PO ₄ ) ditambahkan.

Gaul hingga sebati sehingga semua reagen yang disatukan larut. Laraskan pH ke 7.2. Tuangkan ke dalam balang kaca dan simpan pada suhu bilik.

Bahan tambahan diperlukan untuk melakukan pewarnaan

Selain itu, bahan lain diperlukan untuk dapat menjalankan teknik pewarnaan, seperti: slaid objek atau penutup objek, jambatan pewarna, t-shirt dengan air atau penyangga untuk mencuci, pemasa untuk mengekalkan masa pewarnaan dan beberapa bahan pengeringan (kertas penyerap, kain kasa atau kapas).

Komponen noda Wright

Metanol

Alkohol (metanol) berfungsi sebagai fiksasi smear darah ke slaid.

Ia pada dasarnya adalah reagen pengurangan, penyahhidratan dan pembetulan koagulan. Oleh itu, fungsinya adalah untuk membekukan protein dan menjadikannya tidak larut, tetapi tanpa menafikannya.

Metanol adalah reagen fiksasi smear yang paling banyak digunakan di semua makmal, kerana ia memberikan hasil yang lebih baik daripada etanol. Kepekatan ideal ialah 99%.

Peredam

Penyangga (larutan penyangga) mempunyai fungsi untuk menyesuaikan atau mempertahankan pH pewarna, kerana pH yang disesuaikan dengan 7.2 sangat penting agar struktur sel dapat menyerap pewarna dengan baik.

Sebaliknya, langkah fiksasi metanol mengeringkan sel dan penyangga membantu menghidratnya semula.

Eosin (Y)

Eosin mempunyai kaitan dengan blok bangunan kerana ia adalah pewarna asid. Dua jenis eosin diketahui sangat mirip antara satu sama lain, sehingga kedua-duanya dapat digunakan, memperoleh hasil yang sama.

Yang satu disebut eosin Y, eosin kuning, atau tetrabromofluorescein, dan yang lain disebut eosin B, eritrosin B kebiruan, atau dibromodinitrofluorescein. Walau bagaimanapun, eosin Y adalah yang paling biasa digunakan.

Sifat terpenting pewarna ini adalah kekutuban negatifnya, ini menjadikannya tertarik pada struktur sel yang bermuatan positif.

Biru metilena

Ia adalah pewarna asas. Sifat utamanya adalah metakromasia, iaitu tidak semua struktur akan diwarnai dengan warna yang sama, bergantung kepada komposisi kimia struktur yang sedang diwarnai.

Sebahagiannya akan bertukar menjadi terang atau biru tua, dan ada yang bertukar menjadi ungu tua atau ungu pucat.

Teknik

1-Lakukan penyebaran sampel sehingga filem nipis kekal, sama ada di slaid atau penutup selip.

2-Biarkan ia kering di udara selama lebih kurang 2 jam.

3-Letakkan smear kering di jambatan pewarnaan atau dulang pewarnaan dengan penyebaran sampel menghadap ke atas.

4-Tutup kepingan dengan noda Wright secara bertahap sehingga seluruh permukaan ditutup. Biarkan selama 5 - 8 minit.

5-Noda harus menutupi slaid sepenuhnya, tanpa menumpahkan bahagian tepi. Sekiranya selama masa pewarnaan mulai menguap, tambahkan beberapa titisan tambahan.

6-Selepas itu tambahkan jumlah penyerap kejutan yang sama, hembus sedikit sehingga kilauan khas logam muncul. Masa 10 hingga 15 minit.

7-Basuh dengan air paip, letakkan aliran lembut sehingga kepingan kelihatan berwarna merah jambu.

8-Dengan kain kasa yang direndam dalam alkohol, lepaskan pewarna yang melekat di bahagian belakang slaid.

9-Biarkan smear kering dengan baik sebelum meletakkan minyak rendaman untuk melihatnya di bawah mikroskop.

Utiliti

Hematologi

Ia sangat sesuai untuk pewarnaan smear darah periferal, untuk pemeriksaan smear darah tebal dan untuk kajian sel-sel dari sampel sumsum tulang.

Oleh kerana sifat kimia gabungan pewarna ini, struktur sel dapat dikenali dengan mudah, dan pelbagai jenis sel yang ada dapat dibezakan.

Hidung berair

Teknik ini sangat berguna untuk mengenal pasti sel-sel pembuangan hidung (sel epitelium, eosinofil tersegmentasi, sel polimorfonuklear) dalam diagnosis rinitis alergi.

parasitologi

Dalam pengertian ini, telah berguna untuk kajian Leishmania sp dalam histiosit tisu sel subkutan pada ulser kulit. Begitu juga, ia digunakan untuk mengenal pasti leukosit dalam sampel najis (leukogram tinja).

Dalam kes ini, menarik perhatian doktor untuk mengetahui sama ada leukositosis yang terdapat dalam tinja adalah polimorfonuklear atau mononuklear. Penemuan ini dalam leukogram tinja akan memberi petunjuk sama ada jangkitan bakteria atau virus masing-masing.

Sebaliknya, parasit yang beredar dalam darah dapat dijumpai di dalam eritrosit atau bebas dalam plasma. Parasit yang dicari adalah Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii dan filarias, dan dalam perubatan veterinar berguna dalam mencari Theileria equi dan Babesia caballi, agen penyebab bebesiosis, terutama pada kuda.

Noda Wright dan juga noda Giemsa memungkinkan untuk membezakan hemoparasit dari komponen sel normal. Dua jenis spread boleh digunakan untuk ini:

Sebarkan nipis

Darah disebarkan sebagai filem nipis pada slaid. Ia diwarnai dengan noda Wright, menunjukkan ciri-ciri inti dan sitoplasma.

Penurunan tebal

Metodologi ini digunakan untuk menyiasat kehadiran parasit dalam jumlah darah yang lebih besar.

Untuk melakukan ini, setetes darah besar diletakkan di atas slaid. Sesampai di sana, ia mesti defibrilasi, menjadikan bulatan yang lebih besar dan lebih besar dari pusat ke luar, menggunakan tepi slaid lain.

Akhirnya, untuk dapat memerhatikan parasit dalam smear tebal, eritrosit mesti dilenyapkan dengan air.

Jangkitan pernafasan

Pada peringkat pernafasan, teknik ini juga berguna, kerana sel-sel yang terdapat dalam sampel sputum, lavage bronkus atau bronchoalveolar, penting untuk menentukan diagnosis.

Begitu juga, sel polimorfonuklear dan sel mononuklear dapat dibezakan di sini.

Bakteriologi

Penggunaan teknik ini dalam bakteriologi terhad, kerana tidak baik untuk pewarnaan bakteria, sebab itulah teknik pewarnaan khusus lain digunakan untuk pewarnaannya.

Walau bagaimanapun, ia telah digunakan untuk mencari sel epitelium dengan badan kemasukan Chlamydia trachomatis dalam smear mukosa uretra atau endoserviks, walaupun harus diakui bahawa ini bukan kaedah terbaik untuk ini.

Juga mungkin untuk memerhatikan bakteria seperti spiral seperti Borrelia burgdorferi di antara sel darah merah pada pesakit yang dijangkiti, serta morulae atau badan penyisipan Ehrlichia sp dalam sitoplasma limfosit, monosit, atau neutrofil dalam smear darah.

Mikologi

Histoplasma capsulatum adalah kulat patogen yang sering didiagnosis dengan pemerhatian mikroskopik terhadap pelbagai sampel tisu, diwarnai dengan noda Wright.

Bagaimana struktur sampel darah diperhatikan dengan noda Wright?

Sumber: Retamales E, Mazo V. Institut Kesihatan Umum, Kerajaan Chile. Cadangan untuk pewarnaan darah untuk membaca hemogram.

Cadangan untuk pewarnaan yang baik

Slaid sampel darah mesti kering secara spontan. Smear semipis mungkin untuk mendapatkan lekapan pewarna yang lebih baik dan mengelakkan pewarnaan berlebihan.

Untuk pewarnaan berkualiti tinggi, disarankan untuk mengotorkan dalam masa dua jam dari persiapan smear. Sebaliknya, sampel yang ideal adalah darah kapilari, tanpa antikoagulan.

Namun, jika darah vena digunakan, ia harus digunakan sebagai antikoagulan EDTA dan bukan heparin, kerana yang terakhir dapat mengubah struktur sel.

Untuk mengelakkan kemerosotan pewarna yang disiapkan, ia harus disimpan di tempat kering.

Semasa proses mencuci, penggunaan air yang diselaraskan ke pH netral dianjurkan.

Akhirnya, disarankan untuk menguji kaedah pewarnaan yang digunakan di makmal dari semasa ke semasa.

Ini dilakukan dengan mewarnai sampel atau corak yang diperpanjang, sebagai kawalan kualiti. Langkah ini penting, kerana memastikan pewarnaan disiapkan dengan betul dan masa pewarnaan diseragamkan dengan baik.

Sekiranya helaian corak tidak berwarna, maka ada masalah yang mesti diselesaikan.

Kesalahan biasa dalam pewarnaan Wright

Pewarnaan yang sangat pucat

Smear yang sangat pucat biasanya disebabkan oleh masa pewarnaan yang sangat singkat atau pencucian yang berlebihan. Ia dibetulkan dengan memanjangkan masa kontak dengan pewarna atau mengurangkan masa mencuci.

Pewarna mendakan

Kehadiran zat pewarna dalam smear boleh mempunyai beberapa sebab, namun, penyebab yang paling kerap adalah: penggunaan pewarna yang tidak disaring, pewarnaan pada jambatan pewarnaan yang tidak rata, menggunakan kepingan yang kotor dengan habuk atau minyak, tidak mencuci dengan baik pewarnaan lengkap.

Smear merah atau biru

Penyangga bertanggungjawab untuk pH pewarna. Pewarna dengan pH di bawah yang ditunjukkan (berasid) akan menghasilkan smear kemerahan.

Sekiranya pH pewarna di atas (beralkali), smear kebiruan akan diperolehi.

Mod simpanan

Reagen harus disimpan pada suhu bilik.

Rujukan

1. Gutiérrez V. Kajian perbandingan antara kaedah pewarnaan Wright dan ujian Elisa untuk diagnosis Ehrlichiosis taring di kota San Pedro Sula, Honduras. 2008. Tesis Ijazah untuk layak mendapat Ijazah Perubatan Veterinar. Universiti San Carlos dari Guatemala.
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Noda asas di makmal mikrobiologi. Penyelidikan Ketidakupayaan. 2014; 3 (1): 10-18.
3. "Noda Wright." Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 18 Mei 2018, 12:05 UTC. 8 Dis 2018, 20:37
4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Kekerapan Babesia spp. dalam memburu kuda, Córdoba (Colombia). Pendapat udcaaktual. 2013; 16 (2): 451-458.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA
6. Retamales E, Mazo V. Institut Kesihatan Umum Kerajaan Chile. Cadangan untuk pewarnaan darah untuk membaca hemogram.