PEWARNAAN NEGATIF: RASIONAL, TEKNIK, KELEBIHAN DAN KEKURANGAN - BIOLOGI - 2026

The pewarnaan negatif adalah kaedah pewarna khas untuk menyerlahkan kehadiran kapsul di beberapa mikroorganisma , terutamanya Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae dan Cryptococcus neoformans-, dari spesimen klinikal atau budaya murni.

Sampel langsung yang biasa digunakan untuk menerapkan pewarnaan negatif adalah cecair serebrospinal. Teknik ini mewakili alternatif yang cepat untuk diagnosis meningitis, terutamanya Cryptococcus neoformans.

A. Tartar gigi diwarnai dengan tinta India, B. Cryptococcus neoformans var gatti lemah dikemas kerana ia berlaku di alam semula jadi, menggunakan nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti dengan kapsul tebal seperti yang terdapat dalam bentuk parasitnya, menggunakan nigrosin. D. Cryptococcus neoformans dengan dakwat India yang sedikit dicairkan. Gisell Quinde, dari Wikimedia Commons / CDC, melalui Wikimedia Commons / Foto Kredit: Penyedia Kandungan: CDC / Dr. Leanor Haley, melalui Wikimedia Commons

Begitu juga, noda ini boleh digunakan pada sputum dan cecair steril pada umumnya, serta pada strain yang diperoleh dari kultur murni muda. Teknik ini menggunakan dakwat nigrosin atau India untuk pelaksanaannya; oleh itu, metodologi sangat mudah dan murah untuk digunakan yang memberikan maklumat yang bernilai diagnostik dalam masa yang singkat.

Dalam pengertian ini, mana-mana makmal mampu melakukan pewarnaan ini. Sudah tentu, makmal mesti mempunyai kakitangan yang kompeten, yang mampu mengenali ragi Cryptococcus neoformans yang terpencil atau baru dan membezakannya dari leukosit dan artifak yang mungkin ditunjukkan oleh sampel.

Asas

Tinta Nigrosine dan India berfungsi dengan cara yang serupa; oleh itu, salah satu daripada kedua-dua bahan tersebut boleh digunakan secara bergantian.

Teknik ini disebut pewarnaan negatif kerana ia bertindak dengan cara yang bertentangan dengan teknik pewarnaan yang lain. Dalam hal ini, yang masih belum dicerna adalah struktur yang sedang dicari atau yang ingin dilihat; iaitu mikroorganisma.

Oleh itu, pewarnaan berdasarkan pewarnaan bahagian bawah smear dengan warna gelap. Dalam senario ini, struktur kapsul akan menonjol dalam warna terang atau tidak berwarna.

Secara umum, ragi adalah refrainent, dikelilingi oleh lingkaran cahaya yang sesuai dengan kapsul. Ini berlaku kerana dakwat dan nigrosin India adalah bahan yang tidak dapat menembus polisakarida yang membentuk kapsul mikroorganisma hidup.

Perlu diingat bahawa struktur lain yang mungkin terdapat dalam sampel langsung, seperti leukosit atau sel darah merah, tidak dapat menembusi.

Walau bagaimanapun, jika mikroorganisma mati, pewarna dapat menembusi di dalamnya, sehingga pewarnaan ini juga berguna untuk menilai daya maju mikroorganisma.

Teknik

bahan

Nigrosin

Nigrosine berhutang dengan warna hitam yang dimilikinya. Ia adalah bahan sintetik yang diperoleh dari pemanasan campuran sebatian organik -seperti nitrobenzin, anilin dan anilin hidroklorit-, menggunakan pemangkin (besi atau tembaga) dalam reaksi tersebut.

Dakwat cina

Tinta Cina adalah bahan yang digunakan terutamanya oleh orang Asia untuk menulis, membuat karya seni, dan lukisan monokromatik. Ia sangat popular dalam budaya Cina.

Ia diperoleh dari dakwat cumi-cumi yang dicampurkan dengan arang bubur, hasil dari pembakaran pokok-pokok yang rendah resin.

Anda juga boleh menyiapkannya dari jelaga dari pembakaran hidrokarbon (minyak sayuran), bersama dengan gelatin protein yang memberikannya konsistensi yang tepat untuk mengelakkan pemendapan zarah karbon.

Spesifikasi untuk persampelan

- Tidak memerlukan puasa.

- Sampel CSF, dahak atau cecair steril mesti mengandungi sekurang-kurangnya 1 ml isi padu dan mesti segera dipindahkan ke makmal pada suhu bilik.

- Sampel CSF dan cecair steril mesti diambil oleh doktor khusus.

- Ini juga dapat menjadi budaya murni dari tekanan yang mencurigakan yang berkaitan dengan patogen yang disebutkan di atas.

Pelaksanaan teknik dengan sampel langsung

- Sampel mesti disentrifugasi, kemudian supernatan dibuang dan sedimen diambil.

- Setetes bahan sentrifugal (sedimen) dan setetes dakwat India atau nigrosin diletakkan pada slaid bersih.

- Ia harus dicampurkan dengan baik dan ditutup dengan selimut penutup, sehingga titisan menyebar sebagai lapisan tipis tanpa melewati tepi.

- Selepas itu, penyediaan dipasang pada mikroskop.

- Sekiranya sediaannya terlalu gelap, ia boleh dicairkan dengan air.

Pelaksanaan teknik dengan ketegangan dari budaya

- Sebilangan kecil kultur muda diambil dengan jarum penyemaian dan dilarutkan dalam setetes dakwat India yang sebelumnya diletakkan di atas penutup bersih.

- Selongsong diletakkan di atas.

- Ia diperhatikan dalam mikroskop pada suhu 10X dan kemudian pada suhu 40X.

Anda juga boleh melarutkan sebahagian koloni dalam air suling, dan dari situ ambil setetes dan campurkan dengan tinta India. Dengan cara ini, penyediaannya tidak akan begitu tebal, memungkinkan untuk memerhatikan struktur secara terpisah; jika ada orang ramai, ia tidak akan dapat diperhatikan dengan baik.

Metodologi lain adalah seperti berikut:

- Letakkan setetes penangguhan pada salah satu hujung slaid.

- Letakkan setetes nigrosin pada hujung yang sama dan campurkan.

- Dengan bantuan slaid lain, sebarkan sampel seolah-olah membuat smear hematologi.

- Biarkan kering dan perhatikan di bawah mikroskop.

Pemerhatian mikroskop

Anda mesti terlebih dahulu fokus dengan objektif 10X untuk melihat luas bidang. Selepas itu, ia harus dicari sekiranya terdapat ruang yang jelas; jika ada, fokus 40X untuk melihat perincian.

Kelebihan

- Ia mudah dilaksanakan.

- Ini adalah teknik yang murah.

- Kaedah ini tidak menghendaki smear tetap menjadi panas atau dengan bahan kimia; oleh itu, mikroorganisma diperhatikan tanpa herotan.

- Penyediaan segar tidak perlu dikeringkan, sehingga dapat segera diperhatikan, menghasilkan hasil dengan cepat.

Kekurangan

Setelah dipasang, persediaan segar mesti diperhatikan dengan segera; jika mereka dibenarkan untuk mengeringkannya, tidak mustahil untuk memerhatikannya dan yang baru mesti dipasang.

Pewarnaan tisu dengan dakwat India

Fungsi lain yang dapat dipenuhi oleh tinta India adalah di makmal patologi. Ini digunakan pada sampel tisu yang diekstrak secara pembedahan untuk menandakan margin reseksi tumor.

Tisu yang ditandakan disembur dengan asid asetik. Ini bertindak sebagai mordant dan mencegah dakwat keluar ketika tisu menjalani proses rutin untuk penyediaan biopsi.

Prosedurnya terdiri daripada memandikan tisu dalam alkohol dan xilena, dan kemudian merendamnya dalam lilin parafin. Penandaan ini memberi petunjuk kepada ahli patologi ketika memerhatikan tisu, menunjukkan di mana margin reseksi pembedahan atau tempat menarik lain.

Rujukan

1. «Nigrosina». Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 11 Jul 2017, 22:46 UTC. 6 Jan 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Dakwat Cina". Wikipedia, Ensiklopedia Percuma. 1 Okt 2018, 03:08 UTC. 6 Jan 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J dan kolaborator. (2006). Kakitangan Buruh komuniti autonomi Extremadura. Agenda khusus Jilid IV. Editorial MAD. Seville-Spain, hlm 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) .Juruteknik makmal pakar, Perkhidmatan Kesihatan Galicia (SERGAS). Jilid agenda subjek tertentu 2. Editorial MAD. Seville-Spain, hlm 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA