PEWARNAAN KAPSUL: RASIONAL DAN TEKNIK - BIOLOGI - 2025

The kapsul mengotorkan adalah teknik pewarnaan pengkamiran yang mempunyai harta struktur tekanan polisakarida sekitar bakteria dan yis tertentu dipanggil kapsul. Ia digunakan di makmal klinikal untuk membantu mendiagnosis patologi tertentu yang disebabkan oleh mikroorganisma kapsul.

Ia juga digunakan dalam makmal pengajaran untuk menunjukkan struktur morfologi ini kepada pelajar kerjaya sains kesihatan, seperti: perubatan, bioanalisis, kejururawatan, atau sitoteknologi, antara lain.

Klebsiella pneumoniae smear diwarnai dengan noda kapsul. Kaedah dakwat India dengan safranin. Sumber: А.А.В

Terdapat beberapa teknik mudah untuk menunjukkan kehadiran kapsul dalam mikroorganisma yang memilikinya, ini adalah: noda negatif, noda Anthony dan varian yang menggabungkan dua yang sebelumnya.

Pewarnaan negatif digunakan terutamanya dalam sampel CSF apabila kehadiran yis Cryptococcus neoformans disyaki. Ragi ini adalah penyebab meningitis yang biasa.

Teknik ini menggunakan dakwat nigrosin atau India dan didasarkan pada mewujudkan perbezaan antara latar belakang penyediaan dan kapsul mikroorganisma yang tidak dapat ditembusi. Latar belakang menjadi gelap dan kapsul tidak berwarna. Dengan cara ini, struktur ini dinyatakan.

Mengenai teknik Anthony, dapat dikatakan bahawa ia banyak digunakan dalam makmal pengajaran untuk menunjukkan struktur polisakarida pada bakteria seperti Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae dan Neisseria meningitidis.

Penggunaan teknik ini untuk tujuan diagnostik sangat jarang berlaku, kerana terdapat ujian rutin lain yang memungkinkan pengenalpastian mikroorganisma ini.

Asas

Kapsul adalah struktur kuat polisakarida. Ini melindungi mikroorganisma dari fagositosis, dan oleh itu struktur yang sukar ditembusi.

Itulah sebabnya noda kapsul berdasarkan kontras. Pewarna mengotorkan bahagian bawah sediaan sementara kapsul tidak berwarna.

Oleh itu, dengan teknik ini kapsul mudah dikenali. Sekiranya mikroorganisma tidak mempunyai kapsul, ia tidak akan dapat dibezakan dengan jenis pewarnaan ini, kerana semuanya akan diwarnai dengan warna yang sama.

Semua teknik yang digunakan untuk mewarnai kapsul mempunyai alasan yang sama walaupun menggunakan pewarna dan prosedur yang berbeza.

Teknik setara

-Kain noda

Noda Anthony menggunakan violet kristal sebagai noda. Ini akan mengotorkan badan bakteria dan latar belakang ungu.

Sebaliknya, 20% tembaga sulfat digunakan. Ini berfungsi sebagai larutan pencucian, iaitu menghilangkan kristal violet yang berlebihan dari sediaan, membuat kapsul jelas tetapi tanpa badan bakteria atau latar belakang kehilangan warna.

bahan

- Susu warni.

- Gelongsor.

- 1% kristal ungu.

- 20% tembaga sulfat.

- Mikroskop optik.

- Minyak rendaman.

Proses

Teknik ini terdiri daripada:

1. Memupuk mikroorganisma dalam susu warni selama 36 jam.
2. Letakkan setetes kultur di hujung slaid dan di sebelahnya, letakkan setetes kaca violet, campurkan dan sebarkan dengan hujung slaid yang lain.
3. Udara kering dan jangan panas.
4. Basuh dengan larutan tembaga sulfat 20%, biarkan kering.
5. Perhatikan di bawah mikroskop dengan objektif rendaman. Cari ke arah hujung penyebaran.

Penting untuk tidak menggunakan haba untuk memperbaiki atau mengering, kerana ini merosakkan kapsul. Juga jangan basuh dengan air.

Tafsiran

Susu warna-warni adalah media kultur yang sangat baik kerana ia menyediakan nutrien yang diperlukan oleh mikroorganisma untuk mengembangkan kapsul yang menonjol.

Sebaliknya, susu berwarna warni akan membentuk bahagian bawah tebal dan padat yang akan berwarna ungu bersamaan dengan badan bakteria, tetapi kapsul yang mengelilingi mikroorganisma akan tetap tidak berwarna. Oleh itu, halo yang jelas diperhatikan di sekitar badan bakteria.

Perwakilan grafik pada pemerhatian mikroskopik smear Klebsiella pneumoniae yang diwarnai dengan noda Anthony. Sumber: Dibuat oleh pengarang MSc. Marielsa Gil.

Kelebihan

Ini adalah teknik mudah untuk dilakukan. Tidak memerlukan pembaikan.

Juga, perlu diperhatikan bahawa media kultur lain dapat digunakan, tetapi media susu lebih disukai kerana mempunyai kelebihan menyediakan kapsul yang lebih menonjol.

Kekurangan

Ini adalah teknik yang lebih intensif tenaga kerja daripada pewarnaan negatif, dan visualisasi memerlukan menunggu persiapan kering sepenuhnya.

-Pewarnaan negatif

bahan

- Slaid slaid.

- Medium budaya dengan mikroorganisma.

- Dakwat cina atau nigrosin.

- Mikroskop optik.

- Penyelesaian garam fisiologi.

Proses

Letakkan setitik garam fisiologi di selimut dan larutkan sebahagian kecil kultur mikroba. Adalah penting bahawa penyediaannya tidak terlalu tebal. Kemudian letakkan setetes dakwat Cina atau nigrosin dan campurkan.

Lapisan penutup kemudian diletakkan di atas sediaan tanpa mengalirkan cecair. Ia diperhatikan di bawah mikroskop dengan terlebih dahulu memfokus pada objektif 10X dan kemudian bergerak ke 40X.

Teknik ini juga boleh digunakan pada sampel CSF secara langsung. Iaitu, bukannya meletakkan setetes budaya mikroba, setetes CSF ditempatkan.

Kelebihan

Ini adalah kaedah mudah untuk melakukan dan pada masa yang sama murah. Ia tidak memerlukan pemasangan atau pengeringan penyediaan.

Kekurangan

Kelemahannya adalah bahawa ia mesti diperhatikan di bawah mikroskop sebelum penyediaan kering, kerana jika ini berlaku mikroorganisma akan berkontrak, yang akan membuat visualisasi menjadi sukar.

Sebaliknya, positif palsu boleh berlaku jika penganalisis tidak berpengalaman, kerana leukosit sering keliru dengan ragi.

Pemerhatian kapsul ragi dengan tinta Cina atau teknik nigrosin harus dianggap sebagai diagnosis anggapan Cryptococcus neoformans sehingga ditunjukkan dengan kultur.

Ini kerana ada ragi lain yang boleh menjadi penyebab meningitis dan bukan hanya Cryptococcus neoformans, seperti genus Candida dan Rhodotorula, serta spesies lain Cryptococcus.

Tafsiran

Sekiranya terdapat mikroorganisma kapsul, latar belakang gelap akan diperhatikan, dengan badan telus melayang di dalam cecair, menyoroti kehadiran kapsul.

Kapsul Cryptococcus neoformans diwarnai dengan dakwat Cina. Sumber: Kredit Foto: Penyedia Kandungan: CDC / Dr. Leanor haley

-Teknik dakwat India

Teknik ini juga boleh dilakukan dengan nigrosin. Ia adalah gabungan teknik yang telah dijelaskan sebelumnya. Teknik ini menggunakan dakwat kristal ungu dan India atau nigrosin.

Tubuh bakteria berubah menjadi ungu dari kristal ungu kerana ia bercas negatif, sedangkan nigrosin mewarnai bahagian bawah smear. Sekiranya bakteria mempunyai kapsul, ia akan muncul sebagai lingkaran transparan di sekitar mikroorganisma.

Violet kristal dapat diganti dengan warna berikut: safranin, fuchsin asas atau biru metilena.

bahan

- Kaca ungu.

- Tinta Nigrosin atau India.

- Slaid slaid.

- Mikroskop.

Proses

- Memupuk mikroorganisma dalam medium kultur.

- Letakkan setetes kultur di hujung slaid dan di sebelahnya, letakkan setetes tinta kristal India atau nigrosin, campurkan dan sebarkan dengan hujung slaid lain.

- Udara kering dan tidak menjadi panas.

- Tutup dengan larutan kristal ungu selama 1 minit, basuh dengan air suling tetapi sangat lembut (jet lembut), biarkan kering di udara terbuka.

- Perhatikan di bawah mikroskop dengan objektif rendaman. Cari ke arah hujung penyebaran.

Tafsiran

Tubuh bakteria ungu dan latar belakang gelap akan kelihatan. Sekiranya terdapat kapsul, akan kelihatan tidak berwarna di sekitar bakteria.

Rujukan

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Teknik asas Mikrobiologi. Pemerhatian bakteria. Reduca (Biologi). Siri Mikrobiologi. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Noda asas di makmal mikrobiologi. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Terdapat di: medigraphic.com
3. Gil M. Pewarnaan negatif: rasional, teknik, kelebihan dan kekurangan. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Noda Kapsul: Prinsip, Prosedur dan Hasilnya. 2019. Panduan Mikrobiologi Perubatan. Terdapat di: microbeonline.com