PENGASINGAN MIKROORGANISMA: TEKNIK DAN KEPENTINGAN - BIOLOGI - 2025

The pengasingan mikroorganisma melibatkan satu set teknik yang digunakan untuk mengeluarkan dan memisahkan spesies mikrob menarik dari habitat semula jadi mereka untuk in vitro habitat. Teknik ini adalah sekumpulan banyak alat asas dan diperlukan untuk kajian mikrobiologi.

Sebilangan besar mikroorganisma yang diketahui dan yang telah ditentukan oleh sains, adalah mikroorganisma yang dapat diasingkan dan disimpan dalam bekas yang mensimulasikan, sebahagiannya, keadaan intrinsik di tempat mereka tinggal.

Gambaran khas koloni mikroorganisma seperti bakteria yang diasingkan pada medium padat di dalam piring Petri (Gambar oleh nadya_il di www.pixabay.com)

Mungkin salah satu lelaki pertama yang melakukan pengasingan mikroorganisma ialah Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723), yang mengumpulkan dan mengasingkan sampel mikroba dari sebilangan besar tempat dan ekosistem untuk memerhatikannya dengan teliti di bawah ratusan mikroskop yang dirancangnya. .

Namun, pada masa para saintis Louis Pasteur dan Robert Koch, selama abad ke-19, praktik yang ketat mulai dilakukan yang berfungsi untuk mengasingkan mikroorganisma tertentu, semuanya agar dapat mempelajarinya secara terperinci. .

Tidak seperti Leeuwenhoek, para penyelidik ini memfokuskan diri untuk mengasingkan spesies yang ditentukan dari spesies mikrob lain di persekitarannya. Di samping itu, mereka berminat untuk menjaga mereka hidup selama mungkin di luar persekitaran semula jadi mereka.

Hari ini, teknik yang tepat telah dikembangkan untuk pengasingan dan pertumbuhan banyak mikroorganisma yang berbeza yang diperoleh dari hampir semua persekitaran di biosfer.

Teknik pengasingan mikroorganisma

Semua pengasingan mikroorganisma bermula dengan pengumpulan sampel di alam liar di mana mikroorganisma yang menarik dijumpai. Tempat-tempat ini boleh menjadi luka pada tisu haiwan atau tumbuhan, tanah atau substrat, genangan air, laut, permukaan seperti kulit, dll.

Sampel diambil dengan menyentuh atau menyokong bekas yang mempunyai medium dengan keperluan yang sesuai untuk pertumbuhan mikroorganisma di permukaan dari mana ia ingin diasingkan. Di dalam bekas ini, anda akan mendapat apa yang dikenali sebagai "budaya" mikrob.

Umumnya, tanaman pertama yang diperoleh dari habitat semula jadi tidak diragukan lagi adalah "tanaman campuran", yaitu tanaman yang terdiri dari sejumlah besar spesies mikroba.

Walau bagaimanapun, kebanyakan spesies mikroorganisma dapat diasingkan antara satu sama lain di makmal, berusaha untuk mendapatkan budaya mikroorganisma di mana hanya spesies yang berminat tumbuh atau, dengan kata lain, memperoleh "budaya murni".

Pada dasarnya, proses yang dilakukan untuk mendapatkan "budaya murni" adalah apa yang dikenal sebagai "pengasingan mikroorganisma".

Terdapat sebilangan besar teknik untuk pengasingan mikroorganisma, dan bahkan ada yang khusus untuk jenis mikroorganisma tertentu. Dalam kes lain, hanya mungkin memperoleh budaya murni hanya dengan mengumpulkan sampel dari persekitaran semula jadi.

Antara teknik pengasingan yang paling banyak digunakan untuk memisahkan spesies minat yang terdapat dalam media budaya campuran adalah:

Goresan atau goresan

Mungkin ini adalah kaedah yang paling banyak digunakan untuk mengasingkan mikroorganisma. Teknik ini terdiri daripada menyediakan medium pepejal steril dengan semua sebatian pemakanan yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisma dalam bekas kaca, seperti piring Petri.

Dengan menggunakan alat yang halus, secara amnya ditunjuk, mikroorganisma yang akan diasingkan dalam budaya campuran disentuh, kemudian, dalam medium pepejal steril, hujung alat yang disentuh mikroorganisma mula meluncur dari sisi ke sisi sepanjang keseluruhan plat nombor.

Ini dilakukan secara berulang-ulang secara intensif di permukaan medium pejal atau pejal, seolah-olah zig-zag. Ia biasanya dilakukan sehingga kira-kira sepertiga diameter agar pada piring ditutup.

Fusion dengan medium atau lapisan

Untuk kaedah ini, pengenceran medium di mana mikroba terkumpul hidup dilakukan sehingga hanya beberapa ratus sel yang tersisa untuk setiap mililiter medium di mana ia dicairkan.

Dari pencairan ini, beberapa mililiter diambil dan dicampurkan dengan medium yang akan ditambahkan ke dalam bekas sebelum ia pekat. Oleh kerana campuran dibuat di antara medium yang diadukan dan medium cair di mana mikroorganisma, mereka tetap merendam di dalam medium dan hanya dapat dilihat sehingga mereka berkembang biak sebagai koloni.

Oleh kerana mereka berkembang sebagai koloni, lebih mudah untuk memisahkannya dari mikroorganisma yang lain dengan kaedah lain seperti menggaru, misalnya.

Pencairan bersiri

Kaedah ini terdiri daripada membuat pengenceran bersiri dari medium di mana mikroorganisma dijumpai. Contohnya ialah pencairan yang dibuat untuk membersihkan Lactococcus lactis atau Lactobacillus acidophilus, bakteria yang bertanggungjawab untuk penghasilan keju dan yogurt.

Kira-kira 1 mililiter diambil dari tiub yang mengandungi susu masam atau yogurt yang ditapai sebelumnya dan mililiter ini diinokulasi ke dalam susu steril tanpa mikroorganisma. Kemudian, kira-kira satu mililiter susu tersebut diambil dan prosesnya diulang.

Ini diulang kira-kira tiga atau empat kali berturut-turut, menjadikannya sangat mungkin untuk mendapatkan Lactococcus lactis atau Lactobacillus acidophilus dalam medium yang diasingkan dari bahan cemar yang mungkin mewakili mikroba lain.

Foto terperinci laman web dan bahan khas untuk mengasingkan mikroorganisma (Gambar oleh Sintija Valucka di www.pixabay.com)

Prosedur pengayaan

Metodologi ini dicapai dengan menumbuhkan mikroorganisma dalam media kultur dengan keadaan yang merangsang atau memudahkan pertumbuhan spesies yang diminati dan, dalam banyak kes, dalam keadaan yang menghalang pertumbuhan mikroorganisma lain yang mencemari.

Bakteria genus Salmonella tumbuh dalam media kultur yang diperkaya dengan selenit, kerana mikroorganisma ini mengubah selenit menjadi selenium untuk memetabolismekannya. Selenit dalam medium menyukarkan pengambilan nutrien untuk mikroorganisma selain salmonella.

Teknik unik atau eksklusif

Ini mungkin teknik yang paling sukar dan paling berkesan untuk mengasingkan mikrob. Ini melibatkan meletakkan setetes medium (sampel) di mana mikroorganisma diletakkan di penutup penutup steril, dan kemudian meletakkannya di tahap mikroskop.

Kemudian, sambil memerhatikan, satu sel dikeluarkan dengan bantuan pipet mikro steril. Titisan diletakkan pada penutup penutup steril lain yang diinkubasi pada suhu yang sesuai untuk mikroorganisma. Akhirnya, ia diperhatikan lagi di bawah mikroskop untuk menunjukkan pertumbuhan.

Sekiranya pada pemerhatian semula sel baru telah dikembangkan dari sel individu yang diambil, sel-sel ini ditambahkan ke medium kultur steril untuk mendapatkan kultur murni yang terasing sepenuhnya.

Teknik tersuai

Terdapat banyak mikroba yang berbeza di planet Bumi yang tersebar di hampir semua ekosistem yang diketahui. Beberapa mikroorganisma dikenali sebagai Extremophiles dan memerlukan keadaan yang unik untuk perkembangan dan pertumbuhannya.

Keadaan yang melampau ini baik dan menguntungkan untuk pengasingan, kerana, walaupun hanya membenarkan pertumbuhan mikroorganisma ini, mereka sukar mencipta semula secara in vitro.

Kepentingan

Pengasingan mikroorganisma telah mewakili salah satu kemajuan terpenting bagi bidang sains dan perubatan. Ini membolehkan manusia mengkaji dan mengembangkan rawatan yang berkesan terhadap patogen mikrob yang berbeza.

Pada masa ini diketahui dengan pasti bahawa mikroorganisma membentuk bahagian penting dari semua ekosistem, sehingga mencapai pengasingan beberapa di antaranya dengan kepentingan relatif bagi manusia membolehkan para penyelidik mempelajarinya secara intensif, untuk memahami secara mendalam peranannya dalam setiap ekosistem.

Rujukan

1. De Kruif, P. (1996). Pemburu mikroba. Houghton Mifflin Harcourt.
2. López, MJ, Nichols, NN, Dien, BS, Moreno, J., & Bothast, RJ (2004). Pengasingan mikroorganisma untuk detoksifikasi biologi hidrolisis lignoselulosa. Mikrobiologi dan Bioteknologi Gunaan, 64 (1), 125-131.
3. Spigno, G., Tramelli, L., Galli, R., Pagella, C., & De Faveri, DM (2005). Biofiltrasi wap diklorometana: pengasingan mikroorganisma.
4. Tresner, HD, & Hayes, JA (1970). Metodologi yang lebih baik untuk mengasingkan mikroorganisma tanah. Permohonan Persekitaran. Mikrobiol. , 19 (1), 186-187.
5. Willey, JM, Sherwood, L., & Woolverton, CJ (2009). Prinsip mikrobiologi Prescott. Boston (MA): Pendidikan Tinggi McGraw-Hill.