The EMB agar adalah terpilih dan sederhana pengkamiran digunakan untuk pengasingan pepejal budaya Gram negatif riba, terutamanya Enterobacteriaceae dan lain-lain bakteria Gram negatif tak berat. Ia juga dikenali dengan akronim EAM, singkatan dari eosin-metilena biru.
Medium ini diciptakan oleh Holt-Harris dan Teague pada tahun 1916. Ia mengandungi peptone, laktosa, sukrosa, dipotassium fosfat, agar, eosin, metilena biru, dan air. Ini sangat mirip dengan MacConkey Agar, terutama ketika menggunakan Levine's Modified EMB Agar, yang tidak mengandungi sukrosa.
Kilauan logam Escherichia coli pada agar EMB Sumber: Carmen Moreno González, dari Wikimedia Commons
Sebenarnya, setiap makmal memutuskan sama ada akan bekerja dengan satu atau yang lain, kerana mereka memenuhi fungsi yang sama, walaupun secara biokimia mereka berbeza.
Ia bahkan mempunyai kelemahan yang sama dengan agar MacConkey klasik dari segi pengeluaran kawanan oleh genus Proteus. Oleh itu, untuk mengelakkan fenomena ini, kepekatan agar dapat ditingkatkan hingga 5%.
Asas
Selektif
EMB agar selektif secara halus kerana mengandungi pewarna aniline (eosin dan metilena biru), yang bertindak sebagai penghambat, mencegah pertumbuhan bakteria Gram positif dan beberapa batang negatif Gram yang cepat.
Walau bagaimanapun, agar ini mempunyai kekurangan bahawa sebilangan bakteria Gram positif dapat menahan kehadiran zat perencat dan tumbuh sebagai koloni tusukan kecil yang tidak berwarna, seperti Enterococcus faecalis dan beberapa Staphylococcus.
Ragi tertentu juga boleh tumbuh, seperti kompleks Candida albicans, yang akan memberi koloni merah jambu yang sangat kecil. Chlamydospores bahkan boleh berkembang dari ragi ini jika sampelnya diberi biji dalam.
Pembezaan
Sebaliknya, agar EMB juga merupakan medium pembezaan, kerana pewarna ini bersama (eosin dan metilena biru) mempunyai sifat membentuk endapan pada pH berasid, oleh itu ia berfungsi sebagai petunjuk pengeluarannya.
Oleh itu, bakteria fermentasi laktosa atau sukrosa yang lemah menghasilkan koloni ungu dalam masa 24 hingga 48 jam. Contohnya genera Klebsiella, Enterobacter dan Serratia.
Bakteria-bakteria yang menumpukan laktosa dengan kuat, seperti Escherichia coli, atau sukrosa, seperti Yersinia enterocolitica atau Proteus penneri, membentuk endapan hitam kehijauan, memberikan ciri khas kilauan logam pada spesies ini.
Perlu diingatkan bahawa jika medium levine EMB (tanpa sukrosa) digunakan, Yersinia enterocolitica dan Proteus penneri akan menghasilkan koloni yang jelas.
Bakteria yang tidak fermentasi laktosa atau sukrosa disuburkan oleh kehadiran pepton, yang menyediakan asid amino dan nitrogen yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteria, dan menghasilkan koloni yang jelas. Contohnya, genera Salmonella dan Shigella, antara lain.
Begitu juga, penting untuk diperhatikan bahawa genus Acinetobacter dapat menyajikan koloni biru lavender, walaupun bukan fermentasi laktosa atau sukrosa, tetapi mempunyai sifat membetulkan biru metilena di dinding selnya. Ini juga boleh berlaku dengan bakteria oksidatif yang lain.
Penyediaan
Medium dehidrasi yang asli berwarna kuning muda.
Untuk menyediakan medium kultur ini, 36 gram medium dehidrasi mesti ditimbang dan digantung dalam termos yang mengandungi satu liter air suling.
Setelah membiarkan campuran berehat selama 5 minit, bawa termos ke sumber panas, kacau dengan kuat dan berterusan sehingga mendidih dan larut sepenuhnya.
Selepas itu, medium kultur yang sudah larut mesti disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121 ° C selama 15 minit.
Pada akhir masa, ia dikeluarkan dari autoklaf dan dibiarkan berdiri sebentar. Kemudian, masih suam (45-50 ° C), 15-20 ml agar-agar disajikan dalam setiap hidangan Petri yang steril. Medium hendaklah berwarna biru biru.
Setelah dihidangkan pinggan dibiarkan tidak ditutup sehingga agar sejuk sedikit. Mereka kemudian ditutup dan dibiarkan padat sepenuhnya. Selepas itu, mereka disusun dalam pemegang piring terbalik dan disimpan di dalam peti sejuk (8 ° C) sehingga digunakan.
Prosedur ini sebaiknya dijalankan di tudung aliran lamina atau di hadapan pembakar Bunsen untuk mengelakkan pencemaran.
Penting untuk diingat bahawa setiap rumah komersial akan menunjukkan jumlah yang akan ditimbang untuk menyiapkan media budaya.
PH akhir medium mestilah 7.2 ± 0.2
Permohonan
Medium ini digunakan untuk menabur urin dan najis atau jenis spesimen klinikal apa pun, terutamanya jika kehadiran basil Gram-negatif yang tidak cepat dicurigai, seperti bacilli milik keluarga Enterobacteriaceae, yang tumbuh dengan baik pada medium ini.
Bakteria enteropatogenik dari Shigella dan Salmonella genera dibezakan oleh koloni mereka yang tidak berwarna atau sedikit ambar.
Basil penapaian non-laktosa lain seperti Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, antara lain, juga tumbuh.
Begitu juga, media ini sangat berguna dalam analisis mikrobiologi makanan dan air, kerana sangat sesuai untuk fasa pengesahan penentuan koliform, iaitu untuk mengesahkan kehadiran E. coli dari kaldu EC keruh, dari teknik nombor yang paling mungkin (MPN).
QA
Untuk mengesahkan bahawa medium kultur yang baru disiapkan berfungsi dengan baik, regangan kawalan dapat ditanam untuk memerhatikan ciri-ciri koloni dan mengesahkan bahawa ia memberi seperti yang diharapkan.
Untuk ini, strain ATCC atau strain E. coli yang dikenali dengan baik, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa dan beberapa bakteria Gram positif, seperti S. aureus, dapat digunakan.
E. coli dijangka menghasilkan koloni biru-hitam yang berkembang dengan baik dengan kilauan logam hijau. Sedangkan, Enterobacter aerogenes dan Klebsiella sp semestinya memberi koloni mukosa hitam kebiruan yang berkembang dengan baik.
Sebaliknya, Salmonella typhimurium dan Shigella flexneri, mesti mengembangkan koloni besar, tidak berwarna atau dengan sedikit warna kuning.
Akhirnya genus Pseudomonas aeruginosa tumbuh sebagai koloni yang tidak berwarna dengan ukuran yang tidak teratur, sedangkan bakteria Gram positif harus dihambat sepenuhnya atau tumbuh jarang dengan koloni yang sangat kecil.
Pemikiran terakhir
Kadang kala pensterilan menyebabkan biru metilen dikurangkan, menunjukkan warna oren sederhana. Agar biru metilena mengoksidasi dan memulihkan warna ungu, ia mesti dicampur dengan lembut sehingga warnanya pulih.
Juga, setelah pensterilan, pewarna boleh memendam, jadi ia mesti dicampur dengan baik sebelum menghidangkan piring Petri.
Rujukan
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B dan Velázquez O. 2009. Teknik Analisis Mikrobiologi Makanan. Edisi ke-2. Fakulti Kimia, UNAM. Mexico.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterisasi dan Taburan Strain Escherichia coli Berpotensi Patogen yang Diasingkan dari Ayam Broiler dari Ladang Unggas di Peru. Pendeta investiga. doktor haiwan. Peru 2012 23 (2): 209-219. Terdapat di: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eosin dan Methylene Blue Agar. 2010. Terdapat di: condalab.com
- Makmal Britannia. Levine EMB (Dengan Eosin dan Methylene Blue) 2011. Terdapat di: britanialab.com
- Makmal BD. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Diubahsuai. 2013. Terdapat di: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologi. (Edisi ke-5.) Argentina, Editor Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosis Mikrobiologi Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Pengarang Panamericana SA