PEMBURUAN DARAH: CIRI, JENIS, TEKNIK DAN HISTOLOGI - BIOLOGI - 2024

The smear darah ialah smear darah periferi yang digunakan untuk menganalisis komponen di dalam peredaran darah. Pemerhatian smear darah memberikan data hematologi yang sangat berguna untuk diagnosis dan tindak lanjut dari banyak patologi.

Smear darah memungkinkan untuk mengukur jumlah pelbagai jenis sel darah putih (formula leukosit), dan juga memungkinkan analisis morfologi dan bentuk eritrosit, leukosit dan platelet.

Penyediaan smear darah. Sumber: Darah di gelas makmal. Domain AwamPictures.net

Di dalamnya, kelainan jumlah sel dapat dikesan, seperti: leukositosis atau leukopenias, limfositosis atau limfopenia, neutrofilia atau neutropenia, trombositosis atau trombositopenias dan eosinofilia. Kelainan saiz dan bentuk sel juga dapat dilihat.

Selain itu, adalah mungkin untuk mengesan pelbagai jenis anemia, leukemia, dan jangkitan bakteria atau parasit darah.

Untuk ini, terdapat pelbagai jenis smear yang dilakukan bergantung pada tujuan kajian. Terdapat smear nipis dan smear tebal. Smear ini berbeza dalam teknik pelaksanaan dan tujuan kajian.

Mereka yang mengalami titisan halus digunakan sebagai tambahan untuk menyelesaikan hematologi. Ini memberikan data mengenai formula leukosit, selain analisis bentuk dan morfologi tiga siri sel yang membentuk darah: seri merah, siri putih dan platelet. Walaupun mereka juga berfungsi sebagai pelengkap kajian filem darah tebal.

Filem tebal digunakan untuk diagnosis penyakit yang disebabkan oleh hemoparasit, seperti malaria atau malaria, toxoplasmosis, leishmaniasis, penyakit Chagas, babesiosis dan mikrofilariasis.

Ciri-ciri smear darah

Pemburuan darah yang baik mesti memenuhi ciri-ciri tertentu. Antaranya kita dapat menyebutkan:

-Sampel mesti memenuhi syarat kualiti minimum untuk menjadi wakil.

-Pensampelan mesti dilaksanakan dengan baik.

-Tepat pelaksanaan smear.

-Jika dilakukan dengan darah vena, gunakan antikoagulan yang tidak merosakkan sel dan campurkan tiub sebelum membuat smear.

-Jika dilakukan dengan darah kapilari, buang titisan pertama.

-Penyebaran mestilah homogen. Ini memastikan bahawa sel-sel diedarkan secara merata dan sel darah dapat dianalisis dengan baik untuk bentuk dan bilangannya.

-Sisi smear hendaklah licin dari awal hingga akhir.

-Lekapan mesti menghormati margin 1 hingga 2 mm ke sisi slaid.

-Lapisan penyebaran secara beransur-ansur berkurang dalam ketebalan dari awal hingga akhir (smear dengan penurunan halus dengan kaedah slaid).

-Ia mesti dilabel dengan betul untuk mengelakkan kekeliruan sampel.

-Betulkan dan noda dengan betul untuk pemerhatian unsur darah yang jelas.

-Biarkan smear kering dengan baik sebelum memasang sediaan di bawah mikroskop. Meletakkan minyak rendaman pada smear basah akan menyebabkan pembentukan misel yang menghalang sel-sel daripada dilihat.

Jenis smear darah

Smear darah periferal dapat diklasifikasikan menjadi smear nipis dan smear tebal. Mereka yang mempunyai lapisan nipis digunakan untuk kajian formula leukosit dan pemerhatian morfologi sel darah. Bakteria ekstraselular seperti borrelia dan hemoparasit intraselular, seperti plasmodium, antara lain, juga dapat dilihat.

Pada gumpalan halus, spesies parasit dapat dikenal pasti, oleh itu, ini adalah teknik yang lebih spesifik daripada gumpalan tebal, tetapi gumpalan tebal lebih sensitif, kerana ini adalah teknik konsentrasi yang digunakan untuk pencarian lengkap untuk hemoparasit ekstraselular.

Terdapat dua jenis smear yang halus: yang dilakukan pada slaid dan yang dilakukan pada penutup muka. Smear tebal dilakukan pada slaid.

Teknik mengambil sampel darah

Pemburuan darah dapat dibuat dari tusukan kapiler atau sampel vena yang diambil dengan antikoagulan. Sekiranya dilakukan dari darah dengan antikoagulan, smear dapat disiapkan sehingga 2 jam setelah mengambil sampel.

Perhatian harus diambil untuk menggunakan antikoagulan yang tidak merosakkan sel darah. Pilihan terbaik ialah EDTA. Sebaliknya, penggunaan antikoagulan seperti trisodium sitrat harus dielakkan.

Sekiranya sampel diambil dengan tusukan kapilari, smear harus dilanjutkan dengan segera, sebelum darah membeku.

Titisan pertama harus dibuang, membiarkan titisan berikutnya melarikan diri secara spontan untuk mengelakkan pencairan sampel dengan cecair tisu. Ini adalah teknik yang paling disyorkan untuk memerhatikan morfologi sel, kerana darah tidak mempunyai bahan tambahan.

Untuk pemerhatian hemoparasit, Solari et al. Disimpulkan dalam karya penyelidikan mereka bahawa kedua-dua teknik (venipuncture dan kapilari) sama-sama berkesan.

Jenis pengambilan darah: A. Tusukan kapilari. B. Tusukan vena. Sumber: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Teknik untuk menyiapkan darah

Pemburuan darah dapat dilakukan secara manual pada slaid mikroskop atau pada selongsong atau slaid. Ia juga boleh dilakukan melalui peralatan automatik.

-Slaid smear

Ini adalah teknik yang disukai oleh kebanyakan makmal kerana pengendaliannya yang mudah.

Dengan menggunakan pipet Pasteur, letakkan setetes darah yang tidak terlalu tebal atau sangat halus di tengah satu hujung slaid yang bersih.

Smear dibuat dengan bantuan slaid lain dengan hujung tanah. Slaid kaca tanah diletakkan tegak lurus ke hujung yang berlawanan dari tempat penurunan itu berada.

Ia condong ke sudut antara 30 - 45 ° dan meluncur ke arah penurunan; Apabila disentuh, ia mengembang secara linier di tepi gelongsor tanah dan dengan pergerakan yang tetap dan pasti lembaran itu kembali; sebelum sampai ke hujung slaid diangkat.

Dengan cara ini, lapisan homogen tersebar di permukaan slaid penerima.

Smear dibiarkan kering. Ia kemudian diperbaiki dan diwarnai dengan noda pilihan. Biarkan kering dengan baik sebelum melihat di bawah mikroskop. Setetes minyak diletakkan di wajah yang menunjukkan smear dan diperhatikan di bawah mikroskop cahaya.

Pembuangan darah pada slaid. Gambar teratas: smear yang tidak ternoda. Imej yang lebih rendah: smear berwarna. Sumber: Coinmac

Bahagian smear dibuat pada slaid

Dalam jenis smear ini, tiga kawasan yang ditentukan dapat dibezakan: kepala, badan dan ekor. Kepala sesuai dengan kawasan di mana smear bermula, ia adalah kawasan paling tebal dan tidak bagus untuk diperhatikan.

Tubuh adalah bahagian tengah atau pertengahan smear, ia adalah kawasan terbaik untuk diperhatikan di bawah mikroskop, kerana di sana sel-sel diedarkan secara seragam dan morfologi mereka terpelihara.

Ekor sesuai dengan bahagian akhir smear; di sini pengedarannya tidak lagi seragam dan morfologi eritrosit cenderung hilang.

Kawalan kualiti dalam teknik slaid

Dalam teknik ini memainkan peranan asas:

-Membersihkan dan menghilangkan degenerasi slaid: ia menjamin slaid sampel yang baik.

-Saiz tetes: dengan tetes yang sangat besar, smear yang lebih tebal dan lebih panjang akan diperoleh, dengan penurunan yang sangat kecil penyebarannya akan menjadi lebih pendek dan sangat halus.

-Kelajuan yang diterapkan dalam peluasan: semakin rendah kelajuan smear akan semakin tipis, semakin tinggi kelajuannya akan semakin tebal.

-Sudut pelaksanaan: semakin kecil sudut semakin halus, semakin besar sudut semakin tebal.

-Langkah penutup selipar

Ia tidak digunakan secara meluas kerana penanganan selimut yang rapuh tidak membebankan, namun ia menawarkan kelebihan yang besar, kerana pengedaran sel yang lebih baik diperoleh sepanjang smear.

Titisan yang tidak terlalu tebal, tidak terlalu halus diletakkan di bahagian tengah selimut. Segera penutup yang lain diletakkan di atasnya sedemikian rupa sehingga hujung kedua penutup kepala menonjol, membentuk bintang.

Penurunan secara spontan akan tersebar di permukaan kedua penutup penutup. Di hujung peluasan, setiap slaid diluncurkan ke seberang antara satu sama lain (satu di sebelah kanan dan yang lain ke kiri) dengan cepat.

Teknik ini memberikan dua smear dan bukannya satu.

Mereka diletakkan hingga kering dengan penyebaran ke atas. Setelah kering, ia diperbaiki dan diwarnai dengan teknik pilihan. Biarkan sehingga kering. Setetes minyak rendaman diletakkan pada slaid, smear diletakkan dengan sisi smear ke bawah, dan dilihat di bawah mikroskop.

Kawalan kualiti dalam teknik selimut

Untuk mendapatkan smear yang baik untuk teknik ini, penting untuk:

-Membersihkan selimut (membantu sampel meluncur dengan lancar).

-Saiz tetesan (mempengaruhi ketebalan smear).

-Kelajuan pemisahan penutup ditutup (mempengaruhi homogenitas penyebaran).

-Dengan peralatan automatik

Mereka boleh dilakukan melalui mana-mana pasukan ini: Spinner dan Autoslide.

Spinner terdiri daripada meletakkan slaid dengan setetes darah di piring empar khas. Sampel disentrifugasi pada kelajuan tinggi; dengan cara ini, sampel yang homogen dan halus terbentuk. Ini mempunyai kelemahan kemungkinan hemolisis sampel.

Autoslide adalah instrumen yang secara mekanikal melakukan pergerakan untuk pelaksanaan smear pada slaid. Anda juga boleh memperbaiki dan mengotorkan noda. Ia bahkan dapat disesuaikan dengan beberapa kaunter hematologi automatik.

Teknik smear tebal

Untuk mencari hemoparasit, disyorkan dua smear: satu dengan titisan halus dan satu lagi dengan titisan tebal.

Lakukan tusukan kapilari, bersihkan titisan pertama. Letakkan titisan halus pada slaid dan smear seperti yang dijelaskan sebelumnya. Untuk manik tebal, letakkan manik besar di slaid lain dan sebarkan ke kotak berukuran 1,55 mm. Biarkan kedua-dua smear kering.

Pewarnaan smear

Noda Giemsa atau Wright antara lain boleh digunakan untuk titisan halus. Pewarnaan Giemsa atau May-Grunwald Giemsa disyorkan untuk lekapan tebal.

Noda Giemsa

Smear diperbaiki selama 3 minit dengan metanol, disalirkan dan dibiarkan kering semula. Smear kemudian ditutup dengan noda Giemsa selama 10-15 minit. Ia dibasuh dengan air suling dan dibiarkan kering. Untuk melihat di bawah mikroskop, setitik minyak rendaman diletakkan.

Noda Wright

Smear ditutup dengan noda Wright selama 5 minit. Buang dan letakkan larutan penyangga pada pH 6.8 selama 6 minit. Tiup penyediaan untuk homogenisasi. Basuh dengan air suling dan biarkan kering. Perhatikan di bawah mikroskop.

Jenis smear yang rosak

Ia berlaku pada pelatih dalam teknik penurunan halus dengan slaid.

Smear dengan kawasan dengan ketebalan berbeza (nipis dan tebal bersilang)

Ini kerana pergerakan yang dilakukan tidak berterusan semasa penyebaran, membuat berhenti dan dimulakan semula.

Smear smear yang sangat pendek

Mereka mempunyai 2 sebab: satu disebabkan oleh fakta bahawa slaid tanah telah diangkat sebelum sampai ke hujung slaid yang lain. Dalam kes ini sangat tebal dan pendek.

Sebaliknya, jika smear pendek tetapi nipis, ini kerana ukuran tetesnya sangat kecil.

Lumurkan dengan kawasan yang kasar pada hujung smear

Ia mempunyai beberapa sebab: salah satunya ialah tepi tanah rusak, tekanan yang diberikan pada slaid penerima meningkat pada saat penyebaran atau tepi tanah slaid dipakai.

Smear dengan pembentukan vakuola atau kawasan bulat atau elips yang jelas

Mereka disebabkan oleh penggunaan smear berminyak (kurang dicuci dan dilenyapkan).

Smear yang sangat tebal atau sangat nipis

Titisan yang terlalu besar akan menghasilkan smear yang sangat tebal dari awal hingga akhir dan titisan yang sangat kecil akan menghasilkan smear yang sangat halus.

Histologi

Sel darah dapat dilihat dalam darah. Antaranya ialah:

-Erythrocytes atau sel darah merah

Darah manusia, eritrosit atau sel darah merah dan dua sel darah putih. Diambil dan diedit dari: Viascos. Pemerhatian anda sangat penting. Pada tahap ini, anemia, talasemia, penyakit sumsum tulang dan lain-lain dapat dikesan.

Bilangan eritrosit atau sel darah merah kira-kira 5 x 10 ⁶ mm3 pada lelaki dan 4.5 x 10 ⁶ pada wanita. Sel darah merah berbentuk seperti cakera biconcave, dengan pucat fisiologi pusat. Mereka boleh dilihat secara berasingan (normal) atau membentuk timbunan rouleaux (tidak normal).

Smear juga menunjukkan poikilositosis (sel darah merah pelbagai bentuk), anisositosis (sel darah merah pelbagai saiz), anisopoikilositosis (pelbagai bentuk dan ukuran), anisokromia (warna yang berbeza), eritroblas (sel darah merah belum matang), mikrositosis (sel darah merah yang lebih kecil) ) dan makrocytes (eritrosit yang lebih besar).

Apabila mereka menunjukkan kekurangan jumlah hemoglobin dan pucat pusat meningkat, dikatakan terdapat hipokromia. Apabila siri merah normal diperhatikan, ia akan dilaporkan sebagai normositik dan normokromik.

-Sel darah atau leukosit putih

sel darah putih

Amaun normal antara 5,000 hingga 10,000 mm ³ . Mereka diubah dalam proses menular, alergi dan leukemia. Beberapa jenis dapat dibezakan dalam smear darah, yang dijelaskan di bawah.

Neutrofil bersegmen

Mereka mewakili 55-65% daripada jumlah leukosit. Mereka mengukur antara 10-15 μm. Mereka memiliki nukleus yang tersegmentasi atau melengkung yang menggunakan morfologi yang berlainan, oleh itu ia disebut polimorfonuklear.

Mereka mempunyai butiran neutrofil yang berlimpah di sitoplasma mereka dan beberapa azurofil. Mereka meningkat dalam jangkitan bakteria (neutrophilia), penurunan jangkitan virus (neutropenia).

Keabnormalan morfologi seperti pleokaryocytosis (inti segmen hiper), lengkungan (sel belum matang) atau polis makro (berbentuk bujur dan besar) dapat dilihat.

Perubahan lain:

-Penggredan toksik

-Pseudo Pelger neutrofil (nukleus tidak menimbulkan pergolakan atau mereka berdenyut).

-Dohle badan: kemasukan sitoplasma biru gelap.

-Meningkatkan basofilia sitoplasma.

-Vakuola intersitoplasma.

- Picnosis selular (kehilangan jambatan nuklear).

Eosinofil bersegmen

Mereka mewakili 1-3% daripada jumlah sel darah putih. Mereka berukuran 9-10 μm. Mereka dicirikan oleh adanya butiran sitoplasma asidofilik yang banyak dan sedikit azurofil. Nukleusnya mempunyai dua putaran. Jumlah mereka meningkat dalam alahan dan penyakit yang berasal dari parasit.

Basofil bersegmen

Mereka sangat jarang berlaku, mewakili 0-1% leukosit. Mereka berukuran 10-12μm. Nukleus biasanya tidak teratur dalam margin dan mungkin berlubang, tetapi tidak diperhatikan kerana banyaknya granul kasar basofilik dalam sitoplasma. Jarang sekali, basofilia dapat dilihat.

Limfosit

Mereka adalah sel kecil dengan sitoplasma basofilik, dengan nukleus, jelas, bulat, dengan kromatin pekat. Inti merangkumi hampir keseluruhan sel. Mereka mewakili 26-40% leukosit darah. Mereka meningkat dalam jangkitan virus (limfositosis). Limfosit reaktif dapat dilihat.

Monosit

Sel lebih besar daripada limfosit, dengan sitoplasma lebih besar dan lebih longgar, inti kromatin bujur. Mereka berukuran 9-12μm. Sitoplasma berlimpah dan biasanya berwarna biru kehijauan pucat dengan teknik pewarnaan standard. Monosit dan monositosis vakuola dapat diperhatikan di antara perubahan tersebut.

-Platelet

Mereka mengukur antara 1.5-3 μm. Bentuknya bulat atau bujur. Nilai normal antara 150,000 hingga 350,000 platelet / mm3. Mereka boleh berkurang dalam beberapa jangkitan virus. Mereka tidak mempunyai inti dan berwarna ungu. Kelainan dapat dilihat dalam siri ini, seperti platelet makro atau mikro, trombositosis atau trombositopenia, dan serpihan platelet.

Unsur patologi

Parasit darah

Hemoparasit, seperti agen penyebab malaria atau malaria (parasit genus Plasmodium), dapat dilihat pada darah. Atas sebab ini, adalah penting bahawa smear dianalisis secara manual, kerana peralatan automatik kehilangan penemuan ini.

Bakteria

Dalam patologi seperti demam kambuh atau penyakit Lyme, agen penyebabnya dapat diperhatikan. Dalam kes ini, ini sesuai dengan Borrelia recurrenti spirochetes dan Borrelia burgdorferi dalam smear darah.

Sel yang belum matang

Kes-kes yang teruk diperhatikan pada leukemia, reaksi leukemoid, dan reaksi leukoerythroblastic, antara lain. Dalam jangkitan bakteria mungkin terdapat sedikit penyimpangan ke kiri (kehadiran penjahat). Erythroblast juga dapat dilihat pada beberapa anemia.

Rujukan

1. Darah dan tisu hematopoietik. Terdapat di: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Malaikat. Tafsiran makmal klinikal. Edisi ke-8. Editorial Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Akaun A. Perbandingan ketumpatan parasit dalam penurunan darah vena tebal berbanding akupresur dalam diagnosis Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Terdapat di: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Kepentingan kajian mengenai smear darah periferal pada orang tua. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Terdapat di: scielo.sld
5. Grinspan S. Kajian mengenai smear darah periferal. Melanjutkan pendidikan perubatan. Terdapat di: bvs.hn/RMH