PENYEDIAAN MEDIA BUDAYA: OBJEKTIF DAN LANGKAH - BIOLOGI - 2025

The penyediaan media budaya adalah suatu kaedah yang rutin digunakan di makmal untuk pertumbuhan mikroorganisma dikehendaki. Media kultur adalah sediaan pepejal, cair atau separa pepejal yang mempunyai semua nutrien yang diperlukan untuk perkembangan populasi mikroba.

Secara umum, cara untuk menanam mikroorganisma kaya dengan protein dan asid amino dan biasanya mengandungi beberapa komponen yang menyokong pertumbuhan organisma yang akan dikaji, seperti vitamin, darah, serum, antara lain.

Sumber: pixabay.com

Tidak ada media budaya umum atau universal, kerana komposisinya berbeza-beza bergantung pada keperluan mikroorganisma yang diminati. Sebilangan bakteria boleh tumbuh di mana-mana medium kultur, tetapi yang lain mempunyai keperluan khas.

Apa itu terdiri?

Mikroorganisma, seperti kulat dan bakteria, tidak dapat dikaji secara individu kerana ukurannya yang kecil. Atas sebab ini, mereka mesti ditanam dengan cara buatan yang memungkinkan peningkatan populasi yang ketara.

Sebagai contoh, jika kita ingin mengkaji bakteria, kita harus memberi mereka keadaan yang tepat sehingga mereka dapat berkembang biak dan membentuk koloni (yang dapat diperhatikan dengan mata kasar).

Penyediaan media kultur berbeza-beza bergantung pada jenis mikroorganisma yang akan ditanam. Sebelum menyiapkannya, perlu mengetahui keperluan pemakanan asas organisma kerja.

Komponen yang paling biasa digunakan dalam media budaya akan dijelaskan di bawah untuk mendapatkan idea umum mengenai penyediaannya:

Agar

Ia digunakan dalam kultur sebagai agen pelekat dan ditambahkan ketika mencari medium padat atau separa pepejal. Ejen pemejalan pertama yang digunakan dalam penyediaan media adalah gelatin, tetapi pada tahun 1883 agar diperkenalkan kepada dunia bakteriologi oleh W. Hesse.

Agar bakteriologi mempunyai komponen utama polisakarida dengan cabang kompleks yang diekstrak dari alga. Sebatian ini digunakan sebagai pengental dalam makanan biasa seperti ais krim dan jem.

Ini adalah elemen yang sangat berharga dalam mikrobiologi kerana beberapa sebab. Terutama kerana mikroorganisma tidak dapat menurunkannya, ia mencair pada suhu 100 ° C dan tetap dalam keadaan cair sehingga mencapai 45 ° C atau kurang.

Sekiranya anda ingin menyediakan medium pejal, kepekatan agar hendaklah sekitar 1.5%, sementara semisolid harus disiapkan dari 0.3 hingga 0.5%.

Cecair

Penanaman organisma patogen memerlukan cairan tubuh sehingga dapat berkembang seperti yang berlaku di persekitaran semula jadi mereka. Atas sebab ini, darah utuh atau defibrilasi ditambah. Cecair diambil dari haiwan yang sihat dan, setelah disterilkan, ia ditambahkan ke media kultur.

Petikan

Mereka diperoleh dari bahagian haiwan yang berlainan (seperti daging atau hati) atau sayur-sayuran (biji) dan diproses untuk mendapatkan pekat padat dalam bentuk pasta atau serbuk. Yang paling biasa adalah ragi, malt, dan daging.

Peptones

Sebatian organik ini diperoleh dengan hidrolisis enzimatik atau kimia tisu haiwan atau tumbuhan. Tujuannya adalah untuk menambahkan kandungan yang kaya dengan asid amino, yang merupakan unit asas protein.

Penyerap kejutan

Sistem "penyangga" atau penyangga menghindari perubahan pH secara mendadak dan membantu mengekalkan jarak optimum yang dapat ditoleransi oleh tubuh.

Sebilangan besar organisma dapat berkembang dengan baik pada pH 7, walaupun sebilangan bakteria lebih suka media alkali. Namun, ada bakteria yang menentang variasi pH antara nilai 6 dan 9.

Pada spesies sensitif pH, kerosakan tidak disebabkan oleh jumlah ion hidrogen atau hidroksil yang berlebihan, tetapi oleh peningkatan asid atau basa lemah yang dapat memasuki sel.

Begitu juga, penunjuk pH ditambahkan untuk memantau dan mengelakkan penyimpangan yang disebabkan oleh proses penapaian atau proses lain.

matlamat

Objektif utama semasa menyediakan media kultur adalah untuk menambahkan semua komponen yang diperlukan untuk membolehkan perkembangan organisma berjaya diasingkan. Kombinasi komponen dan nutrien yang paling berkesan untuk mencapai medium yang diinginkan mesti dikenal pasti.

Penyediaan dan penyimpanan medium sangat penting untuk memastikan pertumbuhan yang berjaya, kerana komposisi medium dan ketersediaan nutrien bergantung pada langkah-langkah ini.

Perlu diambil kira bahawa penanaman mikroorganisma adalah tugas yang dipengaruhi oleh beberapa faktor di luar medium kultur, seperti intensiti cahaya yang diterima, suhu dan tahap keasidan atau kealkalian medium. Oleh itu, setiap pemboleh ubah ini mesti diambil kira.

Jenis media

Berdasarkan komposisinya

Berdasarkan komposisi mereka, terdapat tiga jenis tanaman utama: media sintetik atau kimia semula jadi atau empirik, separa sintetik, dan yang ditentukan.

Persekitaran semula jadi

Dalam persekitaran semula jadi komposisi yang tepat tidak diketahui. Ini termasuk bahan-bahan seperti susu, darah cair, jus sayur-sayuran, ekstrak dan penyediaan daging dan peptone. Atas sebab ekonomi, komponen yang murah seperti ekstrak soya, whey, molase, dan lain-lain sering ditambah.

Media separa sintetik

Ia dipanggil medium semi-sintetik jika komposisinya diketahui sebahagiannya. Mana-mana medium yang mengandungi agar menjadi medium semi-sintetik.

Antaranya kita mempunyai agar dekstrosa kentang, agar czapek-dox, agar oat, agar peptone daging, antara contoh lain.

Medium sintetik atau kimia

Dalam kes ini, komposisi medium - dari segi jumlah sumber karbon, nitrogen, sulfur, fosforus dan faktor pertumbuhan lain yang diperlukan - diketahui sepenuhnya. Ia sangat berguna jika anda ingin mendapatkan hasil yang boleh dibuat semula untuk penyelidik lain.

Untuk apa yang disebut "mikroorganisma dengan keperluan pertumbuhan khas" adalah perlu untuk menambahkan komponen yang diperlukan. Contoh jenis ini ialah Lactobacillus.

Berdasarkan jenis mikroorganisma

Begitu juga, terdapat klasifikasi lain untuk media budaya berdasarkan jenis mikroorganisma yang boleh tumbuh di atasnya. Mengikut prinsip ini, kita mempunyai kaedah umum, pengayaan, selektif dan perbezaan berikut. Masing-masing diterangkan di bawah:

Media am

Ini menyokong pengembangan pelbagai mikroorganisma. Sekiranya ada organisma yang memerlukan syarat khas untuk pertumbuhannya, ia tidak akan berjaya berkembang dalam budaya jenis ini.

Media pengayaan

Media pengayaan menyokong pertumbuhan jenis mikroorganisma tertentu, tetapi tidak ada bahan yang ditambahkan untuk mencegah jenis mikrob lain tumbuh di dalamnya.

Media selektif

Mereka mencari pertumbuhan spesifik mikroorganisma, menyebutnya kulat, bakteria, protozoa, antara lain. Untuk melakukan ini, mereka menghalang perkembangan orang lain.

Untuk mencapai objektif ini, sebatian kimia yang mematikan bagi sekumpulan mikroorganisma yang luas dan tidak berbahaya bagi organisma yang menarik dapat ditambahkan, atau dengan menambahkan sumber tenaga yang hanya dapat diasimilasi oleh mikroba yang dicari.

Media selektif digunakan semasa mengambil sampel perubatan untuk menumbuhkan mikroorganisma patogen. Di sini adalah perlu untuk mendorong pertumbuhan patogen dan menghalang perkembangan flora mikroba normal dari pesakit.

Agar bismut sulfite, misalnya, tidak membenarkan pertumbuhan bakteria gram positif dan sebilangan besar bakteria yang terdapat di rongga gastrointestinal. Atas sebab ini, ia digunakan untuk menumbuhkan bakteria gram-negatif yang menyebabkan demam kepialu, Salmonella typhi dalam sampel tinja.

Media pembezaan

Jenis ini menggunakan beberapa ciri diagnostik organisma yang menarik (keanehan dalam metabolisme, misalnya) untuk dapat mengenal pasti mereka terhadap spesies lain yang tumbuh di persekitaran yang sama.

Media pembezaan dan media selektif sangat berguna dalam bidang mikrobiologi klinikal dan kesihatan awam, kerana disiplin ini perlu mengesan kehadiran mikroorganisma tertentu yang berkaitan dengan patologi atau keadaan kebersihan yang buruk.

Bahan penunjuk dapat ditambahkan ke dalam budaya yang memberikan ciri khas untuk koloni yang dicari. Sebagai contoh, laktosa dan penunjuk pH ditambahkan ke agar-eosin-metilena biru (disingkat EMB) dan agar MacConkey.

Oleh itu, apabila koloni berkembang di media ini dengan kemampuan fermentasi laktosa dan menghasilkan aldehid, mereka dapat diperhatikan dalam warna khas.

Langkah-langkah

Pada masa ini media budaya boleh dibeli dalam bentuk liofilisasi. Oleh itu, penyediaannya lebih mudah dan satu-satunya perkara yang perlu dilakukan adalah menghidupkan semula produk. Kandungan mesti ditimbang (dengan mengambil kira kuantiti akhir yang akan disediakan) dan dilarutkan dalam air suling mengikuti semua petunjuk produk.

Kandungan media cecair mesti dibahagikan kepada bekas yang dikehendaki (piring Petri, tiub, dll.) Untuk pensterilan berikutnya. Untuk menyebarkan medium pepejal, perlu mencairkannya menggunakan ketuhar gelombang mikro atau meletakkan bahan tersebut ke tempat mandi air. PH medium mesti disesuaikan.

Biasanya agar digunakan dalam tabung uji atau piring Petri. Sekiranya agar menguat dalam kedudukan condong, dengan sudut yang betul sehingga tepi terminal akhir diagonal, susunan ini dikenali sebagai paruh atau tiub condong. Apabila agar padat dalam kedudukan menegak sama sekali, ia disebut "dalam".

Setelah mensterilkan media - menggunakan autoklaf - mereka dibiarkan sejuk. Ini mesti ditangani dalam lingkungan yang bebas daripada mikroorganisma, yang paling umum adalah bekerja dengan lampu yang menyala yang memastikan persekitaran aseptik di sekitarnya.

Rujukan

1. Celis, JE (2006). Biologi sel: buku panduan makmal (Jilid 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: diagnosis mikrobiologi. Perubatan Pan-Amerika.
3. Olivas, E. (2004). Manual Amalan Mikrobiologi I dan II dan Parasitologi. Universiti Autonomi Ciudad Juarez.
4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). Mikrobiologi am. Akhbar Universiti Cambridge.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Pengenalan mikrobiologi. Panamerican Medical Ed.